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Les analyses microbiologiques : Ces analyses ont été effectuées au niveau de la

Les analyses microbiologiques : Ces analyses ont été effectuées au niveau de laboratoire d’entreprise IFFCO. Les tests auxquels sont soumises les mayonnaises destinées à la consommation humaine sont : 1. Recherche des Coliformes Fécaux. 2. Recherche des Germes totaux. 3. Recherche des Lactobacillus. 4. Recherche des Staphylococcus aureus. 5. Recherche des levures et moisissures. Materiel: 1. Flacons sterile 2. Pipette 1ml en plastique stérilisée 3. Pipette 10ml en verre 4. Balance électrique 5. Boites pétries 6. Bec benzène 7. Bain marie Le milieu gélosé est fondu dans un bain marie à 100°C puis refroidi à environ 45 à 55°C, on va utilisé :  Gélose Pca= Pour les germes totaux  Gélose Vrbl=Pour les coliformes fécaux  Gélose sabouraud chloramphénicol= Pour les levures et moisissures  Gélose MRS=Pour les Lactobacillus Préparation de la suspension mère : -On Prélève aseptiquement à l’aide d’une balance électrique 10 g à partir des 4 échantillons à analyser et on ajoute dans un flacon gradué stérile, 90ml de diluant (bouillon TSE); enfin on mélange pendant 2 ou 3 minutes, jusqu’à l’obtention d’un mélange homogène. 1. Dénombrement des germes totaux (N.A 1207) Principe : Il consiste à prendre 1 ml de la suspension mère et l’incorporer dans un milieu solide P.C.A (plat count Agar), préalablement fondu pour dénombrement. Technique : Porter 1ml de la suspension mère avec une pipette stérile dans les boites de pétri vides et stériles inscrite toutes information, puis on fait couler environ de 20ml de la gélose P.C.A fondu dans les boites de pétri, on mélange l’inoculum au milieu en faisant des mouvements rotatoires ou circulaires. incubation ꓽ30 °C pendant 24 à 48 h Lecture : Les colonies se présentent sous forme lenticulaires en masse . on ne dénombre que les boites contenant entre 3 et 300 colonies. 2. Dénombrement des levures et moisissures (ISO 20128) Principe Les moisissures sont des hétérotrophes, aérobies, acidophiles (pH de développement comprise entre 3et 7) et mésophiles (Température de croissance de 20 à 30°C). Les levures sont typiquement unicellulaires de forme ronde ou ovoïde et se multiplient par bourgeonnement. Le dénombrement est effectué en milieux sélectif doté de propriétés antibactériennes. Mode opératoire Porter 0.5ml de la suspension mère avec une pipette stérile dans les boites de pétri vides et stériles inscrite toutes information, puis on fait couler environ de 20ml de la gélose sabouraud fondu dans les boites de pétri, on mélange l’inoculum au milieu en faisant des mouvements rotatoires ou circulaires. Incubation : incuber à 22°C pendant 5 jours. Lecture : Les colonies des levures sont brillantes, rondes et bondées, de couleurs différentes, de formes convexes ou plates et souvent opaques ; par contre les moisissures apparaissent sous forme de poile de chat. 3. Recherches des coliformes fécaux (ISO 16649-2): Principe Les coliformes fécaux ont les même caractères des coliformes totaux mais ils sont capable de fermenter le lactose avec production d’acide et de gaz à 44°C. Leur recherche est effectuée sur des milieux riches en lactose avec les sels biliaires comme un agent sélectif. Mode opératoire Porter 1ml de la suspension mère avec une pipette stérile dans les boites de pétri vides et stériles inscrite toutes information, puis on fait couler environ de 20ml de la gélose Vrbl fondu dans les boites de pétri, on mélange l’inoculum au milieu en faisant des mouvements rotatoires ou circulaires. Incubation : 44 °C pendant 24 à 48 h Lecture : Les colonies des coliformes fécaux apparaissent en masse se forme de petites colonies de couleur rouge foncé et de 0,5mm de diamètre. 4. Recherche des Lactobacillus (JO N°S52 2015): Principe Le Lactobacillus est un type de bactérie. Il existe de nombreuses espèces de lactobacillus. Ce sont des bactéries « amies » qui vivent normalement dans nos systèmes digestif, urinaire et génital sans causer de maladie. Les Lactobacillus sont également présents dans certains aliments fermentés comme le yaourt et dans les compléments alimentaires. Mode opératoire : Porter 1ml de la suspension mère avec une pipette stérile dans les boites de pétri vides et stériles inscrite toutes information, puis on fait couler environ de 20ml de la gélose MRS fondu dans les boites de pétri, on mélange l’inoculum au milieu en faisant des mouvements rotatoires ou circulaires. Incubation : 37 °C pendant 24 à 48 h Lecture : Les lactobacilles sont de petits bacilles minces, immobiles, à Gram positif en chaîne. Les colonies immatures apparaissent lisses, convexes et translucides. 5. Recherche des Staphylococcus aureus (JO N°68 2014) : Principe : S. AUREUS est une bacterie GRAM positif de 0,5 A 1,5 μm de diamètre, asporulee, non mobile, elle est groupée en amas ou en paire (Hermiere et AL., 1992 ; Kosikowski et Mistry, 1997A). C’est une bactérie aero-anaerobie qui a un métabolisme respiratoire et fermentatif (Kloos et Schleifer, 1986), La recherche de souche toxinogène et des entérotoxines doit être réalisée dans l’aliment. Mode opératoire : Porter 10ml de la suspension mère avec une pipette en verre stérile dans des boites de pétri qui contient déjà la gélose puis étaler les gouttes à l’aide d’un râteau stérile. Incubation : 37 °C pendant 24 à 48 h. Lecture : les colonies se présentent sous forme sphérique pigmentées jaune d'or. uploads/s3/ microbiologie.pdf