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•• Ai "... • ~ G~ ~Gii. 12 H-ft ft-a H-ft ft-ft ft-H ' H-ft ft-H (1,6J [P~lJO@M@ @)@ L·AIALYIE CHIOIIOIOIlIGUE B. DUTRILLAUX J. COUTURIER n-n ft-n H-ft ft-ft n-H H-ft H-ft H-ft ft-a H-ft ft-ft ft-H H-ft ft-ft H-n ft-ft ft-ft ft-ft n-H H - n H-ft m MASSON ~~ (p~IJO@)(!D@ @)@ ~D~U!J~~V@@ (ÇGD~®ffiD®@®ffiDO@)QD~ 0 CHEZ LE MÊME ÉDITEUR Dans la méme collection: 1. LA PRATIQUE DE L'IMMUNOÉLECTROPHORÈSE, par M. KAMINSKI. 1979, 88 pages, 34 figu- res. 2. LA PRATIQUE DE L'ULTRACENTRIFUGATION ANALYTIQUE, par G. BATELIER. 1979, 88 pages, 40 figures. 3. LA PRATIQUE DU MICROSCOPE ÉLECTRONIQUE A BALAYAGE EN BIOLOGIE, par D. GUILLAUMIN. 1980, 128 pages, 51 figures, 4. LA PRATIQUE DU MICROSCOPE ÉLECTRONIQUE CONVENTIONNEL, par R. et J. HAGÈGE. 1980, 128 pages, 28 figures, 21 planches. 5. INTRODUCTION A L'EMPLOI DES RADIOÉLÉMENTS EN BIOLOGIE ET EN BIOCHIMIE, par S. APEL- GOT. 1981, 80 pages, 32 figures. 6. LA PRATIQUE DE L'AGGLUTINATION DES ERYTHROCYTES ET DU TEST DE COOMBS, par Ph. Rou GER et Ch. SALMON. 1981, 88 pages, 22 figures. 7. LE RAT DE LABORATOIRE, par G. JADOT. l-Réactif biologique. 1981,96 pages, 11 figu- res. 8. LES MÉTHODES DE PURIFICATION ET D'ANALYSE DES PROTÉINES, par J.-M. FRÈRE et Ch. GERDAY. 1981, 128 pages, 42 figures. 9. LA PRATIQUE DE L'ÉLECTROPHORÈSE APPLIQUÉE A LA DÉTECTION DES POLYMORPHISMES HUMAINS, par J. SÉGER et G. LUCOTTE. 1981, 116 pages, 63 figures. 10. LA PRATIQUE DES GROUPES ET GROUPAGES ÉRYTHROCYTAIRES, par Ph. ROUGER et Ch. SALMON. 1981, 120 pages, 6 figures. 11. LA PRATIQUE DES AUTO ET ALLO-ANTICORPS ANTIÈRYTHROCYTAIRES, par Ph. ROUGER et Ch. SALMON. 1981, 116 pages, 18 figures. Autres ouvrages: DICTIONNAIRE DE GÉNÉTIQUE, par P. L'HERITIER. Collection de dictionnaires spécialisés de médecine et de biologie, sous la direction de A. MANU/LA. 1978, 272 pages, 6 figures. BIOLOGIE MOLÉCULAIRE ET ÉVOLUTION, par F. AYALA. 1981, 136 pages, 60 figures (à paraÎ- tre). LE POLYMORPHISME BIOCHIMIQUE ET LES FACTEURS DE SON MAINTIEN, par G. LUCOTTE. 1977, 72 pages, 19 figures. MANUEL PRATIQUE D'EMBRYOLOGIE EXPÉRIMENTALE, par J. SCHILT, A.M. BAUTZ et A. BAUTZ. 1981, 144 pages. GÉNÉTIQUE ET AMÉLIORATION DES PLANTES, par Y. DEMARLY. Collection Sciences Agrono- miques. 1977,304 pages, 175 figures. 12 (1~ [fJ~lJO@GD~ @)~ (1D ~(ill~(1l?§~ ~GD~®(iIl)®§®(iIl)O@GD~ 0 Bernard Dutri/laux Maître de recherche au CNRS MASSON Jérôme Couturier Chargé de recherche au CNRS Paris New York Barcelone Milan Mexico Rio de Janeiro 1981 Tous droits de traduction, d'adaptation et de reproduction par tous procédés réservés pour tous pays La loi du 11 mars 1957 n'autorisant, aux termes des alinéas 2 et 3 de l'article 41, d'une part, que les « copies ou reproductions strictement réservées à l'usage privé du copiste et non destinées à une utilisation collective» et, d'autre part, que les analyses et les courtes citations dans un but d'exemple et d'illustration, « toute représentation ou reproduction intégrale, ou partielle, faite sans le consentement de l'auteur ou de ses ayants droit ou ayants cause, est illicite» (alinéa 1" de l'article 401. Cette représentation ou reproduction, par quelque procédé que ce soit, constitue- rait donc une contrefaçon sanctionnée par les articles 425 et suivants du Code pénal. © Masson, Paris, 1981. ISBN: 2-225-74052-6 ISSN: 0240-2351 MASSON S.A. MASSON PUBLISHING U.S.A. Inc. TORAY·MASSON S.A. MASSON ITALIA EDITORI S.p.A. MASSON EDITORES EDITORA MASSON Do BRASIL Ltda 120, bd St-Germain, 75280 Paris Cedex 06 133 East 58 th Street, New York, N.Y. 10022 Balmes 151, Barcelona 8 Via Giovanni Pascoli 55, 20133 Milano Dakota 383, Colonia Napoles, Mexico 18 OF R. da Quitanda, 20/s 301 Rio de Janeiro R.J. Introduction ...................................................... 7 1 - Techniques d'obtention des préparations chromosomiques ...... 9 Techniques de culture. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9 Lymphocytes .................................................. 9 Fibroblastes ................................................... 12 Cellules amniotiques ............................................ 14 Techniques directes et cultures à très court terme .................. . . . . . . 15 Étude des leucémies ...................................... . . . . . . 16 Étude des cellules germinales ............................... . . . . . . 18 2 - Techniques de coloration et de marquage chromosomiques ...... 24 Techniques sur préparations fixées .................................... 24 Techniques de coloration de base ................................. 24 Hybridation in situ et autoradiographie ............................. 27 Techniques de marquage. . . . . . . . .. .. .. . .. . .. . . . .. .. . .. .. . . . .. .. . 30 Marquage de l'euchromatine ..................................... 31 Marq·uage de l'hétérochromatine .................................. 38 Obtention de plusieurs marquages sur les mêmes préparations ......... 44 Méthodes de marquage faisant intervenir un traitement des cellules vivantes . 46 Incorporation de la thymidine tritiée ............................... 46 Méthodes de traitement par le BrdU . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 46 Traitement par l'actinomycine D ............................ . . . . . . 60 Traitement par la 5-azacytidine .................................... 60 3 - Techniques d'obtention et de marquage des cellules en prophase ou prométaphàse ................................................. 62 Synchronisation par la thymidine ...................................... 62 Synchronisation par l'améthoptérine ................................... 63 Marquage des cellules en prophase ou prométaphase .................... 63 Synchronisation par la .thymidine et incorporation de BrdU .. . . . . . . . . . . . . . . 65 Synchronisation par le BrdU . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 65 4 - Examen de la chromatine sexuelle. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 69 Corpuscule X: corps de Barr .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 69 Corpuscule y . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 70 5 - Données générales sur l'observation microscopique et la micro- photographie ............................................. 72 Observation microscopique .......................................... 72 Observation en lumière ordinaire .................................. 72 Observation en fluorescence ..................................... 72 Microphotographie ................................................. 73 6 - Nomenclature des chromosomes normaux et des principales aber- rations ........................................................... 75 Formules chromosomiques normales et pathologiques ................... 75 Classification chromosomique et nomenclature des bandes .... . . . . . . . . . . . 78 Nomenclature des remaniements de structure 79 Bibliographie .................................................... . 80 Index alphabétique ................................................ 85 Fournisseurs ...................................................... 87 o La cytogénétique est pratiquement née avec ce siècle. Elle est encore considérée comme une discipline jeune, en raison sans doute des progrès récemment accomplis, qui en ont transformé les méthodes et les applica- tions. Après qu'on se soit longtemps contenté d'analyser les tissus montrant spontanément des cellules en mitose, tel l'épithélium séminifère, un premier progrès a été réalisé, la culture cellulaire, qui permet d'obtenir un grand nom- bre de figures mitotiques. Le choc hypotonique, découvert en 1952 par Hsu, devait être une seconde étape décisive, puisqu'il permet un gonflement cellulaire, et donc une meilleure répartition des chromosomes. Il fallut toutefois attendre 1956 pour que la formule chromosomique de l'homme soit précisée par Tjio et Levan, et 1959 pour que la première anomalie chromosomique soit décrite par Lejeune et ses collaborateurs. La mise au point des cultures sanguines devait faciliter beaucoup les analyses et fut sans doute responsable du grand essor de la cytogénétique moderne, depuis 1960 (Moorhead et coll.). Enfin, la découverte des bandes chromatidiennes (Caspersson et coll., 1970, Dutrillaux et Lejeune, 1971, Summer et coll., 1971) changeait radicale- ment les potentialités d'analyse et faisait entrer la cytogénétique dans sa phase actuelle. Dans cet ouvrage, nous allons successivement considérer les différentes méthodes permettant d'obtenir des cellules en division par culture, sans négliger toutefois la possibilité d'observer les chromosomes sur des tissus non cultivés, telles la moëlle osseuse et l'épithélium séminifère. Les méthodes purement cytologiques, pour obtenir des étalements chromosomiques seront détaillées. Un développement tout particulier sera donné à la description des nom- breuses méthodes de marquage. W 'lfQCSÛU(fùÔ~~Qê @) D@)~~Q(fù~Ô@)(fù @Qê ~(j'~~Ô(j'Ô~Ô@)(fù8 CS[Ju(j'@)WJ@)8@)WJÔ~O:DQ8 0 Bien que les préparations chromosomiques puissent être obtenues directement sur des tissus spontanément en division active (moëlle osseuse, tissu testiculaire, tissus néoplasiques ... ), on a le plus souvent recours à la culture de cellules (lymphocytes, fibroblastes, cellules ammiotiques ... ). Techniques de culture Les types uploads/Industriel/ dutrillaux-coutuurier-la-practique-de-l-x27-analyse-chromosomique.pdf