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Ministère de l’enseignement supérieur et de la recherche scientifique Universit

Ministère de l’enseignement supérieur et de la recherche scientifique Université de science et technologie houri Boumediene Rapport de stage d’étude en Biotechnologie Et Santé Laboratoire des milieux de culture et réactif et diagnostic du l’Institut pasteur d’Alger Nom/prénom :  MOUHOUNI Ikram  Spécialité : Biotechnologie et Santé Encadreur :  Dr I.NAIT SAADA  Dr M.L.SEMRI Période de stage : 18/0 4/20 21 -28/0 4/20 21 2020 /2021 Sommaire REMERCIEMENTS…………………………………………………………………………………...3 INTRODUCTION………………………………………………………………………………………4 DESCRIPTION DES STRUCTURE…………………………………………………………………5 Institut Pasteur d'Algérie……………………………………………………………………………...5 Département des réactifs de laboratoire……………………………………………………………5 Laboratoire des réactifs et diagnostic ……………………………..……………………………….5 Laboratoire des milieux de culture………………………………..…………………………………6 PARTIE THEORIQUE………………………………………………………………………………..7 Généralités sur les milieux culture…………………………………………………………………..7 Définition……………………………………………………..………………………………………..7 Classifications…………………………………………………………….…………………………..7 PARTIE PRATIQUE………………………………………………………………………………….9 1. Préparation des milieux de culture ……………………………………………………….9 2. Répartition ………………………………………………………………………………….11 3. Stérilisation……………………………………………………………………...................11 4. Contrôle de qualité………………………………………………………………..............12 5. Etiquetage et conditionnement…………………………………………………..............13 DES EXEMPLES DE MILIEU DE CULTURE…………………………………………………….14 CONCLUSION ………………………………………………………………………………………16 3 REMERCIEMENTS Tout d'abord, je remercie très vivement, Mr I.NAIAT SAADA le Chef de département des réactifs de laboratoires et Mr M.SEMRI le Chef de Laboratoire des Milieux de Culture pour leur accueil et pour m’avoir accepté en tant que Stagiaire au sein de leur structure et pour m'avoir consacré de leur temps et toute l'aide et les nombreux conseils qu’ils m’ont prodigués tout au long de ce travail. Je tiens à remercier tous les membres de l'équipe du stage, Mr Y.Djani, Mme N.Kerchouche qui ont contribué au succès de mon stage et n'ont jamais hésité à me donner toute l'information technique nécessaire et à partager leurs connaissances. 4 5 INTRODUCTION : Dans le cadre de préparation d’un rapport de stage d’étude en BIOTHECHNOLOGIE ET Santé, j’ai effectué un stage pratique de 10 jours au niveau d’INSTITUT PASTEUR D’ALGER à l’annexe de HAMMA au cours de ce stage au sein de service DES REACTIFE DE LABORATOIRE, LABORATOIRER DES MILIEUX DE CULTURES. Ce stage s’inscrit dans un cadre de pratique mes connaissances théoriques et l’acquisition de nouvelles connaissances. 6 DESCRIPTION DES STRUCTURES : Institut Pasteur d'Algérie : Institut Pasteur d'Algérie fut créé en 1894. Il avait pour mission au départ, d'assurer le traitement antirabique des personnes mordues. Actuellement, il a comme missions ;  La protection de la santé publique.  La surveillance et le contrôle épidémiologique des maladies infectieuses et Parasitaires  La participation aux grands programmes internationaux ou régionaux de la recherche.  La formation du personnel scientifique dans le cadre de leur activité de sante publique et de recherche. Département des réactifs de laboratoire : Le Département des Réactifs de Laboratoire est composé de deux laboratoires et de sept (0 7) unités : *Laboratoire Milieux de Culture (0 4 unités). *Laboratoire Réactifs de Diagnostic (0 3 unités). Laboratoire Réactifs de Diagnostic : Responsable de la préparation et la production des réactifs de diagnostique pour usage laboratoire de microbiologie. Il est constitué de trois unités et chaque unité á des ateliers 1 -Unité de Production des Réactif pour Test Biochimie Atelier de Préparation des Colorants et Réactifs en flacons 2- Unité de Productions des Réactifs Complémentaires des Milieux de Culture Atelier de Production des Suppléments on Disques Imprégnés. Atelier de Production des Suppléments Liquides en flacons antibio. 3- Unité de Contrôle In Process : Cette unité est chargée de la réalisation des différents types d'analyse : *physico-chimiques : Elle se limite à la mesure du pH. 7 * Microbiologiques : Elle s'effectue par la réalisation des Tests, citant :  Test de Stérilité.  Test de fertilité.  Test de mobilité. Laboratoire des milieux de culture : II assure la production des milieux de culture hydratés et déshydratés regroupe (4) unités : 1. Unité de Production des Milieux Hydratés : Atelier de Préparation Atelier de répartition. Atelier de Stérilisation. 2. Unité de Production des Milieux Déshydratés : 3. Unités de Conditionnement Atelier d'Etiquetage. Atelier de mise en carton. 4. Unité de contrôle in Process 8 PARTIE THEORIQUE : Généralités sur les milieux culture : 1-Définition Un milieu de culture est un support qui permet la culture de cellules, de bactéries, de levures, de moisissures afin de permettre leur étude. Il doit donc satisfaire à toutes les exigences nutritives des micro-organismes afin de permettre leur étude, les cellules trouvent dans ce milieu les composants indispensables pour leur Multiplication Un apport de la source d'énergie, de carbone, d'azote, Besoins en ions minéraux. En facteurs de croissances PH et force ionique voisins de la valeur optimum. Mais aussi parfois des éléments qui permettent de privilégier un genre bactérien ou une famille, pour cela on ajoute des éléments qui inhibent la croissance des micro-organismes indésirables. 2. Classifications Les milieux de culture sont classés selon différents critères en particulier Classification selon la formulation - Milieu synthétique. - Milieu semi-synthétique. - Milieu de culture empirique. Classification selon l’usage : - Milieu minimum. - Milieu ordinaire. - Milieu de culture sélectif. - Milieu de culture enrichi. 9 Classification selon la forme : 2-Bouillons : Les bouillons nutritifs sont des milieux de culture naturels, préparés à partir de substances naturelles d'origine animale comme le bœuf mais dont la composition chimique n'est pas exactement connue. Ils se présentent comme des milieux d'enrichissement. 3-Géloses : Une substance nutritive favorisant ou inhibant (selon leur composition) la prolifération et le développement des bactéries. Il se compose d’une base (agar, eau, minéraux, etc...) ainsi d’un indicateur coloré de ph ou de réaction d’oxydoréduction. 4-Milieux déshydratés : Les étapes de production sont : -Broyage des différents ingrédients à une granulométrie définie, mélange des différents ingrédients, et répartition manuelle du produit fabriqué en boites en matière plastique. 10 PARTIE PRATIQUE : 1-Préparation : la préparation passent en général par 3 étapes-clés Pesée des matières, dissolution et Ajustement du PH Pesée des matières : Peser la quantité nécessaire de chaque ingrédient en Prenant soin de mettre en place les équipements de protection individuelle (EP) et sous une hotte. Hotte de pesée Dissolution : On fait dissoudre toute la quantité des produits dans un volume d’eau distillée (selon la commande) dans des marmite pour les petites quantités moins de 50 l pour plus dans des cuves de préparation. Agiter lentement et régulièrement pour solubiliser les composants, La dissolution complète du milieu est obtenue lorsque la solution ne contient plus aucune particule sur la paroi de la marmite. Lors de la dissolution en filtre le milieu pour assurer qu’aucune particule ne reste dans le milieu. -Cuve de préparation. 11 Remarque : si le milieu contient l’Agar en l’ajoute après la filtration presque en utilise sauf une petite quantité. -Filtration de milieu. Ajustement du pH : Mesurer le PH à l’aide d’un pH-mètre à une température de 25°C. L’ajustement est généralement effectué avec une solution stérile d’acide chlorhydrique (HCL) Le PH mètre 12 2-Répartition : Les milieux préparés sont répartis selon le protocole utilisé : Les milieux liquides et gélosés en tube, en flacons à différents volumes. Les géloses inclinées après répartition incliner les tubes de manière à obtenir une pente oblique et un culot de 3 cm puis laisser refroidir à température ambiante. -Répartition de mileu. -gélose sabouraud inclinée en tube 3-Stérilisation : Après la répartition dans les contenants appropriés, le produit réparti est soumis à une stérilisation adéquate et le chauffage à l’autoclave à 121°C. Cependant, les milieux de culture sont stérilisés pendant une durée et à température spécifiques à chaque milieu de culture. Avant de sortir les milieux de l’autoclave il faut les refroidir d’abord pour éviter tout choc thermique. 13 4-Contrôle de qualité : On contrôle la qualité des milieux préparés par des tests de fertilité et stérilité par un ensemencement des souches bactériennes sur le milieu. C’est l’utilisation d’organisme de contrôle vivant, comportant des réactions prévisibles pour vérifier que les colleurs, les réactifs et les milieux fonctionnent et réagissent correctement. *Les étapes de contrôle :  Test de stérilité D’abord en prennent 6 échantillons dans de cas des flacons et 20 échantillons dans le cas des tubes en les incubes pendant (24h jusqu’à 48h). Après l’incubation si l’échantillon et contaminé en vas considérer le milieu comme un milieu mouvée, mais si le milieu est bien (non contaminé)  Test de fertilité : En trouve 2 type ordinaire et sélectif ; dans les milieux sélectif on fait 2 germes un devant être posé donc un milieu validé et l’autre germe devant être inhibée non posée veut dire un mauve milieu. Exemple : le milieu de culture EPA E. Coli croissance- Streptococcus croissance - →Milieu validé Vibrion cholereae croissance + 14 5- Etiquetage et Conditionnement : Se fait dans une salle conçue pour ça pour éviter la contamination. Les flacons et les tubes en verre sont directement étiquetés puis mit dans des cartons, le stockage est en fonction du produit. Si les résultats du contrôle qualité ne sont pas acceptables, la préparation de la commande doit être refaite à nouveau donc l'étiquetage aussi. 15 DES EXEMPLES DE MILIEU DE CULTURE :  Bouillon (ROTHE (S/C)) : Bouillon glucosé à l’Azide de sodium pour la recherche et dénombrement des Streptocoques fécaux dans les eaux, (test présomptif). Composition : Peptone de caséine, Extrait de viande, Glucose, Chlorure de sodium, Phosphate di potassique, Phosphate mono uploads/Science et Technologie/ rapport-de-stage-mileux-de-culture-fini.pdf