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Ft 10 denombrement csr Mme Abdellaziz épouse Zemmal Akila M A A FSB USTHB FICHE TECHNIQUE N Dénombrement de spores de microorganismes anaérobies sul ?to-réducteurs Clostridia CSR Les Clostridium sul ?to- réducteurs CSR sont des b? tonnets Gram positif ana

Mme Abdellaziz épouse Zemmal Akila M A A FSB USTHB FICHE TECHNIQUE N Dénombrement de spores de microorganismes anaérobies sul ?to-réducteurs Clostridia CSR Les Clostridium sul ?to- réducteurs CSR sont des b? tonnets Gram positif anaérobies stricts et sporulés susceptibles de produire plusieurs toxines provoquant des a ?ections digestives lors de leur processus de sporulation Ils sont considérés comme la ème cause mondiale des toxi-infections alimentaires TIA Largement présents dans l ? environnement ils constituent soit directement soit par le biais de l ? environnement des contaminants fréquents des aliments à base de viande Leurs spores sont persistantes dans le sol les sédiments et les zones sujettes à des pollutions fécales Milieu utilisé gélose Viande Foie VF Composition du milieu Pour l de milieu Peptone viande-foie g Glucose g Amidon soluble g Sul ?te de sodium agent di ?érentiel g Citrate de fer ammoniacal g Agar agar bactériologique g pH du milieu prêt-à-l ? emploi à C Principe La peptone viande-foie favorise la croissance de la plupart des microorganismes et plus spécialement celle des germes anaérobies Le glucose constitue la source énergétique du développement L ? amidon favorise la germination des spores Les germes anaérobies réduisent le sul ?te en sulfure qui en présence de fer provoque le noircissement des colonies par formation de sulfure de fer Technique Préparation des dilutions décimales voir ?che technique Préparation de l ? échantillon la solution mère du produit à analyser ainsi que ses dilutions sont chau ?és à C pendant mn Ce chau ?age a pour but de détruire toutes les formes végétatives ainsi que l ? activation des spores Ensemencement transférer ml de la solution mère et de ses dilutions dans un tube contenant ml de milieu VF en surfusion Bien homogénéiser par retournement en évitant au maximum l ? incorporation de bulles d ? air Refroidir immédiatement dans un bain d ? eau froide Pour chaque dilution une répétition de à tubes est e ?ectuée Incubation à C pendant ?? h Lecture procéder à la numération des colonies entourée d ? un halo noir Dénombrement faire la moyenne des colonies pour les tubes de la même dilution Appliquer la loi de Kass N m x v x D spores ml ougr N le nombre de spores de CSR m la moyenne des tubes V le volume ensemencé D la dilution correspondant aux tubes choisis CMme Abdellaziz épouse Zemmal Akila M A A FSB USTHB Préparation des dilutions décimales ml ml ml ml Solution mère ml Dilution - Dilution - Dilution - Dilution - Traitement des échantillons Chau ?age à C mn mn ensemencement incubation ml dans ml de gélose en surfusion C ?? h Lecture Comptage des colonies entourées d ? un halo noir Dénombrement Résultat Nombre de spores ml ou gr ? C