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Uree indole1 ère STL Fiche technique n LE MILIEU UREE-INDOLE Intérêt Ce milieu permet de mettre en évidence les caractères suivants présence d ? une uréase présence d ? une tryptophanase présence d ? une tryptophane désaminase TDA Ce milieu est utilisé po

ère STL Fiche technique n LE MILIEU UREE-INDOLE Intérêt Ce milieu permet de mettre en évidence les caractères suivants présence d ? une uréase présence d ? une tryptophanase présence d ? une tryptophane désaminase TDA Ce milieu est utilisé pour l ? identi ?cation des entérobactéries bacille gram - oxydase - Composition Milieu synthétique Composant Quantité g L Rôle Urée L-tryptophane Chlorure de sodium Dihydrogénophosphate de potassium Hydrogénophosphate de potassium Rouge de phénol pH Lecture d ? un caractère biochimique substrat de l ? uréase Lecture d ? un caractère biochimique acide aminé permet la recherche de l ? indole et de la TDA Source de sels minéraux Maintien de la pression osmotique Indicateur de pH Principe recherche de l ? uréase L ? uréase dégrade l ? urée selon la réaction suivante Urée H O ?? NH CO - Les ions CO - vont entra? ner une forte alcalinisation du milieu qui sera révélée par un virage de l ? indicateur de pH le rouge de phénol à sa teinte basique rouge recherche de la production d ? indole mise en évidence de la tryptophanase La tryptophanase hydrolyse le tryptophane selon la réaction suivante Tryptophane H O ? indole acide pyruvique NH L ? indole forme un complexe coloré en rouge en présence d ? un réactif le réactif de Kovacs recherche de la tryptophane désaminase La TDA dégrade le tryptophane selon la réaction suivante Tryptophane H O ? acide indole pyruvique NH L ? acide indole pyruvique forme un précipité marron foncé en présence d ? un réactif le chlorure de fer en solution acide Ensemencement Ensemencer avec quelques gouttes de suspension bactérienne ou avec une colonie prélevée à l ? anse sur un milieu solide Incubation heures à C ère STL Lecture Recherche de l'uréase Ajout de réactif de Kovacs Fiche technique n Recherche de la tryptophanase production d ? indole Milieu Urée-Indole h d ? incubation Caractère recherché Uréase lecture après heures d ? incubation Ajout de chlorure de fer III Recherche de la TDA Observation Milieu rouge Interprétation Alcalinisation du milieu due à la dégradation de l ? urée Conclusion La bactérie possède l ? uréase Elle est dite uréase Milieu orangé inchangé Pas d ? alcalinisation du milieu La bactérie ne possède pas l ? uréase Elle est dite uréase - Après avoir e ?ectué la lecture séparer le milieu urée indole en deux prélever une partie du milieu et le transvaser dans un tube à hémolyse propre puis réaliser les tests suivants er tube recherche de la production d ? indole Ajouter gouttes du réactif de Kovacs et e ?ectuer la lecture sans agiter le milieu Indole Apparition d ? un anneau rouge Présence d ? indole Le tryptophane a donc été hydrolysé La bactérie a produit de l ? indole Elle est dite indole L ? anneau reste orangé Absence d ? indole La bactérie n ? a pas produit d ? indole Elle est dite indole - ème tube recherche