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Frottis sanguin (Ep 1): réalisation Pr Cathy Trumel scil Vet Academy 1 Frottis

Frottis sanguin (Ep 1): réalisation Pr Cathy Trumel scil Vet Academy 1 Frottis sanguin : réalisation pratique et méthode de lecture Jeudi 26 janvier 2017 C. Trumel T. Lavabre Pourquoi faire un frottis? Frottis sanguin (Ep 1): réalisation Pr Cathy Trumel scil Vet Academy 2 Confirmer les résultats de l’automate en cas d’anomalie des résultats chiffrés et/ou des graphiques Rechercher les anomalies morphologiques des cellules sanguines Rechercher des éléments positifs : parasites, autres agents infectieux, cellules tumorales Pourquoi faire un frottis ? Comment faire un frottis? Frottis sanguin (Ep 1): réalisation Pr Cathy Trumel scil Vet Academy 3 Sang veineux provenant d’un tube EDTA ou CTAD Etalement réalisé rapidement après le prélèvement Sang capillaire pour un enrichissement en parasites Comment faire un frottis ? C. Trumel - ENVT Attendre que le sang se répartisse tout le long du bord de la lame rodée avant de la faire glisser sur la lame porte-objet d’un mouvement ferme et régulier lame rodée lame porte-objet 2- Etalement : Ni trop rapide : frottis épais et court Ni trop lent : frottis trop long, Mouvement ferme et régulier. 1- Réalisation du frottis : Déposer une goutte de sang de petite taille à l’extrémité de la lame porte-objet. Approcher une lame rodée devant la goutte de sang en formant un angle d’environ 45° avec la lame porte-objet. 3- Sécher énergiquement le frottis à l’air par agitation, immédiatement après avoir effectué l’étalement. 4- Identifier la lame. Le frottis doit normalement être contenu en totalité sur la lame, sa queue n’atteignant pas l’extrémité de celle-ci. Comment faire un frottis ? Frottis sanguin (Ep 1): réalisation Pr Cathy Trumel scil Vet Academy 4 OUI NON Comment faire un frottis ? Frottis sanguin (Ep 1): réalisation Pr Cathy Trumel scil Vet Academy 5 Comment faire un frottis ? Selon les pathologies possibles de l’animal, le sang s’étale plus ou moins bien Ex : hyperprotéinémie ++ sang + visqueux, moins bien étalé anémie sang – visqueux (+ « liquide »), frottis trop long qui risque de sortir de la lame A retenir : Pour étaler plus loin : Diminuer l’angle entre la lame porte-objet et la lamelle Ralentir son geste Pour ne pas « trop » étaler : Augmenter l’angle entre la lame et la lamelle Accélérer son geste Déposer une très petite goutte Si la goutte est importante, ne pas attendre que toute la goutte se répartisse sur la lamelle avant d’effectuer l’étalement. C. Trumel - ENVT Colorants de type Romanovsky Coloration rapide Diff quick RAL 555 MGG rapide (Giemsa R) Autres Wright, Giemsa Colorants pour les réticulocytes Bleu de crésyl brillant Bleu de méthylène nouveau TestSimplet (lames précolorées) Colorants acides = gris /rose / orangé = éosinophile Colorants Basiques = bleu / violet = basophile ARN / ADN Corps de Heinz Comment faire un frottis ? Frottis sanguin (Ep 1): réalisation Pr Cathy Trumel scil Vet Academy 6 Comment faire un frottis ? RAL, Diff-Quick MGG Utilisation Plus rapide et souvent plus facile car habituel Plus long, mais pas plus de matériel nécessaire Type de coloration Romanowsky : - Très bonne coloration des cytoplasmes, agents infectieux - Bonne coloration des noyaux et nucléoles Mauvaise coloration des granulations des basophiles (aspect neutrophiles), lymphocytes à grains (aspect lymphocytes normaux) et mastocytes (aspect macrophages ou plasmocytes) Coloration granulations RAS Comment faire un frottis ?MGGRAL Frottis sanguin (Ep 1): réalisation Pr Cathy Trumel scil Vet Academy 7 Comment faire un frottis ?MGGRAL Comment faire un frottis ?MGGRAL Frottis sanguin (Ep 1): réalisation Pr Cathy Trumel scil Vet Academy 8 Comment faire un frottis ?MGGRAL Comment faire un frottis ? Quel que soit le colorant utilisé, quelques précautions pour une coloration optimale : Toujours utiliser des lames neuves et propres Ne pas tenter de réutiliser une lame Filtrer et/ou changer régulièrement ses colorants Afin d’éviter la formation d’artéfacts de coloration, ou de contaminer les lames avec des débris provenant d’une lame précédente S’assurer que les lames sont bien sèches avant de colorer Ne jamais toucher la surface de la lame Frottis sanguin (Ep 1): réalisation Pr Cathy Trumel scil Vet Academy 9 Envoi au laboartoire Préparer plusieurs lames Colorer une des lames pour vérifier la qualité de l’étalement Envoyer une ou plusieurs lames non colorées ; la lame déjà colorée peut être gardée à la clinique (huile à immersion, archivage, comparaison des résultats labo/clinique…) Envoyer dans une boite rigide, sans contact possible entre les lames et les bords de la boite Joindre le tube EDTA, sous couvert du froid si voyage > 24h Si besoin d’envoyer au laboratoire Envoi au laboratoire Si besoin d’envoyer au laboratoire Toujours joindre une feuille de demande d’analyse avec l’anamnèse et les commémoratifs correctement renseignés : l’interprétation des résultats et anomalies en dépend : Lymphocytose jeune / adulte Microcytose raciale Polyglobulie brachycéphale Formule de stress si traitement corticoïdes Modifications post-prandiales … Frottis sanguin (Ep 1): réalisation Pr Cathy Trumel scil Vet Academy 10 Envoi au laboartoire Si besoin d’envoyer au laboratoire Joindre également les résultats chiffrés donnés par l’analyseur de la clinique Résultats Graphiques / courbes Comment lire un frottis? Frottis sanguin (Ep 1): réalisation Pr Cathy Trumel scil Vet Academy 11 Trois étapes 1) Regarder toute la lame à x100 confirmer les résultats chiffrés : apprécier les densités cellulaires apprécier les répartitions des cellules repérer la zone de lecture 2) Faire une formule à x400 confirmer les résultats chiffrés 3) A x 1000 Apprécier la morphologie des cellules Estimer une numération plaquettaire Comment lire un frottis ? Comment lire un frottis ? Regarder toute la lame à x100 Toute la lame permet d’apprécier - la quantité de rouges / de blancs / les agrégats plaquettaires - la répartition : rouleaux / amas / agglutinats Frottis sanguin (Ep 1): réalisation Pr Cathy Trumel scil Vet Academy 12 Comment lire un frottis ? Apprécier la densité des rouges dans le corps de frottis et la zone de lecture Zone d’observation Tête Corps Queue Frottis sanguin (Ep 1): réalisation Pr Cathy Trumel scil Vet Academy 13 Comment lire un frottis ? Apprécier la quantité de leucocytes Comment lire un frottis ? Chercher les agrégats plaquettaires Sur les bords, dans la goutte et en queue de frottis Frottis sanguin (Ep 1): réalisation Pr Cathy Trumel scil Vet Academy 14 Faire une formule à x 400 Tête Corps Queue Zone de lecture Dans la zone de lecture repérée à x 100 Compter environ 100 GB, en créneaux Si leucopénie: créneaux courts, en bords de frottis Frottis sanguin (Ep 1): réalisation Pr Cathy Trumel scil Vet Academy 15 Estimer la numération plaquettaire à x 1000 Numération plaquettaire x 1000 Si pas d’agrégats Compter les plaquettes sur 10 champs Calculer la numération plaquettaire - Moyenne du nbre de plaquettes sur 10 champs : M - M x 20.109 = num/L - Ex ici : 5 plq sur 3 champs soit 25.109 /L Frottis sanguin (Ep 1): réalisation Pr Cathy Trumel scil Vet Academy 16 Apprécier la morphologie cellulaire à x1000 Frottis normal Frottis sanguin (Ep 1): réalisation Pr Cathy Trumel scil Vet Academy 17 Aspect de la zone de lecture « Tapis » d’hématies régulièrement espacées, non collées les unes aux autres. Hématies de taille homogène, bords lisses et réguliers. Pâleur centrale chez le chien Chez le chat : quelques corps de Howell-Jolly possible Frottis normal Frottis normal Zone d’observation Tête Corps Queue Frottis sanguin (Ep 1): réalisation Pr Cathy Trumel scil Vet Academy 18 Frottis normal Les leucocytes normaux du chien basophile neutrophile éosinophile lymphocyte monocyte Frottis normal Frottis sanguin (Ep 1): réalisation Pr Cathy Trumel scil Vet Academy 19 Les leucocytes normaux du chat lymphocyte monocyte basophile éosinophile neutrophile Frottis normal Conclusion Frottis sanguin (Ep 1): réalisation Pr Cathy Trumel scil Vet Academy 20 Nécessité d’une vision intégrée : résultats chiffrés et observation du frottis Le frottis seul : gros risques d’erreurs ou de perte de temps (sauf piro !!) Le frottis envoyé au labo: pourquoi ? Conclusion Conclusion Lire un frottis : mode d’emploi 1) Lecture en cas d’anomalies des résultats chiffrés et/ou graphiques 2) Lecture systématisée Toute la lame à x100 apprécier la densité des rouges, leur répartition chercher les agrégats plaquettaires repérer la zone de lecture La zone de lecture à x400 (+ la queue de frottis) apprécier la répartition des blancs formule La zone de lecture à x1000 estimer la numération plaquettaire apprécier la morphologie des cellules Dresser la liste des anomalies Frottis sanguin (Ep 1): réalisation Pr Cathy Trumel scil Vet Academy 21 Merci de votre attention ! uploads/Litterature/frottis-sanguin-realisation-et-lecture 1 .pdf