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Mme Abdellaziz épouse Zemmal Akila : M.A.A. FSB/USTHB. 1 FICHE TECHNIQUE N°7 :

Mme Abdellaziz épouse Zemmal Akila : M.A.A. FSB/USTHB. 1 FICHE TECHNIQUE N°7 : Dénombrement des levures et moisissures sur gélose Sabouraud au chloramphénicol. Utilisation : La gélose de Sabouraud au chloramphénicol est recommandée pour l’isolement des levures et des moisissures, surtout lorsque les prélèvements sont fortement contaminés par des bactéries. Composition : Pour 1 litre de milieu : o Peptone pepsique de viande ………………………………………….10,0 g. o Glucose ………………………………………………………………….20,0 g. o Chloramphénicol (agent sélectif) .……………………..……………. 0,5 g. o Agar agar bactériologique ………………………………..…………….15,0 g. pH du milieu prêt à l’emploi à 25°C : 5,7 ± 0,2 (agent sélectif). Principe : La croissance rapide des levures et moisissures est favorisée par la présence des peptones (source d’azote) et du glucose (source d’énergie). Le chloramphénicol, antibiotique thermostable à large spectre antibactérien inhibe le développement des bactéries à Gram négatif et à Gram positif. Le pH acide est défavorable au développement bactérien contrairement aux mycètes. Technique : voir schéma 1) Préparation des dilutions décimales : voir fiche technique 1. 2) Ensemencement en surface ou en nappe : voir fiche technique n° 5. 3) Incubation : en aérobiose à 25°C pendant 3 à 7 jours avec lecture quotidienne. 4) Lecture : Levures : Colonies moyennes de couleur crème, d’aspect crémeux et de forme semi-bombée. Moisissures : Colonies filamenteuses de couleurs variées selon le type de moisissure 5) Dénombrement : dénombrer séparément les levures et les moisissures dans les boîtes contenant entre 15 et 150 colonies. Faire la moyenne des boîtes pour la même dilution. Appliquer la loi de Kass : N = m x 1/v x 1/D (UFC de levure (ou moisissure)/ml ou gr). N : le nombre d’unités formant une colonie. m : la moyenne des boîtes. V : le volume ensemencé. D : la dilution correspondant aux boîtes choisies. Remarques :  D’autres antibiotiques ou antibactériens peuvent également être additionnés à la gélose Sabouraud pour plus de sélectivité comme la Gentamycine, l’actidionne ou cycloheximide ……..  D’autres milieux sont couramment utilisés tel que le milieu OGA : gélose glucosée à l’oxytetracycline. Mme Abdellaziz épouse Zemmal Akila : M.A.A. FSB/USTHB. 2 1 ml 1 gr 1 ml Dilution 10-1 Dilution 10-2 Dilution 10-3 Incubation 25°C 3-7 jours 5 UFC 3 UFC 7 UFC 75 UFC 61 UFC 65 UFC 615 UFC 596 UFC 589 UFC Fromage 9 ml TSE 0,1 ml . . . . . . . … . . .. . . . m1 = 600 UFC m2 = 67 UFC m3 = 5 UFC Préparation des dilutions décimales Ensemencement (en surface) Comptage Des colonies Dénombrement Appliquer la loi de Kass N = m x 1/V x1/D. Choisir la moyenne située entre 15 et 150 colonies : 15 < m2 <150. La dilution qui correspond à la série de tubes de m2 est 10-2 . Le volume ensemencé V =0,1 ml. N = 67 x 0.1/1 x 1/10-2 N = 67.103 UFC de levures (moisissures)/gr (ou ml). uploads/s3/ ft-7-denombrement-levures-et-moisissures.pdf