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HAL Id: tel-01749449 https://hal.univ-lorraine.fr/tel-01749449 Submitted on 29 Mar 2018 HAL is a multi-disciplinary open access archive for the deposit and dissemination of sci- entific research documents, whether they are pub- lished or not. The documents may come from teaching and research institutions in France or abroad, or from public or private research centers. L’archive ouverte pluridisciplinaire HAL, est destinée au dépôt et à la diffusion de documents scientifiques de niveau recherche, publiés ou non, émanant des établissements d’enseignement et de recherche français ou étrangers, des laboratoires publics ou privés. Influence des conditions de culture sur la quantité de l’INF-[gamma] recombinant produit par des cellules CHO au cours de procédés discontinus Marie-Françoise Clincke To cite this version: Marie-Françoise Clincke. Influence des conditions de culture sur la quantité de l’INF-[gamma] recom- binant produit par des cellules CHO au cours de procédés discontinus. Alimentation et Nutrition. Institut National Polytechnique de Lorraine, 2010. Français. NNT : 2010INPL034N. tel-01749449 AVERTISSEMENT Ce document est le fruit d'un long travail approuvé par le jury de soutenance et mis à disposition de l'ensemble de la communauté universitaire élargie. Il est soumis à la propriété intellectuelle de l'auteur. Ceci implique une obligation de citation et de référencement lors de l’utilisation de ce document. D'autre part, toute contrefaçon, plagiat, reproduction illicite encourt une poursuite pénale. Contact : ddoc-theses-contact@univ-lorraine.fr LIENS Code de la Propriété Intellectuelle. articles L 122. 4 Code de la Propriété Intellectuelle. articles L 335.2- L 335.10 http://www.cfcopies.com/V2/leg/leg_droi.php http://www.culture.gouv.fr/culture/infos-pratiques/droits/protection.htm INSTITUT NATIONAL POLYTECHNIQUE DE LORRAINE Ecole Nationale Supérieure d’Agronomie et des Industries Alimentaires (ENSAIA) Ecole doctorale Ressources Procédés Produits Environnement (RP2E) Laboratoire Réactions et Génie des Procédés (LRGP) Laboratoire Lipidomix THESE Présentée à l’INPL par Marie‐Françoise CLINCKE Ingénieur de l’Université de Technologie de Compiègne (UTC) en vue d’obtenir le grade de DOCTEUR DE L’INSTITUT NATIONAL POLYTECHNIQUE DE LORRAINE Spécialité : Procédés Biotechnologiques et Alimentaires INFLUENCE DES CONDITIONS DE CULTURE SUR LA QUANTITE ET LA QUALITE DE L’IFN‐ RECOMBINANT PRODUIT PAR DES CELLULES CHO AU COURS DE PROCEDES DISCONTINUS Soutenue publiquement le 8 juillet 2010 devant la commission d’examen Membres du jury : Président du jury : M. Yves‐Jacques SCHNEIDER Professeur à l’UCLouvain, Louvain‐la‐Neuve Rapporteurs : Mme Véronique CHOTTEAU Directeur de Recherche au KTH, Royal Institute of Technology, Stockholm M. Yves‐Jacques SCHNEIDER Professeur à l’UCLouvain, Louvain‐la‐Neuve Examinateurs : M. Jean‐Louis GOERGEN Professeur à l’ENSAIA‐INPL, Nancy Mme Frances YEN POTIN Directeur de Recherche INSERM, Lipidomix, Vandoeuvre‐lès‐Nancy Mme Virginie OGIER Ingénieur, Responsable Recherche & Développement, Genclis, Vandoeuvre‐lès‐Nancy Mme Anne GREGOIRE Directeur Scientifique, Cytheris, Issy‐lès‐Moulineaux Invité : M. Emmanuel GUEDON Chargé de Recherche CNRS, LRGP, Nancy Remerciements Les travaux qui font l’objet de ce mémoire ont été réalisés au sein du Laboratoire Réactions et Génie des Procédés, dans le groupe « Bioprocédés – Biomolécules ». Je remercie M. Gabriel Wild, directeur du LRGP, pour m’avoir accueillie au sein de son laboratoire. Ce projet ayant été effectué sous le dispositif Cifre, je tiens également à remercier la société Genclis et l’Association Nationale de la Recherche et de la Technologie. J’aimerais exprimer ma reconnaissance envers Mme Frances Yen Potin du Laboratoire Lipidomix, pour avoir accepté d’encadrer cette thèse en qualité de Directrice. Je vous remercie pour votre contribution au bon déroulement de cette thèse ainsi que pour votre disponibilité et votre sympathie. Je tiens à exprimer tout particulièrement ma reconnaissance envers mes co‐directeurs de thèse, M. Jean‐Louis Goergen et M. Emmanuel Guedon. A vous deux, merci pour la patience et la gentillesse que vous avez eues à mon égard. Je tiens à souligner que vos conseils, votre rigueur et vos connaissances scientifiques m’ont beaucoup apporté. Je vous suis reconnaissante du temps que vous avez su me consacrer pour répondre à mes nombreuses questions, mais également de l’autonomie et de la confiance que vous m’avez accordées. J’exprime ma profonde gratitude à Mme Véronique Chotteau et M. Yves‐Jacques Schneider pour avoir accepté de juger ce travail en tant que rapporteurs. Mes remerciements vont également à Mme Virginie Ogier et à Mme Anne Grégoire pour avoir accepté d’examiner ce travail et de participer au jury de thèse. Au sein de Genclis, merci à Viriginie pour avoir suivi ce travail, à Olivier pour ses conseils avisés en purification et un grand merci à Dagmar, Marie et Christelle pour m’avoir initiée au Western‐blot et pour votre gentillesse. Merci aussi à Audrey et Nathalie pour le travail administratif. Je voudrais sincèrement remercier tous les membres du groupe « Bioprocédés – Biomolécules », qui, chacun à leur façon, ont contribué à ce travail. Je remercie vivement Mathilde, Caroline, Amal, Frédérique B., Emma, Naziha, Jean‐Matthieu, Claudia, Françoise, Kenza, Evelyne et Fabrice pour les très bons moments que j’ai passés avec eux dans la salle blanche (pour certains), au labo, au bureau ou tout simplement à Nancy. Un grand merci, tout particulièrement, à Kenza, Mathilde, Caroline, Amal, Françoise et Stéphanie pour votre soutien au cours de ces derniers mois et puis surtout pour nos inlassables discussions ! Je ne voudrais surtout pas oublier mes deux stagiaires, Frédérique M. et Iréna, qui ont fortement contribué à ces travaux de thèse. Un grand merci également aux étudiantes de 3e année de l’ENSAIA de la Spé Biotech, Audrey, Ludmila et Iréna (Spé 2008), et Catherine, Fanny, Anaïs et Chloé (Spé 2009) pour leur enthousiasme et leur sympathie. Merci aussi à Fabrice, pour son savoir‐faire technique et à Mickael, pour son aide en statistiques. Mes pensées vont à mes amies de longue date, Camille, Elodie, Amélie, Suzanne, Karen et Caroline. Je ne pouvais pas faire de remerciements sans vous mentionner ! Merci de m’avoir permis de passer quelques mémorables vacances, week‐end ou soirées tout au long de cette période de thèse. Pour finir, mes derniers remerciements se tournent vers ma famille et vers Laurent. Tout d’abord, je remercie du fond du cœur mes parents, et Anne‐Sophie et J‐E pour m’avoir écoutée durant ces trois années et puis, tout simplement, merci d’être toujours là pour moi. A Laurent, je sais que ces derniers mois furent assez fatigants mais grâce à une solidarité et un soutien sans faille, tu m’as aidée à aborder et terminer cette thèse de façon sereine. Je t’en suis, parmi tant d’autres choses, reconnaissante. LISTE DES ABREVIATIONS ADCC : antibody‐dependant cellular cytotoxicity ADN : acide désoxyribonucléique ADNc : acide désoxyribonucléique codant ADP : adénosine‐5’‐diphosphate AMM : autorisation de mise sur le marché AMP : adénosine‐5’‐monophosphate APMA : acide para‐aminophenylmercurique ARN : acide ribonucléique Asn : asparagine ATP : adénosine‐5’‐triphosphate BDM : protein‐free basal defined medium (PF‐ BDM) BHK : baby hamster kidney BME: Eagle’s basal medium BSA: bovine serum albumin CDG : congenital disorder of glycosylation CHO : Chinese hamster ovary CMC: Concentration micellaire critique CMH: Complexe Majeur d’Histocompatibilité CMRL: Connaught Medical Research Laboratories CNX: calnexine CRT: calréticuline Dhfr : dihydrofolate réductase DMEM: Dulbecco’s modification of eagle’s medium DMSO : diméthylsulfoxide DMT1: DiMetal Transporter 1 Dol‐P : dolichol phosphate DO : oxygène dissous EBx : cellule souche embryonnaire de canard EDTA : éthylène diamine tétra‐acétique ELISA : enzyme linked immuno‐sorbent assay EMEA : European Medical Agency EPO : érythropoïétine FCS‐BDM: milieu BDM avec 5% de sérum FCS‐RPMI: milieu RPMI avec 5% de sérum FDA : Food and Drug Administration FSH: Follicle stimulating hormone Fuc: fucose FucT: fucosyltransférase GalNAc: N‐acétylgalactosamine GlcNAc: N‐acétylglucosamine Glc : glucose Gln : glutamine GMEM: Glasgow’s modification of Eagle’s medium GnTIII: acétylglucosaminyltransférase III GPI: glycosyl‐phosphatidylinositol GRAS: Generally Recognized as Safe GUS: ‐D‐glucuronidase hCG: gonadotropine chronique humaine HCl : acide chlorhydrique HEK : Human embryonic kidney HLA‐DR : antigènes d’histocompatibilité de classe II HLy : Hydroxylysine HMW : High molecular weight HPLC : chromatographie liquide à haute performance HPr : Hydroxyproline HS: Héparane Sulfate IFN : interféron IFN‐R: récepteur à l’interféron‐gamma Ig G: immunoglobuline G IL : interleukine IMDM: Iscove’s modified dulbecco’s medium JAK: Janus kinases LDH : Lactate deshydrogènase LFB: Laboratoire français du Fractionnement et des Biotechnologies LMW : Low molecular weight LRGP : Laboratoire Réactions et Génie des Procédés m : masse MCB : Master Cell Bank MALDI: Matrix assisted laser desorption ionization Man : mannose M‐CSF: macrophage colony‐stimulating factor MDCK: madin darby canine kidney MEC: Matrice extra‐cellulaire MMP: métalloprotéase MTX: méthotréxate NADPH: nicotinamide adénine dinucléotide phosphate NANA: acide N‐acétyl‐neuraminique NeuAc : acide N‐acétylneuraminique NeuGc : acide N‐glycolylneuraminique NK: natural killers NS0: myélome de souris NTBI : non‐transferrin bound iron PERC.6 : cellules de la rétine humaine PF‐68 : pluronic F‐68 PhRMA : Pharmaceutical Research and Manufacturers of America PMSF: flurorure de phenylméthanesulfonyle PNGase : peptide‐N‐glycosidase PTM: modification post‐traductionnelle PtdEtn: phosphatidyléthanolamine PtdSer: phosphatidylsérine QbD: Quality by Design Réf : référence RE : reticulum endoplasmique ROS : reactive oxygen species rhM‐CSF : macrophage colony‐stimulating factor recombinant humain RPMI : Roswell Park Memorial Institute SDS : dodécylsulfate de sodium SEAP : Ser : sérine Sf9 : Spodoptera frugiperda SF‐RPMI : milieu RPMI sans sérum SIDA : syndrome dʹimmuno‐déficience acquise SiT : sialyltransférase Sp2/0 : myélome de souris STAT‐1: Signal Transduction and Activator of Transcription – 1 TCA: cycle des acides tricarboxyliques Tf : transferrine TfR : récepteur de la transferrine THP‐1 : Human acute monocytic leukemia cell line Thr : thréonine TIBS: Transferrine‐Insuline‐Albumine‐Sélénium t‐PA : uploads/Science et Technologie/ inpl-2010-clincke-m.pdf