Remerciez-le!

Remerciez @Admin pour avoir partagé cet document gratuitement, de la manière la plus simple, en partageant sur les réseaux sociaux.

UE : BIOCHIMIE CLINIQUE TRAVAIL PERSONNEL DE L’ETUDIANT THEMES A DEVELOPER : 1.

UE : BIOCHIMIE CLINIQUE TRAVAIL PERSONNEL DE L’ETUDIANT THEMES A DEVELOPER : 1. Principe et méthode de l’électrophorèse 2. Principe de méthode de dosage du glucose 3. Technique et principe de dosage de la créatinine, 4. Technique et principe de dosage de l’urée 5. Technique et principe de dosage l’acide urique 6. Les méthodes immunométriques dans le dosage de la myoglobine Rédigé par : KAGNING TSINDA Emmanuel Matricule: 08N042FS Niveau : Etudiant en Master 1 Option : Bactériologie et virologie médicale Enseignant Dr Jules Clément Nguedia Assob Année académique : 2011-2012 UNIVERSITE DE NGAOUNDERE FACULTE DES SCIENCES Département des Sciences Biomédicales Filière Sciences Biomédicale-Option : Bactériologie et Virologie médicale UNIVERSITY OF NGAOUNDERE FACULTY OF SCIENCES Department of Biomedical Sciences Biomedical Sciences-Option: Medical Bacteriology and Virology Travail Personnel de l’Etudiant Kagning Tsinda Emmanuel Principe et méthode de dosage de la Créatinine Page 1/39 SOMMAIRE SOMMAIRE ........................................................................................................................................... 1 INTRODUCTION GENERALE ............................................................................................................ 3 THEME 1 : LE PRINCIPE ET LA PROCEDURE DE REALISATION DE ......................................... 4 I. INTERET DE L’ELECTROPHORESE ................................................................................. 4 II. PRINCIPE GENERAL (1) ................................................................................................... 4 III. PROCEDURES DE REALISATION DE L’ELECTROPHORESE : méthode avec les Instruments MIDIGEL© ................................................................................................................. 6 IV. APPLICATIONS DE L’ELECTROPHORESE ............................................................... 12 VI.1 Application de l’Electrophorèse à l’identification des phénotypes moléculaires et des génotypes ; cas de la drépanocytose (3) ..................................................................................... 12 VI.2 Application de l'électrophorèse en immunologie : séparation des anticorps sériques ......... 14 Thème 2 : PRINCIPE ET PROCEDURE DE DOSAGE DU GLUCOSE ........................................... 18 I. Intérêt clinique de la mesure de la Glycémie ........................................................................ 18 II. Méthode de Dosage : ............................................................................................................... 18 II.1 Principe se basant sur la méthode enzymatique de Trinder ........................................... 18 II.2 Procédure .............................................................................................................................. 19 THEME 3 : PRINCIPE ET DOSAGE DE L'UREE PAR LA METHODE CINETIQUE .................... 22 I. Intérêt du dosage ..................................................................................................................... 22 II. Principe du dosage enzymatique ...................................................................................... 22 III. Méthode de dosage .............................................................................................................. 22 THEME 4 : PRINCIPE ET METHODE DE DOSAGE DE LA CREATININE .................................. 25 I. INTERET CLINIQUE (10).................................................................................................. 25 II. PRINCIPE ET METHODE DU DOSAGE : méthode photométrique colorimétrique selon la réaction de JAFFE. ............................................................................................................................ 25 II.1 Principe ..................................................................................................................................... 25 II.2 Méthode de dosage (8) ............................................................................................................ 25 THEME 5 : PRINCIPE ET METHODE DE DOSAGE DE L’ACIDE URIQUE (10) ......................... 30 I. INTERET DU DOSAGE ........................................................................................................ 30 II. PRINCIPE ET METHODE DE DOSAGE ........................................................................ 30 II.1 Principe ................................................................................................................................. 30 II.b Méthode Uricase de dosage .................................................................................................... 30 THEME 6 : TECHNIQUES IMMUNOMETRIQUES DU DOSAGE DE LA MYOGLOBINE ......... 34 I. Généralités et Intérêt clinique du dosage de la myoglobine (11) ....................................... 34 Travail Personnel de l’Etudiant Kagning Tsinda Emmanuel Principe et méthode de dosage de la Créatinine Page 2/39 II. Méthodes du dosage ............................................................................................................ 34 1. Immunoprécipitation .............................................................................................................. 35 2. Immuno-turbidimetrie et immuno-néphélométrie ............................................................... 35 a. Immuno-turbidimetrie............................................................................................................ 35 b. immuno-néphélométrie : Cas particulier de la néphélémétrie (2) ...................................... 36 c. Méthode du dosage via l’Immuno-turbidimetrie et immuno-néphélométrie .................... 37 CONCLUSION GENERALE ............................................................................................................... 38 BIBLIOGRAPHIE ................................................................................................................................ 39 Travail Personnel de l’Etudiant Kagning Tsinda Emmanuel Introduction Générale Page 3/39 INTRODUCTION GENERALE La Biochimie clinique est l’application des aspects chimiques de la vie de l’homme sain ou malade et l’application des méthodes chimiques employées au laboratoire pour le diagnostic, le control d’un traitement, et la prévention des maladies. Pour ce faire, la connaissance des principes et procédures de diagnostic des différents composés marqueurs de pathologies est indispensable. Le cours sur la grande majorité de méthodes de dosages biochimiques nous a été dispensé par le Dr Jules Clément Assob Nguedia. Cependant, il nous est demande, dans le cadre d’un travail Personnel de l’étudiant, de présenter le principe et méthode de réalisation de l’électrophorèse, le principe de méthode de dosage du glucose, la technique et principe de dosage de la créatinine, de l’urée, de l’acide urique, et enfin, le principe et méthode immunométriques dans le dosage de la myoglobine. Travail Personnel de l’Etudiant Kagning Tsinda Emmanuel Principe et méthode de réalisation de l’électrophorèse Page 4/39 THEME 1 : LE PRINCIPE ET LA PROCEDURE DE REALISATION DE L’ELECROPHORESE I. INTERET DE L’ELECTROPHORESE De nos jours, l’électrophorèse est devenue une technique de routine dans les laboratoires où on l’utilise pour séparer notamment les protéines et les acides nucléiques. L’électrophorèse des protéines peut être réalisée sur des supports variés, notamment sur gel de polyacrylamide ou sur gel d’agarose selon les informations recherchées. L’électrophorèse de protéines sur gel d’agarose est la technique la plus aisée et la moins coûteuse à mettre en œuvre dans un établissement d’enseignement avec un matériel limité. Elle nécessite simplement une cuve à électrophorèse et une alimentation continue. (1) Durant notre présentation, tout en précisant que l’électrophorèse peut aussi s’employer pour séparer les acides nucléiques, nous tacherons de parler du principe général de l’électrophorèse ensuite, nous présenterons ses applications selon qu’on se trouve en hématologie et en immunologie. II. PRINCIPE GENERAL (1) L'électrophorèse est une technique biochimique de séparation fondée sur le fait que des molécules portant des charges électriques différentes migrent à des vitesses différentes lorsqu'elles sont placées dans un champ électrique. L’électrophorèse sur support ou électrophorèse de zones permet de stabiliser la phase liquide grâce à l’utilisation d’un support poreux imprégné d'un solvant tamponné. Principes de la migration électrophorétique : la migration dépend de plusieurs facteurs :  de la mobilité électrophorétique U, qui est fonction de la charge et de la géométrie de la particule. Une particule de charge électrique Q, placée dans un champ électrique E, est soumise à une force F qui l'entraîne vers l'électrode de signe opposé :  Des forces de frottement f, dues à la viscosité du milieu , s'opposent à la migration de la particule, et ce d'autant plus que la particule est grosse (r = rayon) et que la vitesse de migration (v) est grande : Travail Personnel de l’Etudiant Kagning Tsinda Emmanuel Principe et méthode de réalisation de l’électrophorèse Page 5/39 (N.B. Le coefficient de viscosité dépend de la température) Il arrive un moment où ces deux forces s'équilibrent, et la particule se déplace alors à vitesse constante; on peut alors écrire: On définit pour chaque particule sa mobilité µ, de manière indépendante du champ électrique, par la relation : La mobilité est une caractéristique de chaque particule; il est donc possible d'effectuer une séparation en se basant sur cette propriété. La charge Q est fonction du pH isoélectrique de la particule et du pH du solvant : on appelle pH isoélectrique d'une particule (pHi ou pI) le pH pour lequel cette particule ne migre pas dans un champ électrique (ceci est une définition expérimentale). Pour les molécules de petite taille, on peut prévoir la valeur du pHi en calculant le pH isoionique, pH pour lequel la charge nette est nulle, à partir des pKa des différents groupements ionisables de la molécule; mais cela n'est pas possible pour les macromolécules, car leur environnement ionique modifie notablement leur charge réelle. La différence pH - pHi détermine le signe de la charge Q d'une particule. (1) A chaque acide aminé correspond une valeur de pH isoélectrique, (pHi auquel les acides aminés sont électriquement neutres). En dehors de ce " point isoélectrique " les acides aminés sont globalement chargés et migrent sous l'effet d'un champ électrique. Ainsi, en travaillant à un pH fixé (dans une solution tampon), on peut séparer différents acides aminés par Travail Personnel de l’Etudiant Kagning Tsinda Emmanuel Principe et méthode de réalisation de l’électrophorèse Page 6/39 électrophorèse. Lorsque des acides aminés sont placés dans un champ électrique, ils migrent vers l'électrode de polarité opposée, les molécules neutres ne migrant pas. Ainsi : quand pH>pHi, l'acide aminé a une charge globale négative : il migre vers l'électrode positive(anode). Quand pH<pHi, l'acide aminé a une charge globale positive : il migre vers l'électrode négative(cathode). Quand pH=pHi, l'acide aminé est sous forme zwitterionique (neutre): il ne migre pas et reste au point de départ. (1) III. PROCEDURES DE REALISATION DE L’ELECTROPHORESE : méthode avec les Instruments MIDIGEL© II.1 Électrophorèse de protéines sur gel d’agarose supporté : protocole général - Protocole (échantillon = Sang, le sérum, ou bien tout acide nucléique.) Les gels prêts à l'emploi présentent l'avantage d'être coulés sur un support plastique ce qui, d'une part, évite de les préparer et facilite leur manipulation et, d'autre part, permettent de conserver indéfiniment les résultats après coloration et séchage. Comme pour les méthodes spécifiques d'électrophorèse, il faut disposer d'une cuve dans laquelle est placé le gel et d'une alimentation continue. On peut utiliser une mini-cuve identique à celle utilisée pour l'électrophorèse de l'ADN ou une cuve pour électrophorèse clinique, de meilleur prix. Dans le premier cas, la cuve étant conçue pour un gel immergé, on remplit les deux réservoirs avec le tampon d'électrophorèse et on établit le contact électrique entre gel et tampon par des ponts de papier filtre trempés dans le tampon. Il en est de même si l'on utilise une cuve pour électrophorèse clinique car ce type de cuve est conçu initialement pour des bandes d'acétate de cellulose suffisamment souples pour que les extrémités plongent dans les réservoirs de tampon alors que les gels supportés sont coulés sur un support uploads/Sante/ expose-de-biochimie-clinique-dosage-du-glucose-uree-mycoglobine-creatinine.pdf