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REPUBLIQUE ALGERIENNE DEMOCRATIQUE ET POPULAIRE MINISTERE DE L’ENSEIGNEMENT SUP

REPUBLIQUE ALGERIENNE DEMOCRATIQUE ET POPULAIRE MINISTERE DE L’ENSEIGNEMENT SUPERIEUR ET DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE UNIVERSITE DE BATNA 2 FACULTE DES SCIENCES DE LA NATURE ET DE LA VIE DEPARTEMENT DE BIOLOGIE DES ORGANISMES THÈSE En vue de l’obtention du diplôme de DOCTORAT (LMD) Présentée par : Melle MOUFFOUK CHAIMA Filière SCIENCES BIOLOGIQUES Spécialité BIOTECHNOLOGIE DES MOLECULES BIOACTIVES ET PATHOLOGIES MOLECULAIRES Thème Soutenue publiquement le 29/ 01 / 2019 devant le jury: Président SENATOR Abderrahmane Professeur Université Batna 2 Rapporteur HAMBABA Leila Professeur Université Batna 2 Co-rapporteur HABA Hamada Professeur Université Batna 1 Examinateurs : BEDJOU Fatiha Professeur Université Bejaia LAROUI Salah Professeur Université Batna 2 BENKIKI Naima Maitre de conférences A Université Batna 2 Evaluation des activités biologiques et étude de la composition chimique de la plante Scabiosa stellata L. Remerciements Avant tout, je remercie Dieu, le tout puissant, pour m’avoir accordé la force, le courage et la patience pour achever cette thèse. Ce travail de recherche en vue de l’obtention du diplôme de Doctorat LMD, spécialité Biotechnologie des molécules bioactives et pathologies moléculaires, a été réalisé au sein du Laboratoire de chimie des matériaux et des vivants: activité et réactivité (LCMVAR) et le laboratoire de Chimie et Chimie de l’Environnement (L. C.C.E) de la faculté des sciences de la matière, Université de Batna-1, sous la direction des Professeurs HAMBABA LEILA et HABA HAMADA. J’exprime d’abord mes profonds remerciements et ma vive reconnaissance a mes Directeurs de thèse Madame HAMBABA Leila Professeur au département de Biochimie et microbiologie à l’université de Batna-2 et Monsieur HABA Hamada Professeur au département de chimie à l’université de Batna-1 pour l’intérêt qu’ils ont manifestés pour la réalisation de ce travail, d’avoir encadrés et dirigés ce travail avec une grande rigueur scientifique, leur disponibilité, leurs conseils et la confiance qu’ils m’ont a accordé et qui a permet de réaliser ce travail. Ce travail n’aurait pas été le même sans votre encadrement. Mes vifs remercîments vont à Professeur SENATOR Abderrahmane de l’université de Batna-2, pour l’honneur qu’il m’a fait en acceptant de présider le jury de ma soutenance. J’adresse également mes vifs remerciements à : Madame le Professeur BEDJOU Fatiha de l’université de Bejaia, Monsieur le Professeur LAROUI Salah de l’université de Batna-2 et Madame le Docteur BENKIKI Naima Maitre de conférences A de l’université de Batna-2 pour avoir accepté de faire partie du jury de ma thèse de doctorat. Un très précieux remerciement va à Docteur MOUFFOUK Soumia enseignante au département de chimie à l’université de Batna-1, qui a guidé, suivi le déroulement et l’exécution de cette thèse en me prodiguant tout aide possible, pour son soutien et son encouragement permanent durant toutes mes années d’étude, de m’avoir supporté le long de ce travail sans jamais m’avoir privé de son savoir. Je tiens à remercier également Docteur BENCOUICI Chawki Maitre de conférences B au centre de recherche et de biotechnologie -Constantine-pour m’avoir accueilli au sein de son laboratoire. Je remercie également Docteur MOUFFOUK Sara enseignante au département de biologie des organismes à l’université de Batna-2, pour son aide constante, sa marque de sympathie et ses précieux conseils Un grand respectueux remerciement va à Monsieur ABDESSAMAD Saleh, responsable des laborantins de santé publique et enseignant à l’institut nationale paramédicale-Batna, qui n’a pas hésité de m’aider, J’ai eu le privilège de bénéficier de son enseignement, son savoir et de sa grande expérience. J’adresse mes sincères remerciements à Monsieur HACHEMI Messaoud enseignant au département de biologie des organismes à l’université de Batna-2, pour son aide. Je remercie également Docteur KHADRAOUI Hachani, Maitre de conférences hospitalo-universitaire et responsable du laboratoire d'anatomie pathologique (CAC Batna), ainsi que toutes les techniciennes du laboratoire pour leur aide afin de réaliser et interpréter les coupes histologiques. Je n’oublie pas de remercier vivement les laborantines du (CHU, EPH et CAC Batna) et CRBT Constantine en particulier : Lynda, Souhila, Wahiba et Meriem. Finalement, je tiens à remercier tous ceux qui ont contribué de près ou de loin à accomplir ce travail. Dédicace À ma chère mère L’exemple de la force et mon grand secours qui n’a jamais cessé de m’encourager et de me soutenir en permanence durant toutes les années de mes études. Sans toi, je n’ai pas pu être ce que je suis et je ne saurais pu progresser et achever ce travail. Puisse Dieux, le tout puissant te préserve et t’accorde une longue heureuse vie. À mon cher père Aucune dédicace ne saurait exprimer l’estime, le dévouement et le respect que j’ai toujours eu pour vous. Ce travail est le fruit de tes sacrifices que tu as consentis pour mon éducation, ma formation et mon bien être. À la mémoire de mon grand père À mes chères sœurs A mon frère A la petite agronome Nada Aicha A mes chères nièces et neveux. A mes chères amies : Nardjess, Mounira , Warda et Samiha. SOMMAIRESOMMAIRESOMMAIRE SOMMAIRESommaire Sommaire Sommaire Sommaire Liste des abréviations Liste des figures Liste des tableaux Introduction Introduction Introduction Introduction 1 Partie I : Rappel bibliographique Partie I : Rappel bibliographique Partie I : Rappel bibliographique Partie I: Rappel bibliographique Chapitre I : Description de la plante Chapitre I : Description de la plante Chapitre I : Description de la plante Chapitre I: Description de la plante I- La famille Dipsacaceae I-1- Répartition géographique……………………..……………… 4 II- Le genre Scabiosa Linnaeus, Sp. II-1- Description botanique………………………………………...… 4 II-2- Répartition géographique………………………………….….. 5 II-3- Usage en médecine traditionnelle…………………………..…. 5 II-4- Activités biologiques …………………………………………… 5 II-5- Composition chimique………………………………………….. 6 III- L’espèce Scabiosa stellata L. III-1- Etymologie…………………………………………...…………. 6 III-2- Répartition géographique ………………………………..…… 7 III-3- Description botanique…………………………………………. 7 III-4- Classification botanique……………………………………….. 7 III-5- Usage en médecine traditionnelle…………..………………… 8 Chapitre II : radicaux libres, stress oxydatif et antioxydantsChapitre II : radicaux libres, stress oxydatif et antioxydantsChapitre II : radicaux libres, stress oxydatif et antioxydantsChapitre II: radicaux libres, stress oxydatif et antioxydants I- Radicaux libres I-1-Définition………… ……………………………………………..… 9 I-2-Sources ………….………………………………………………… 9 II- Stress oxydatif II-1- Définition ……………………………………..…………………..… 10 II-2- Conséquences moléculaires du stress oxydatif………………...… 11 II-3-Conséquences pathologiques du stress oxydatif ……………… 13 III- Antioxydants et systèmes de défense III-1-Définition…………………………………………….…………… 14 III-2- Mode d’action……………………………………………………. 14 III-3- classification des antioxydants…………….…………………… 14 Chapitre III : Inflammation et anti-inflammatoires Chapitre III : Inflammation et anti-inflammatoires Chapitre III : Inflammation et anti-inflammatoires Chapitre III: Inflammation et anti-inflammatoires I- Inflammation I- 1- Définition……………………………………………………..…… 18 SOMMAIRESOMMAIRESOMMAIRE SOMMAIRE I-2- Etiologies……………………………………………………….…… 18 I-3- Acteurs et déroulement de la réaction inflammatoire …..….….. 18 I-4- Notions d’inflammation aiguë et d’inflammation chronique 22 II- Les anti-inflammatoires II-1- Anti-inflammatoires non stéroïdiens ………………….. …….… 25 II-2- Anti-inflammatoires stéroïdiens ……………………….……… 25 II-3-Anti-inflammatoires d’origine végétale………………...……… 26 Chapitre IV : Antibiotiques et antibiorésistance Chapitre IV : Antibiotiques et antibiorésistance Chapitre IV : Antibiotiques et antibiorésistance Chapitre IV: Antibiotiques et antibiorésistance I- Antibiotiques I-1- Définition…………………………………….…………………… 27 I-2- Mode d’action des antibiotiques ……………………….……… 27 I-3-Toxicité des antibiotiques……………………………..….…….… 29 II- Résistances aux antibiotiques II- 1-Types de résistance bactérienne…………………………..…… 29 II-2-Les mécanismes de résistances bactériennes aux antibiotiques 30 Chapitre V : Les saponinesChapitre V : Les saponinesChapitre V : Les saponinesChapitre V: Les saponines I- Généralités …………………………………………………………... 32 II- Structure…………………………………………………………….... 32 III- Biosynthèse …………………………………………………………... 33 VI- Propriétés biologiques des saponosides………………………….. 33 Partie II : Partie expérimentale Partie II : Partie expérimentale Partie II : Partie expérimentale Partie II: Partie expérimentale Chapitre I : Matériel et méthodes Chapitre I : Matériel et méthodes Chapitre I : Matériel et méthodes Chapitre I: Matériel et méthodes Partie biologique Partie biologique Partie biologique Partie biologique I- Matériel biologique I-1- Matériel végétal……………………………………………….… 36 I-2- Matériel animal…………………………………………….....… 36 I-3- Matériel bactérien………………………………………….…… 36 I-4- Armatia salina L.………………………………..………………… 37 II- Obtention des extraits végétaux…………………..…………………..… 38 III- Analyse qualitative ………………………………………………… 40 IV- Analyse quantitative IV-1- Dosage des polyphénols totaux ………………….……… 42 IV-2- Dosage des flavonoïdes totaux …………………..………… 42 IV-3- Dosage des tanins condensés ……………….…..………….. 43 V- Activité antioxydante V-1-piégeage des radicaux libres DPPH…………………………… 43 SOMMAIRESOMMAIRESOMMAIRE SOMMAIRE V-2-piégeage des radicaux libres ABTS……………………………… 44 V-3- Pouvoir réducteur…………………………………………………. 45 V-4- Capacité antioxydante par réduction de cuivre (CUPRAC) 46 V-5- Test du blanchiment du -carotène…………………………… 46 V-6- Capacité antioxydante totale (CAT) …………………………… 47 V-7- Chélation du fer ferreux…………………………………………. 48 V-8- Chélation des ions métalliques…………………..……………… 48 VI- Activité antibactérienne 49 VII- Evaluation de la cytotoxicité in-vitro sur les larves d'Artemia salina 51 VIII- Activité hémolytique …..…………….…..………………………. 52 IX- Activité anti-inflammatoire in vitro ………………..…………………….. 53 X- Activité inhibitrice de l'acétylcholinestérase …………………………… 53 XI- Evaluation de la toxicité aiguë 54 XII- Activité anti-inflammatoire in vivo ………………………………….…… 57 XIII- Activité antipyrétique ………………………………………….………… 58 XIIIII- Analyses statistiques………...…………………......................................... 59 Partie phytochimiquePartie phytochimiquePartie phytochimiquePartie phytochimique I-Chimie extractive I-1- Chromatographie sur couche mince (CCM)………………………... 60 I-2- Chromatographie liquide sous vide (VLC) ………………………… 60 I-3 Chromatographie sur colonne ouverte (CC)………………………… 60 II- Chimie structurale II-1- Spectroscopie de résonance magnétique nucléaire (RMN)………. 60 II-2- Spectrométrie de masse (SM)………………………………………... 61 III- Contrôle chromatographique des extraits……………………………….. 61 IV-Etude de l’extrait n-BuOH de l’espéce Scabiosa stellata V-Purification V-1- Etude de la fraction F-6’…………………………………………….. 63 V-2- Etude de la fraction F-7’……………………………………………. 65 Chapitre II : Résultats et discussionChapitre II : Résultats et discussionChapitre II : Résultats et discussionChapitre II: Résultats et discussion Partie biologique Partie biologique Partie biologique Partie biologique I- Extraction …………………………………………………………………… 66 II- Analyse qualitative uploads/Litterature/ these-doctorat-mouffouk-chaima.pdf