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Tp conjugaison Microbio tp-conjugaison-marqeursantibio jf parrin v page Transferts de matériel génétique entre bactéries la conjugaison Remarque préalable Les manipulations seront conduites sous PSM L'élimination conforme des déchets sera particulièrement

Microbio tp-conjugaison-marqeursantibio jf parrin v page Transferts de matériel génétique entre bactéries la conjugaison Remarque préalable Les manipulations seront conduites sous PSM L'élimination conforme des déchets sera particulièrement surveillée On prendra grand soin à la décontamination des surfaces et aux gestes de lavage des mains Questions Préliminaires Dé ?nir le terme conjugaison dans le contexte d ? échanges génétiques entre bactéries Qu ? est ce qui caractérise une souche donneuse Qu ? est ce qui caractérise une souche receveuse Qu ? est ce qu ? une souche Hfr Présentation des souches et de la manipulation Souche donatrice disponible souche E coli RL possédant un plasmide conjugatif avec un gène de résistance codant pour une pénicillinase de haut niveau TEM- Ainsi la souche est résistante à l ? ampicilline la ticarcilline la céfalotine et le couple amoxicilline acide clavulanique Cette souche est en outre tétracycline résistante Culture de heures en bouillon coeur- cervelle Souche réceptrice disponible souche E coli K F- portant deux marqueurs chromosomiques de résistance à deux antibiotiques la rifampicine et l ? acide nalidixique Culture de heures en bouillon coeur-cervelle Il s ? agit de montrer le transfert du plasmide de résistance pénicillinase TEM- par conjugaison Les deux souches sont fournies isolées sur agar trypticase-soja et en culture agitée C en bouillon coeur-cervelle Mode opératoire et compte-rendu des manipulations et des résultats Véri ?cation de la pureté des souches fournies Pour chaque souche véri ?er la pureté analyse de l'isolement fourni frottis et coloration de Gram sur chaque culture liquide réalisation d'un isolement à partir de la culture liquide fournie Réalisation de deux cultures en phase exponentielle Inoculer mL de milieu c ?ur-cervelle préchau ?é à C avec L de souche donatrice Inoculer mL de milieu c ?ur-cervelle préchau ?é à C avec L de souche réceptrice Incuber à C sous agitation pendant minutes environ de façon à obtenir une culture en phase exponentielle d'absorbance supérieure à Pour chaque souche évaluer la biomasse par mesure de densité optique liée au trouble à nm et utiliser immédiatement pour la conjugaison On utilisera la correspondance de densité optique à nm pour bactéries mL Limite de linéarité Consigner les manipulations réalisées et les résultats bruts obtenus dans le compte-rendu Donner la concentration des cultures donatrices et réceptrices ainsi obtenues Conjugaison en milieu liquide Dans un Erlen stérile de mL préchau ?é à C introduire stérilement mL de la culture de souche donatrice en phase exponentielle et mL de la culture de la souche réceptrice en phase exponentielle Homogénéiser doucement Incuber désormais à C sans agitation Déclencher un chronomètre Remarque chaque culture a été diluée au lors du mélange CMicrobio tp-conjugaison-marqeursantibio jf parrin v page Dénombrements des bactéries transconjuguées Le tableau ci-dessous présente les instructions pour dénombrer les transconjuguées par l'acquisition du caractère ampicilline résistant ? par l'acquisition du caractère tétracycline résistant ? mais aussi par l'acquisition des deux caractères ampicilline résistant et tétracycline résistant ? Chaque étudiant ne réalise qu'une des trois de manipulations proposées test d'acquisition de la résistance à