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Rapport des travaux pratiques de microbiologie alimentaire LST Option :BPHSA Ré

Rapport des travaux pratiques de microbiologie alimentaire LST Option :BPHSA Réalisé par : Encadré par : -OULEFELLAH Hafida -prof .ANANOU Samir 2O19-2020 1 I. CONTROLE DE L’AEROBICONTAMINATION 1. INTRODUCTION Objectif Les milieux de l’environnement (air, surfaces, eau) présentent une contamination microbiologique permanente mais variable dans le temps et dans l’espace. Les micro-organismes présents sont des saprophytes de l’environnement mais aussi des commensaux ou des pathogènes d’origine humaine . L’analyse de l’air est importante à réaliser car les germes aériens sont souvent des germes de contamination de produits alimentaires .  techniques et Matériels  Sédimentation sur boîte de Petri ouverte : C'est la technique la plus simple pour mettre en évidence les micro- organismes vivant dans l'air qui nous entoure et que nous inhalons. Une boîte de Pétri, remplie d'un milieu gélosé nutritif spécifique est laissée ouverte pendant 8h. On prépare deux boites de pétris contenant de la gélose : Gélose trypticase-soja (TSA) : Pour les germes totaux (bactéries – moisissures –levures) 2 On ouvre les boites et on les laisse pendant 8H ; l’une à l’intérieur de la salle et l’autre à l’extérieur de la salle Incubation pendant 3-4 jours à 37°C Gélose Sabouread (SA) : Pour les levures et les moisissures Sédimentation des microorganismes de l’air 3 2. Résultats L’extérieur de la salle (UFC) L’intérieur de la salle (UFC) TSA (L+M+B) -35 -43 -13 Moyenne= 34 -49 -34 -56 Moyenne=46 SA (M+L) -9 -3 -1 Moyenne=4 -3 -4 -3 Moyenne= 3 Bactéries 34-4= 30 46-3=43 3. Interprétation : o Observation -l’intérieur de la salle : -la moyenne des germes totaux est 34 UFC - la moyenne des levures et moisissures est 4 UFC -le nombre des bactéries est 30 UFC Le pourcentage des bactéries dans l’air : -34 100% -30 88% 4 L’extérieur de la salle : la moyenne des germes totaux est 46 UFC la moyenne des levures et moisissures est 3 UFC le nombre des bactéries est 43 UFC  Le pourcentage des bactéries dans l’air : 46 100% 40 53% o comparaison o le nombre des microorganismes à l’intérieur de la salle est inférieur que ceux du milieux extérieur de la salle ; ceci est due au renouvellement des germes par l’air. o On observe la prédominance des bactéries dans l‘air pour les deux milieux (extérieur : 53% et l’intérieur : 88 %) pour distinguer les bactéries présentes dans l’air ; on va mettre en évidence les propriétés de leur paroi par la coloration de Gram :  Coloration de Gram : Principe 4. Résultats : 5 o -cocci gram+ o -cocci gram+ o -bacille gram- o -cocci gram+ o -cocci gram+ o -Bacille gram- o -cocci gram+ o -cocci gram+ Interprétation : On observe la prédominance des bactéries à gram positif 5. DISCUTIONS 6 Référence bibliographie : http://www.webreview.dz/IMG/pdf/article7.pdf 7 Interprétation : On a trouvé les mêmes résultats que les chercheurs ;la majorité des germes bactériens présentes dans l’air sont des bactéries à gram positif . 6. Conclusion : La microflore de l’air renferme essentiellement les microorganismes résistent la dessiccation :ce sont les bactéries à gram positif et les moisissures . 8 II. PRELEVEMENT DES SURFACES PAR ECOUVILONNAGE : Introduction Les surfaces sont contaminées soit par contact ,soit par sédimentation des microorganismes présents dans l’air .La Répartition de cette contamination des surfaces est hétérogènes . Il est nécessaire de mettre en place des procédures et nettoyage et de désinfection des surfaces . Objectif : Prélèvement et analyse des microorganismes présents dans les surfaces traités par l’eau de javel et par l’alcool . 9 Techniques : 100µl 100µl Tube contient 3ml de l’eau physiologique stérile 900µl EPS 10−1 Incubation pendant une nuit à 37°C Etalement 50 µl 10–2 900µl EPS 10 RESULTAS : Solution mère 10−1 Concentration des germes totaux(UFC/cm2 ) Surface témoin -17 -51 MOYENNE= 34 -3 -16 6,8 Surface traitée avec l’eau de javel -2 -4 MOYENNE= 3 -1 -0 0,8 Surface traité avec l’alcool -6 -5 MOYENNE= 5,5 1 Interprétation : Observation : Calcul de concentration des germes totaux dans la surface témoin : Ne × Fd [ GT] = Ve = =680 UFC /ml 3ml 300 cm2 34×1 3ml d’EPS 0 ,05 11 =680×3 UFC /3ml = 2040 UFC/300 cm2 =6 ,8 UFC/ cm2  la concentration des germes totaux dans la surface témoin est 6,8 UFC/ cm2 La concentration des germes totaux dans la surface traitée par l’eau de javel est 0,8 UFC/ cm2 La concentration des germes totaux dans la surface traitée par l’alcool est 1 UFC/ cm2 Le pourcentage de survie des germes totaux dans la surface traitée par l’eau de javel est : 6 ,8 1OO% 0,8 11,7% Le pourcentage de réduction des germes totaux dans la surface traitée par l’eau de javel est : 100- 11,7=88, 3% Le pourcentage de survie des germes totaux dans la surface traitée par l’alcool est : 1,8 100 % 1 14,7% Le pourcentage de réduction des germes totaux dans la surface traitée par l’alcool est : 100-14 ,7=85.3% Comparaison : Le pourcentage de réduction des germes totaux présents dans la surface traitée par l’eau de javel est supérieur à celui des germes présents dans la surface traitée par l’alcool. DISCUTIONS : 20 cm 15 cm 12 Référence bibliographie : http://www.alyabbara.com/livre_gyn_obs/termes/hygiene/desinfectants_c lassification_caracteristiques.html ce tableau montre l’efficacité de l’eau de javel de tuer les spores et les virus nus alors que l’alcool ne peut pas les tuer . donc l’eau de javel permet une réduction des microorganismes supérieur à celle-ci de l’alcool :c’est la même résultat qu’on a trouvée . CONCLUSION : Le traitement avec L’eau de javel est plus efficace que le traitement avec l’alcool. Les microorganismes résistent à la désinfection des différents traitements sont appelés les Biofilms .leurs apparition est due aux forces mécaniques et chimiques qui causent des fissures au niveau des surfaces de travail . Mécanisme de formation des biofilms 13 III. ANALYSE DE PRODUITS VEGETAUX CRUS Introduction Les légumes frais ,ayant une activité d’eau importante et un ph proche de la neutralité, constituent un milieu favorable à la croissance des microorganismes .Ils sont également sensible à de nombreux microorganismes d’altération . Objectif : Dénombrement des germes qui se trouvent dans la laitue . Matériels : -Une laitue réfrigérée pendant 9 jours à 8°C -L’eau de javel 10% Techniques : 14 Résultats : Vortex 1min Vd=9×0,49g EPS 0,49g 100µL TSA MSA MCA Dilution en séries (jusqu’à la dilution10-7 ) 10−1 VORTEX 1min 900µL EPS Etalement sur boites de petri par méthode des gouttes et incubation à 37°C pendant 24-48h 15 µµµµµµµµµµµµµµµµµµµ RESULTAS ; MILIEU DE CULTURE SM 10-1 10−2 10-3 10-4 10-5 10−6 10-7 [ MO] UFC/g QM TSA Tapis tapis Tapis 14 29 2 0 2 2 1 1 1 1 1 1 2.15 106 A MCA 18 tapis 6 TAPI S 0 49 0 2.45 106 NS MSA 15 Tapis 1 9 1 11 0 1.37 105 NS TSA 27 27 6 1 0 2 0 2.7 10 S MCA 25 25 5 5 0 1 2.51 04 NS MSA 0 22 0 0 0 1.11 04 NS TSA Tapis tapis TAPIS TAPIS 11 4 7.51 06 A MCA Tapis tapis TAPIS TAPIS 7 7106 NS MSA Tapis tapis 20 232 1 0 0 2.151 05 NS TSA : pour les FMAT MCA : pour les entérobactéries MSA : pour les staphylocoques Laitue témoin Laitue traitée avec l’eau de javel Laitue traitée avec l’alcool 16 QM : qualité microbiologique A : Acceptable S : Satisfaisante NS : Non Satisfaisante Interprétation :  La concentration des FMAT dans la laitue témoin est : [ FMAT ] = = UFC/g = 2.15 105 ×10 UFC/g = 2.15.106 UFC/g La concentration Des coliforme dans la laitue témoin est : 2 ,45.106 UFC/g La concentration des Staphylococcus dans la laitue témoin est : 1,37.105UFC  La concentration des FMAT dans la laitue traitée avec l’eau de javel est : 2,7.104 UFC/g  La concentration des coliformes dans la laitue traitéé avec l’eau de javel est : 2,5.104 UFC/g  La concentration des staphylococcus dans la laitue traitée avec l’eau de javel est : d= = N×Fd vi Vi 21.5×102 0.O1 Vi+ Vd V 0.49 Vf 0.49+4.41 = = 0.01 17 1,1.104 UFC/g  La concentration des FMAT dans la laitue traitée par l’alcool est : 2,75.106UFC/g  La concentration des coliformes dans la laitue traitée par l’alcool est : 7.106 UFC/g  La concentration des staphylococcus dans la laitue traitée par l’alcool est : 2,15.105UFC/g Le taux de survie des FMATs dans la laitue lavée par l’eau de javel est : 2.15.106 UFC/g 100% 2,7.104 UFC/g 1.25% DONC LE TAUX DE Réduction est : 100% - 1,25% =98,75% NB : dans le cas de la laitue lavée avec l’alcool ,on a observé une augmentation des concentrations des FMATs , coliformes et les staphylococcus par rapport à la laitue témoin au lieu de leur réduction ,cette contamination est due probablement au manipulateur(personnel) . 18 Tableau récapitulatif des Normes appliqué au légumes frais : Catégorie : Satisfaisante Acceptable Non satisfaisante FMAT (ufc /g) uploads/Geographie/ rapport-des-travaux-pratiques-de-microbiologie-alimentaire.pdf