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1 Activités Technologiques de Biochimie Biologie Biotechnologies TSTL – 2021/20

1 Activités Technologiques de Biochimie Biologie Biotechnologies TSTL – 2021/2022 CONTEXTE L’infection post-opératoire est une complication grave pouvant compromettre le pronostic vital. Cette complication est fréquente, elle peut représenter 7% des interventions (Source : http://www.santetropicale.com/Resume/93904.pdf). Emilie SEPTIC, patiente âgée de 30 ans, a subi une opération chirurgicale pour se faire retirer l’appendice. Le lendemain, elle présente une suppuration au niveau de la cicatrice et de la fièvre. Le praticien réalise un prélèvement au niveau de la cicatrice qui est envoyé au laboratoire pour identification bactérienne. Les bactéries sont étudiées en commençant par -Etude macroscopique sur gélose ordinaire type TCS -Etude microscopique -Test enzymatique adapté Avec ses informations vous aurez déterminer la famille Pour confirmer la famille : -Encemensement d’une VF pour le type respiratoire Pour connaitre l’espèce il faut étudier les caractères biochimiques de la souche : La présence ou l’absence d’enzymes capables de fermenter certains sucres ou d’utiliser certains acides aminés pour leur développement. GUILLOUX A. HEMMEN F. OBJECTIFS  Réaliser une identification dichotomique de la famille  Utiliser une micro-galerie pour l’espèce  Comparer tests biochimiques en micro et macrogalerie IDENTIFICATION BACTERIENNE 2 Activités Technologiques de Biochimie Biologie Biotechnologies TSTL – 2021/2022 Pour cette famille il faudrait ensemencer les milieux suivants - Kigler Hajna - Hugh-Leifson - Citrate de Simmons - urée-indole - Clark et Lubs ( 2mL) - LDC / ODC / ADH - mannitol-mobilité Chaque milieu apporte des informations sur des caractères biochimiques et permettent d’identifier l’espèces. Nous vous avons préparé seulement 2 milieux (voir leur fiche technique) Kigler Hajna, ensemencement par piqure centrale puis des stries sur la pente sans recharger l’anse Mannitol mobilité nitrate, ensemencement par piqure centrale. Pour avoir tous les caractères vous ensemencerez une galerie API (voir fiche technique). Elle contient des mileux déhydratés qu’on ensemence avec une suspension bactérienne diluée. Voir le protocole dans le lutin. Une galerie est toujours accompagnée d’un isolement sur TCS pour vérifier la pureté de la suspension. Les bactéries peuvent être isolées à partir d'un prélèvement sur un milieu sélectif. Pour cette famille dont vous disposez une gélose drigalski à ensemencer en cadran et une gélose au vert brillant en faisant des stries sur la pente Réflexion préliminaire Q1. Réaliser un organigramme présentant les étapes à effectuer pour identifier une souche bactérienne à partir d’une souche pure présente sur TCS. Q2. Rappeler le principe de la coloration de Gram et expliquer le rôle de chaque étape. Réalisation pratique Jour 1 IDENTIFICATION BACTERIENNE La souche isolée du pus est présentée sur gélose ordinaire (TCS). M1. Réaliser la description macroscopique. Vérifier la pureté de la souche isolée sur la gélose M2. Sur une suspension à partir d’une colonie, réaliser les examens microscopiques suivants : état- frais et coloration de Gram. N’oubliez pas de noter vos observations microscopiques.  Présenter un champ microscopique à l’examinateur M3. Réaliser le test enzymatique adapté en présence de l’examinateur. GUILLOUX A. HEMMEN F. 3 Activités Technologiques de Biochimie Biologie Biotechnologies TSTL – 2021/2022 M4. À l’aide du tableau dichotomique 1, réaliser l’orientation de votre souche. M5. Lister les milieux nécessaires pour identifier la bactérie. M6. Ensemencer les milieux donnés par l’examinateur selon les fiches dans le lutin. L’isolement sur TCS est réalisé à partir de l’ampoule préparée pour la microgalerie après celle-ci. Jour 2 M7. Vérifier la pureté de votre souche par la lecture de votre gélose ordinaire. M8. Réaliser la lecture de la VF ensemencés en jour 1. M9 Mettre les réactifs de la galerie API à l’aide de la fiche dans le lutin et interpréter à l’aide du logiciel https://lab.upbm.org/identifieur/ M10.Lire les résultats des milieux de la macrogalerie et des milieux sélectifs Présentation et exploitation des résultats Q3. Présenter sous forme de compte rendu approprié, l’ensemble des résultats obtenus au cours des séances (J1 et J2) Q4.Comparer les résultats de la macro et de la microgalerie dans un tableau lorsque c’est possible. - CONCLUSION GENERALE Q5. A partir de vos résultats, conclure en proposant une identification du genre bactérien responsable de l’infection de la patiente. Q6. Donner le nom du test complémentaire à réaliser. GUILLOUX A. HEMMEN F. 4 Activités Technologiques de Biochimie Biologie Biotechnologies TSTL – 2021/2022 Dossier Technique Document 1a Tableau simplifié pour l’orientation bactérienne Document 1b Tableau différentiel des principaux groupes de bacilles à Gram négatif, non exigeants GUILLOUX A. HEMMEN F. uploads/s3/ at-microbiologie.pdf