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ANTI-A (ABO1), ANTI-B (ABO2), ANTI-A,B (ABO3) ANTI-D (RH1) IgM I, ANTI-D (RH1)

ANTI-A (ABO1), ANTI-B (ABO2), ANTI-A,B (ABO3) ANTI-D (RH1) IgM I, ANTI-D (RH1) IgM II, ANTI-D (RH1) TOTEM, ANTI-D (RH1) IgG, ANTI-DCE (RH1,2,3), NEG CONTROL, GROUPAKIT DOMAINE D'UTILISATION Ces réactifs sont des dispositifs médicaux de diagnostic in vitro (DMDIV) à usage professionnel. Les ANTI-A (ABO1), ANTI-B (ABO2), ANTI-A,B (ABO3) sont utilisés lors de l'épreuve globulaire du groupage sanguin ABO. Ils permettent de déterminer la présence des antigènes érythrocytaires A et/ou B à la surface des hématies humaines. Les ANTI-D (RH1) IgM I, ANTI-D (RH1) IgM II, ANTI-D (RH1) TOTEM et ANTI-D (RH1) IgG sont utilisés lors du groupage sanguin RH1. Ils permettent de déterminer la présence de l’antigène D (RH1) à la surface des hématies humaines. L'ANTI-DCE (RH1,2,3) permet de détecter la présence d'au moins un des antigènes érythrocytaires : D (RH1), C (RH2) ou E (RH3). Le NEG CONTROL doit être utilisé lors du groupage sanguin ABO RH1. Il est dépourvu de toute activité anticorps. Testé dans les mêmes conditions que le réactif utilisé, il permet l’interprétation du résultat obtenu. PRINCIPE La technique manuelle, sur plaque et en tube, employée repose sur le principe de l’hémagglutination. Les hématies à tester porteuses d’un antigène, agglutinent en présence du réactif contenant l’anticorps correspondant : - soit en technique d’hémagglutination directe dès qu'elles sont en présence du réactif contenant l'anticorps (de type IgM) ; - soit en technique d’hémagglutination indirecte : test à l'antiglobuline en cas d’utilisation d’un anticorps de type IgG. La réaction se fait en deux étapes. Les hématies à tester sont mises en contact avec l’anticorps de type IgG. Les anticorps se fixent sur les hématies porteuses de l'antigène correspondant, après lavage, l'addition d'antiglobuline « AGH MAESTRIA IGG » provoque l'agglutination des hématies sensibilisées porteuses de l'antigène correspondant. Une détermination du groupe ABO est définie à la fois par la mise en évidence des antigènes A et/ou B à la surface des hématies humaines et par la présence ou l’absence d'anticorps anti-A et/ou anti-B dans le plasma. Il y a donc lieu d'identifier les antigènes érythrocytaires par des réactifs anti-A, anti-B et anti-A,B connus (épreuve globulaire) puis de confirmer les résultats précédents en vérifiant la présence des anticorps correspondants dans le plasma du sang à tester à l'aide d'hématies A1, B et éventuellement A2 et O (épreuve plasmatique). Pour une réalisation du groupage sanguin RH1 l’utilisation d’un réactif ANTI-D (RH1) et du réactif NEG CONTROL est nécessaire. COMPOSITION Ces réactifs sont préparés à partir d’anticorps monoclonaux dans un milieu de conservation. Les anticorps monoclonaux, produits par DIAGAST proviennent de surnageants de cultures in vitro d'hybridomes d'origine murine ou humaine. Ces réactifs contiennent de l'azide de sodium (< 0,1 %), de l'arsénite de sodium (0,02 %) et de l’albumine bovine. Ils sont conditionnés en flacons munis de compte-gouttes calibrés et entrent aussi dans la composition du coffret GROUPAKIT. Le coffret GROUPAKIT (Réf. DIAGAST : 70888) est composé d'un flacon d'ANTI-A (ABO1), d'un flacon d'ANTI-B (ABO2), d'un flacon d'ANTI-A,B (ABO3), d'un flacon d'ANTI-D (RH1) IgM I et d'un flacon de NEG CONTROL. Le NEG CONTROL produit par DIAGAST ne contient aucun anticorps. Se reporter en dernière page pour la description des réactifs. PRECAUTIONS Il est conseillé de porter des gants, des lunettes de protection et de manipuler avec précautions les échantillons d’origine humaine. Tous les supports ayant été en contact avec ces échantillons doivent être manipulés comme des produits potentiellement infectieux. Les mesures spéciales de protection, les conditions d’élimination et de désinfection doivent être conformes à la réglementation locale. Ne pas utiliser un réactif endommagé ou présentant une fuite. FRANÇAIS DIA00104 CONSERVATION Ces réactifs doivent être conservés entre + 2 °C et + 8 °C. Leurs performances sont garanties dans les techniques préconisées de la première utilisation à la date de péremption indiquée sur l'étiquette. Ils ne doivent pas être utilisés au-delà de cette date. Il est conseillé de les laisser le moins longtemps possible hors du réfrigérateur, éviter de les laisser à la température du laboratoire entre deux utilisations. REACTIFS ET MATERIELS NECESSAIRES - Solution saline isotonique (NaCl 0,9 %). - Incubateur ou bain-marie à 37 °C. - Tubes à essai en verre de 10 ou 12 x 75 mm, portoir de tubes. - Agitateur mélangeur. - Plaque d’opaline. - Pipettes automatiques de précision réglables. - Centrifugeuse avec une force relative de 100-1200 g. - Echantillon sanguin de contrôle de phénotypes garantis comme HEMA CQI (Réf. DIAGAST : voir le catalogue). - Antiglobulines « AGH MAESTRIA IGG » (Réf. DIAGAST: voir le catalogue). - Hématies sensibilisées avec des IgG. - Coffret d’identification des D Partiels à usage de recherche : D-SCREEN (Réf. DIAGAST : voir le catalogue). ECHANTILLONS – TEMOINS Echantillons sanguins à tester Le sang recueilli sur anticoagulant : EDTA, héparine ou citrate dans un tube stérile bouché, conservé entre + 2 °C et + 8 °C, doit être examiné dans les 48 heures, dans la mesure où aucun signe d'hémolyse n’est visible. Au moment du test, centrifuger le prélèvement sanguin 3 minutes à 1200 g. Echantillons sanguins de phénotypes garantis comme HEMA CQI Le système analytique doit être validé à l'aide d'échantillons de phénotypes garantis : - un échantillon possédant l'antigène correspondant à l'anticorps du réactif utilisé, - un échantillon ne possédant pas l'antigène correspondant à l'anticorps du réactif utilisé. L’utilisation de ces échantillons ou d’HEMA CQI permet de déceler les anomalies inhérentes à la manipulation, aux réactifs, au matériel et à l’environnement de travail, et de mettre en œuvre les actions correctives. Témoin réactif Pour chaque échantillon, lors de la détermination du groupe RH1, on étudie un témoin réactif effectué dans les mêmes conditions en remplaçant l’ANTI-D (RH1) par le NEG CONTROL. En cas d’anomalie lors de la détermination du groupage sanguin ABO, on étudie un témoin réactif effectué dans les mêmes conditions en remplaçant le réactif de groupage ABO par le NEG CONTROL. PROCEDURE a) Technique sur plaque à température ambiante (+ 18… + 25 °C) sauf pour l’ANTI-D (RH1) IgG - Sur une plaque rigoureusement propre, à l'aide du compte-gouttes du flacon, déposer 1 goutte de réactif. - Prélever et déposer, à côté de chaque réactif, 25 µl de culot globulaire non lavé en prenant soin de ne pas créer de contact entre les gouttes. - Mélanger le sang et le réactif par un mouvement en spirale avec l'extrémité d'un agitateur, de façon à dessiner une pastille régulière de 2 à 3 cm de diamètre. - Incuber la plaque 30 secondes à température ambiante sans agitation. - Prendre la plaque et lui donner un mouvement de roulis pendant 3 minutes tout en observant macroscopiquement l'apparition éventuelle des agglutinats. - Lire les réactions immédiatement. b) Technique directe en tube à température ambiante sauf pour l’ANTI-D (RH1) IgG - Préparer une suspension d'hématies à 5 % en solution saline isotonique. - Dans un tube, à l'aide du compte-gouttes du flacon, déposer 1 goutte de réactif. - Ajouter 50 µl de suspension globulaire. - Agiter pour homogénéiser le mélange puis centrifuger 1 minute à 500 g. - Lire macroscopiquement en agitant doucement les tubes de façon à détacher la pastille globulaire. - Noter l'apparition éventuelle d'agglutinats. FRANÇAIS DIA00104 c) Technique en test indirect à l'antiglobuline uniquement pour l’ANTI-D (RH1) TOTEM - Après centrifugation immédiate et lecture énoncée ci-dessus, si la réaction est faible ou négative, agiter les tubes et incuber 15 minutes à + 37 °C. - Laver 2 fois les hématies en solution saline isotonique et jeter le liquide du dernier lavage. - Ajouter 50 µl d’antiglobuline « AGH MAESTRIA IGG » au culot d’hématies. Homogénéiser puis centrifuger 1 minute à 120 g. - Effectuer la lecture comme indiquée au paragraphe précédent. d) Technique en test indirect à l’antiglobuline uniquement pour l’ANTI-D (RH1) IgG - Préparer une suspension d’hématies à 5 % en solution saline isotonique. - Dans un tube, à l’aide du compte-gouttes du flacon, déposer 1 goutte de réactif. - Ajouter 50 µl de suspension globulaire. - Agiter les tubes pour homogénéiser le mélange et incuber 15 minutes à + 37 °C. - Laver 2 fois les hématies en solution saline isotonique et jeter le liquide du dernier lavage. - Ajouter 50 µl d’antiglobuline « AGH MAESTRIA IGG » au culot d’hématies. Homogénéiser puis centrifuger 1 minute à 120 g. - Effectuer la lecture comme indiquée au paragraphe « b ». INTERPRETATION - S'il s'est produit une agglutination (les hématies se regroupent en un ou plusieurs blocs), la réaction est positive et l'antigène ou au moins un des antigènes, correspondant au réactif utilisé est présent sur les hématies testées. S'il n'y a pas d’agglutination (les hématies se remettent en suspension homogène), la réaction est négative et l'antigène est absent sur ces hématies. - Une détermination du groupe ABO d’un sujet ne peut être définie sans ambiguïté que s'il y a concordance stricte entre les résultats de l'épreuve globulaire et ceux de l'épreuve plasmatique. S'il y a discordance, ne pas rendre de résultat et poursuivre l'identification du groupe sanguin, conformément aux recommandations et protocoles en vigueur ou envoyer le prélèvement à un laboratoire expert. Les Témoin « uploads/Finance/ dia00104-fr-pdf.pdf