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1 Cours de Validation des méthodes d’analyse BACQ Institut supérieur de Biotech

1 Cours de Validation des méthodes d’analyse BACQ Institut supérieur de Biotechnologie de Sidi Thabet Méthode d’analyse Méthode d’analyse Les objectifs de l’analyste Analyser: donner un résultat Montrer la fiabilité de résultat Démarches de contrôle qualité Démarches de contrôle qualité Méthode d’analyse et validation de la méthode d’analyse Méthode d’analyse et validation de la méthode d’analyse Qualification des instruments Formation et évaluation des opérateur Validation des méthodes 3 Une méthode analytique ??? Une méthode analytique est définie de la manière suivante: «procédure écrite décrivant l’ensemble des moyens et modes opératoires nécessaires pour détecter et/ou doser l’analyte, c’est-à-dire: domaine d’application, principe et/ou réactions, définitions, réactifs, appareillage, modes opératoires, expression des résultats, fidélité, rapport d’essai (ISO 78-2) ». 4 Les analyses réalisées dans les cadres de: Les méthodes d’analyses: outil essentiel de contrôle de qualité - Préparation des dossiers d’AMM -des contrôles de routine, -des études de stabilité, -des analyses d’impuretés, 5 Types d’essais Essais de Dosage A pour objet de mesurer la quantité de substance à analyser contenue dans un échantillon donné. Essai d’identification Les identifications ont pour objet de confirmer l’identité d’une substance à analyser contenue dans un échantillon. Cet objectif est généralement réalisé par comparaison de l’échantillon et d’un matériel de référence pour une certaine propriété (ex: temps de rétention, spectre, etc). Essai de Pureté Les essais de pureté peuvent être soit: • Essais quantitatifs; • Essais limites. L’essai doit refléter avec exactitude les caractéristiques de pureté de l’échantillon. 6 Application de la méthode validée pour des analyses de routine Vérifier que ces conditions analytiques fournit des résultats fiables et stables Validation de la méthode analytique. Choisir les conditions analytiques optimales: Développement ou l’optimisation de la méthode. Une méthode analytique Cycle de vie d’une méthode analytique 7  L’optimisation d’une méthode analytique: consiste à définir les conditions analytique et a ajuster leurs valeurs en vu d’attendre l’objectif de la méthode. Développement et optimisation d’une méthode analytique Extraire, purifier, Séparer, identifier, quantifier, confirmer l’identité d’un ou des plusieurs analytes dans une matrice.  Le mot: ‘optimisation’, vient du mot «optimum»: le meilleur.  Pour Optimiser: fixer les objectifs de votre méthode: «if you don’t Know where you are going, any road will take you there ». Lewis Carroll 8 Exemple de démarches d’optimisation d’une méthode analytique chromatographique Optimiser La Nature et polarité de la phase stationnaire La composition de la Phase mobile  Le débit de la phase mobile La nature et la longueur d’onde de détection La volume d’injection La température de la colonne de séparation en se basant sur: 1- Caractéristiques des analytes 2- Complexité de l’échantillon 3- Objectifs de la méthode 4- Paramètres expérimentaux 5- Paramètres de conformité 9 Exemple: Optimisation de la composition de la phase mobile Méthode Empirique: Par tâtonnement: essayer plusieurs compositions jusqu’à avoir la bonne séparation • Méthode de triangle de Snyder: Effectuer 7 essais uniquement pour choisir la nature du solvant organique et le nombre de solvants. 10 Après l’optimisation !!!! Quelle est la garantie que cette méthode délivra des résultats fiables pour les échantillons inconnus ??? Validation de la méthode d’analyse La seul garantie est que la méthode soit validée 11 Validation: que des définitions…  Valider: Rendre ou déclarer valide, valable: confirmer, Justifier et homologuer. Dans un environnement réglementé (BPF, BPL, Pharmacopées), la validation des méthodes est requise pour garantir la qualité des résultats au même titre que la qualification des équipements.  Validation est une confirmation par des preuves tangibles que les exigences pour une utilisation spécifique ou une application prévue ont été satisfaite (ISO 9000). 12 Validation des méthodes analytiques - Historique Pharmacopeial Forum - current concept for the validation of compendial assays (1986) Federal Code of Regulations - Guidelines for submitting samples and analytical data for method evaluation (21CFR 10.90, 1987) Pharmacopeial Forum - Validation of compendial assays - Guidelines (1988) USP XXI (1989) and XXII (1990) FDA: Center for Drug Evaluation and research – Validation of chromatographic methods - Reviewer guidance (1994) ICH-Q2A / ICH-Q2B: Validation of analytical procedures: definitions and terminology/ methodology (1995). FDA - CDER Draft - Analytical procedure and method validation (2000). 13 Validation des méthodes analytiques - Historique (CEE) Note explicative CEE (III-844-87, 1989) Commission SFSTP - Guide de validation des méthodes analytiques (1992) Protocole expérimental. Groupe d'experts de la Pharmacopée Européenne. Directive 2002/657/EC (SANCO) complément à la directive 96/23/EC au sujet des performances des méthodes analytiques et à l’interprétation des résultats (09/2002).  ISO 5725 ... 14 Validation en pharma: Documents de référence –Partie I -Généralités : STP Pharma Prat., 7, 2003 –Partie II –Statistiques : STP Pharma Prat., 16, 2006  SFSTP: «Guide de validation analytique Rapport d’une commission SFSTP”: –I. Méthodologie: STP Pharma Pratiques 2 (4) 205- 226 1992 –II. Exemples d’application: (5) 1992: «Validation des procédures analytiques quantitatives: Harmonisation des démarches”: 15 • Q2B: «Methodology»: Son but est de fournir des conseils et recommandations sur la manière d’appréhender les différentes caractéristiques de la validation pour chaque méthode analytique. Guide ICH Q2: «Analytical Validation» En outre, le document fournit une indication sur les données qui devraient être présentées dans un dossier d’enregistrement. • Q2A:«Text on Validation of Analytical Procedures»: Présente une discussion sur les caractéristiques qui doivent être prisent en compte au cours de la validation des méthodes. 16 « Le laboratoire doit confirmer qu’il peut correctement appliquer des méthodes normalisées avant de les mettre en œuvre pour des essais ou des étalonnages. » Selon la norme ISO 1725 «Le laboratoire doit valider les méthodes non normalisées, les méthodes conçues/développées par le laboratoire, les méthodes employées en dehors de leur domaine d’application prévu, afin de confirmer que les méthodes sont aptes à l’emploi prévu.» Vérifier, confirmer ou valider Une méthode d’analyse 17 De la population à l’échantillon par différentes opérateurs Lot de produit devisé en n échantillons analysées analysées en différents occasions dans différents laboratoires par différents méthodes Avec différentes instruments Séries de n valeurs population échantillons Les N valeurs possibles d’une mesurande Les n valeurs obtenus lors de mesurage 18 Résultat d’un mesurage répété  La meilleure estimation du résultat de la mesure est donner par la moyenne arithmétique de différentes valeurs de la série: Mais, à quelle incertitude (Exigence de l’ISO 17025) 19 Ecart type de l’échantillon • L’écart type calculé est d’ordre n (appelé écart type de la population): Mais pouvez vous répéter plus que n fois ? • L’écart type est normalement calculé avec la valeur vrais du grandeur alors que elle est inconnu, on utilise la moyenne qui est estimée à partir des valeurs xi ??? • Afin de minimiser ces sources d’erreurs, l’écart type d’ordre n–1 (appelé écart type de l’échantillon) sera utilisé: 20 Variance et coefficient de variation  La Variance est égale à l’écart-type au carré: Var=s2 Seuls les variances «indépendantes» peuvent s’ajouter mais pas les écart-types.  Coefficient de variation ou écart-type relatif: C’est un critère d’appréciation de la dispersion par rapport à la moyenne. On utilise le coefficient de variation lorsque l’écart- type varie en fonction de la moyenne des résultats. 21 L’écart type de la moyenne  La moyenne est variable  Sur la moyenne de toutes les mesures, l’erreur est plus faible (Mesurer plusieurs fois la même chose diminue l’incertitude): L’écart type de la série ne reflète pas l’erreur sur la moyenne ou la variation de la moyenne L’écart type de la moyenne ou l’erreur sur la moyenne des mesures effectués se découle directement de l’erreur sur xi par: 22 Limites de confiance et «T» de Student A une limite de confiance de p%, xi peut avoir la valeur : Donc xi existe dans l’intervalle: S: l’écart type, t: t statistique de Student et N: nombre des mesures 23 La valeur de t est donnée par le tableau de Student selon la probabilité de travail et le DDL = N - 1 Par convention la valeur de K est 2 pour 25 mesures ou plus et > à 2 (typiquement 3) pour un faible nombre de mesures «T» de Student 24 Les valeurs expérimentales obtenus lors des analyses ou des travaux de contrôle qualité dans un laboratoire feront l’objet d’un traitement statique et nécessitent l’application des certains tests spastiques pour: - Montrer la normalité de la distribution de valeurs obtenues - éliminer les valeurs aberrantes - Comparer les moyennes de deux groupes ou plus - Comparer les variances de deux groupes ou plus TESTS STATISTIQUES Afin d’estimer la répétabilité d’une instrument de mesure, une mesurage a été répétées 10 fois, les résultats sont ci- dessous: 25 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 4.6 6.1 4.8 5.5 5.8 4.9 5.2 14.4 5.4 5.3 - Représenter graphiquement cette distribution -Calculer les estimateurs de cette distribution avec et sans la valeur qui vous semble aberrante,,, Il y a-t-il une différence ? - Comment peut-on confirmer la présence d’une valeur aberrante ou suspecte ? Les points aberrants d’une série de valeurs - Moyenne avec valeur suspecte: 6.2, S2 = 8.5 - Moyenne avec valeur suspecte: 5.2, S2 = 0.23 26 - Un résultat aberrant est, par définition, uploads/Management/cours-validation-bacq-3-prot-ich-2015-2016-p2.pdf