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Création du document : 02 Mars 2022 Nom Fonction Date et Signature Auteur(s) FO

Création du document : 02 Mars 2022 Nom Fonction Date et Signature Auteur(s) FOLLY Yao Anani Surveillant du laboratoire Vérificateur(s) Personne validant le document Evolution du document Versio n Date d’application Modification faite par Modifications opérées par rapport à version précédente HÔPITAL STE JOSEPHINE BAKHITA 13 B.P. 119 Agoé-Kové Route de Mission Tové Tel : 00228-70-47-06-62 PROCEDURE DE DOSAGE DE LA GLYCEMIE Code : PDG-HSJB-01 Version :01 Nombre de pages : Date d’application : Table des matières 1- Objectifs et portée.......................................................................................................................3 2- Abréviations et définitions..........................................................................................................3 3- Tâches, autorisations et responsabilités......................................................................................3 4- Principe......................................................................................................................................3 5- Sécurité et environnement..........................................................................................................3 6- Échantillon :...............................................................................................................................4 7- Équipements et fournitures.........................................................................................................4 8- Réactifs et produits chimiques....................................................................................................4 9- Contrôle de la qualité..................................................................................................................4 10- Mode opératoire......................................................................................................................5 11- Valeurs de référence :.............................................................................................................6 12- Interférences...........................................................................................................................6 13- Valeurs critiques.....................................................................................................................6 14- Formulaires connexes.............................................................................................................6 15- Références..............................................................................................................................6 16- Pièces jointes..........................................................................................................................6 HÔPITAL STE JOSEPHINE BAKHITA 13 B.P. 119 Agoé-Kové Route de Mission Tové Tel : 00228-70-47-06-62 PROCEDURE DE DOSAGE DE LA GLYCEMIE Code : PDG-HSJB-01 Version :01 Nombre de pages : Date d’application : 1- Objectifs et portée Cette procédure vise à décrire les différentes étapes du dosage du glucose dans le sérum, le plasma, le liquide céphalorachidien (LCR), et les urines. Elle permet de diagnostiquer un éventuel diabète 2- Abréviations et définitions CIQ : Contrôle Interne de Qualité GOD : Glucose Oxydase LCR : Liquide Céphalorachidien PAP : Amino Antipyrine SL : Surveillant du laboratoire RQ : Responsable Qualité 3- Tâches, autorisations et responsabilités Tâche Autorisé Responsable Démarrage du spectrophotomètre et maintenance quotidienne RQ, SL SL Mesure à blanc RQ, SL SL Préparation des réactifs RQ, SL SL Préparation des sérums de contrôle RQ, SL SL Passage des contrôles et validation des contrôles RQ, SL SL Passage des échantillons RQ, SL SL Validation analytique RQ, SL SL 4- Principe Il s’agit d’une méthode enzymatique (GOD- PAP) avec une lecture à point final. Le glucose est oxydé par le Glucose oxydase en acide gluconique avec production de l’eau oxygénée qui réagit en présence du Peroxydase (POD) avec le Chloro 4 phénol et l’Amino Anti Antipirine (PAP) pour former la quinonéimine (Composé rouge) suivant la réaction ci-dessous : ß- D - Glucose + O2 + H2O Acide gluconique + H2O2 2H2O2 + Phénol + 4-aminophénazone Quinoneimine + 4H2O La densité optique de la quinoneimine à 500 nm est proportionnelle à la quantité de glucose. HÔPITAL STE JOSEPHINE BAKHITA 13 B.P. 119 Agoé-Kové Route de Mission Tové Tel : 00228-70-47-06-62 PROCEDURE DE DOSAGE DE LA GLYCEMIE Code : PDG-HSJB-01 Version :01 Nombre de pages : Date d’application : 5- Sécurité et environnement - Utiliser les équipements de protection (Gant, blouse, lunettes) - Rincer abondamment à l’eau en cas de contact avec la peau ou les yeux. - Respect la procédure de tri et de gestion des déchets Par mesure de sécurité, tous échantillon doivent être traités comme potentiellement infectieux. 6- Échantillon : Matériel Quantité minimale Stabilité Sérum 50 µl 8 h à 25 °C, 72h entre 2 et 8° C Plasma (héparine) 50 µl 8 h à 25 °C, 72h entre 2 et 8° C Plasma (tube fluoré) 50 µl 24h à 25 °C LCR 50 µl -20 °C Urine 50 µl 24 h avec 5 ml d’acide acétique glacial 7- Équipements et fournitures Consommable Embouts de pipette, 10-100 µl Embouts de pipette, 100-1000 µl Tube à hémolyse Matériel et équipement : Spectrophotomètre Micropipette 10-100 µl Micropipette 100-1000 µl 8- Réactifs et produits chimiques Désignation Réactif Conditions de stockage Lieu de stockage Flacon R1 Tampon enzyme 2 à 8 ° C Réfrigérateur Flacon R2 Chromogène 2 à 8 ° C Réfrigérateur Flacon R3 (Etalon primaire) Glucose 1 g/l 2 à 8 ° C Réfrigérateur Sérum de contrôle normal Sérum -10 à 20 °C Réfrigérateur Sérum de contrôle pathologique Sérum -10 à 20 °C Réfrigérateur - Préparation de la solution de travail : Mélanger le volume d’eau distillée indiqué sur le flacon R1 avec le contenu du flacon R2. Après dissolution (environ 2 minutes), HÔPITAL STE JOSEPHINE BAKHITA 13 B.P. 119 Agoé-Kové Route de Mission Tové Tel : 00228-70-47-06-62 PROCEDURE DE DOSAGE DE LA GLYCEMIE Code : PDG-HSJB-01 Version :01 Nombre de pages : Date d’application : ajouter le contenu du flacon R2 et mélanger doucement. Conserver le réactif à l’abri de la lumière. - Stabilité : La solution de travail est stable 2 ans jusqu’à la date de péremption indiquée sur le flacon. 9- Contrôle de la qualité Faire au moins un contrôle de qualité (Sérum de contrôle normal, sérum de control pathologique) dans chaque série ou au moins par 24 heures. Procédure de contrôle qualité 10- Mode opératoire o Enregistrement et étiquetage : Les échantillons sont enregistrés après avoir vérifié leurs conformités. o Centrifugation et décantation : Centrifuger à 4000 tours pendant 10 minutes puis décanter le sérum. o Préparation de la liste de travail : Faire la liste de travail o Ramener les réactifs à la température du Laboratoire et préparer les réactifs si nécessaire o Démarrage du spectrophotomètre et maintenance quotidienne : rinçage de la cuve avec l’eau distillée. Vérifier l’état de la cuve de lecture en faisant une mesure à blanc. Le blanc consiste mesurer la densité optique de l’eau distillée. o Dosage des échantillons : Le dosage des échantillons est fait comme l’indique le tableau ci-dessous Blanc Etalon Dosage Réactif 1ml 1ml 1ml Eau déminéralisée 10 µl Etalon 10 µl Spécimen 10 µl Bien mélanger et incuber pendant 10 minutes à 37°C ou 20 minutes à la température ambiante puis lire à 500 nm ( 560). La coloration est stable de 15- 20 minutes et décroit lentement. HÔPITAL STE JOSEPHINE BAKHITA 13 B.P. 119 Agoé-Kové Route de Mission Tové Tel : 00228-70-47-06-62 PROCEDURE DE DOSAGE DE LA GLYCEMIE Code : PDG-HSJB-01 Version :01 Nombre de pages : Date d’application : Il est impératif de valider les résultats des sérums de contrôle normal et pathologique avant d’analyser chaque série d’échantillon. o Calcul Résultat : | (Dosage )|×Concentrationétalon |(Etalon)| o Validation technique : Elle consiste à vérifier le bon déroulement des différentes phases de réalisation des analyses et surtout de la validité des CIQ. o Intervalle de mesure : 0,10 – 5 g/l, diluer au 1/2 avec du sérum physiologique si la valeur est supérieur à 5g/l (28 mmol/l). o Facteur de conversion g/l x 5,56 = mmol/l 11- Valeurs de référence : Glycémie à jeun : 0,70-1,10 g/l Glycémie post-prandiale (2 heures après) : < 1,40 g/l 12- Interférences Acide ascorbique : Pas d’interférence jusqu’à 100 mg/l Bilirubine totale : Interférence négative à partir de 200 mg/l Bilirubine directe : Pas d’interférence Hémolyse : Pas d’interférence Lactescence : Interférence positive à partir de 6,26 g/l de triglycérides 13- Valeurs critiques Valeurs critiques : Glycémie < 0,45 g/l ou Glycémie > 4,5 g/l 14- Formulaires connexes - Fiche de paillasse : - Fiches de gestion des CIQ : 15- Références - Normes ISO 15189 - Fiche technique du réactif du dosage du glucose (GOD-PAP) BIOLABO Ref : 87109. 16- Pièces jointes Fiche technique de la notice de réactif en cours d’utilisation HÔPITAL STE JOSEPHINE BAKHITA 13 B.P. 119 Agoé-Kové Route de Mission Tové Tel : 00228-70-47-06-62 PROCEDURE DE DOSAGE DE LA GLYCEMIE Code : PDG-HSJB-01 Version :01 Nombre de pages : Date d’application : uploads/Management/ procedure-du-dosage-de-la-glycemie.pdf