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Hôpital Charles Nicole Laboratoire de biochimie Unité de lithiase FDP Dosage du

Hôpital Charles Nicole Laboratoire de biochimie Unité de lithiase FDP Dosage du citrate urinaire Kit Roche Validé par : Pr.Ag. Kahena BOUZID Elaboré par : 1. 1. Préparation des solutions du kit Préparation des solutions du kit Dissoudre le contenu du flacon N=1 (Buffer/L-MDH/L-LDH/NADH) par 12ml d’eau, stable à deux semaines entre 2o et 8o C et quatre semaines entre -20oC et 25oC. Dissoudre le contenu du flacon N=2 (CL lyophilizate) par 300μ d’eau, stable jusqu’à une semaine à 2oC et 8oC et à quatre semaines entre - 20oCet 25oC. 2. Préparation des échantillons Préparation des échantillons : La longueur d’onde est de 340nm Température ambiante du laboratoire. Lecture contre le blanc =E∆ Le control Le blanc de la réaction Echantillon de la réaction Echantillon 200µl flacon control -- 200 µl (urine) Eau distillée 1.800µl 2000 µl 1.800µl Solution N=1 (Buffer/L-MDH/L- LDH/NADH) 1000µl 1000 µl 1000µl Vortex et lire l’absorbance A1 après 5min Solution N=2 (CL lyophilizate) 20µl 20µl 20µl Vortex et lire l’absorbance A2 après 5min 3. calcul de la concentration de la citraturie Déterminer la différence des absorbances ∆A= (A1-A2)échantillon– (A1-A2) blanc [citraturie]= ∆Ax2.4 (mmol/l) 2.4=Vf*MW/εDv*1000 Vf : volume final MW : molecular weight Ε : extinction coeficient of NADH at 340nm V: sample volume uploads/Finance/ dosage-du-citrate-urinaire.pdf