Remerciez-le!

Remerciez @Admin pour avoir partagé cet document gratuitement, de la manière la plus simple, en partageant sur les réseaux sociaux.

bioMérieux SA 14 328 13956B - xl - 2010/01 ATBTM STAPH EU (08) METHODOLOGIE / P

bioMérieux SA 14 328 13956B - xl - 2010/01 ATBTM STAPH EU (08) METHODOLOGIE / PROCEDURE / METHODIK / TECNICA / PROCEDIMENTO / ∆ΙΑ∆ΙΚΑΣΙΑ / METODYKA ↓ API® Suspension Medium Ë Ì 200 µl 200 µl ATB Medium ATB Na Medium 2 % (OXAE/OXA/OXAC) Ì Ë 32 x 135 µl ATB STAPH EU (08) ↓ 2 McF 18:00 - 24:00 O2 36°C ± 2°C ↓ ATB STAPH EU (08) ↓ SRSIRS bioMérieux SA Français - 1 14 328 13956B - fr - 2010/01 ATBTM STAPH EU (08) Antibiogramme pour les staphylocoques INTRODUCTION ET OBJET DU TEST La galerie ATB STAPH EU (08) permet de déterminer la sensibilité des staphylocoques aux antibiotiques en milieu semi-solide, dans des conditions très proches des techniques de référence de dilution en gélose ou de micro-dilution. La galerie ATB STAPH EU (08) a été conçue en suivant les recommandations du comité EUCAST 2008 (1) et CA- SFM 2008 (2) (kanamycine, lincomycine et pristinamycine). PRINCIPE La galerie ATB STAPH EU (08) comporte 16 paires de cupules. La première paire, sans antibiotique, sert de témoin de croissance. Les 15 suivantes contiennent des antibiotiques à une seule ou deux concentrations (c et C).La bactérie à tester est mise en suspension puis transférée dans le milieu de culture et inoculée dans la galerie. Après incubation, la lecture de la croissance se fait soit visuellement, soit avec l'automate ATB ou mini API ®. Le résultat obtenu permet de catégoriser la souche Sensible, Intermédiaire ou Résistante. PRESENTATION (Coffret pour 25 antibiogrammes) : - 25 galeries ATB STAPH EU (08) en emballage individuel avec déshydratant - 25 couvercles d’incubation - 25 ampoules d’ATB Na Medium 2 % - 1 notice COMPOSITION Galeries La composition de la galerie ATB STAPH EU (08) est mentionnée dans le tableau « Contrôle de Qualité » de cette notice. Milieux ATB Na Medium 2 % Mueller Hinton (origine animale) 1000 ml Glucose 2 g NaCl 20 g Ca++ qsp 50 mg Mg++ qsp 20 mg Agar 1,5 g pH : 7,2 - 7,4 REACTIFS ET MATERIEL NECESSAIRES MAIS NON FOURNIS Réactifs et instruments - API® Suspension Medium (Réf. 70 700 ou 70 640 ou 20 150) ou - API NaCl 0,85 % Medium (Réf. 20 070 ou 20 040 ou 20 230) - ATB Medium (Réf. 14 960) - McFarland Standard (Réf. 70 900) ou DENSIMAT (Réf. 99 234) ou Densitomètre ATB - Pipette Electronique ATB (consulter bioMérieux) - Automate ATB ou mini API avec logiciel (consulter bioMérieux) Matériel - Pipette - Protège-ampoule - Portoir pour ampoules - Equipement général de laboratoire de bactériologie PRECAUTIONS D'UTILISATION • Pour diagnostic in vitro uniquement. • Pour usage professionnel uniquement. • Ce coffret contient des composants d'origine animale. La maîtrise de l'origine et/ou de l'état sanitaire des animaux ne pouvant garantir de façon absolue que ces produits ne contiennent aucun agent pathogène transmissible, il est recommandé de les manipuler avec les précautions d'usage relatives aux produits potentiellement infectieux (ne pas ingérer; ne pas inhaler). • Les prélèvements, cultures bactériennes et produits ensemencés doivent être considérés comme potentiellement infectieux et doivent être manipulés de façon appropriée. Les techniques aseptiques et les précautions usuelles de manipulation pour le groupe bactérien étudié doivent être respectées tout au long de la manipulation ; se référer à "CLSI® M29-A, Protection of Laboratory Workers From Occupationally Acquired Infections; Approved Guideline - Révision en vigueur". Pour informations complémentaires sur les précautions de manipulation, se référer à "Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories - CDC/NIH - Dernière édition" ou à la réglementation en vigueur dans le pays d'utilisation. • Ne pas utiliser les réactifs après la date de péremption. • Avant utilisation, s'assurer de l'intégrité de l'emballage et des composants. • Ne pas utiliser de galeries ayant subi une altération phy- sique : cupule déformée, sachet déshydratant ouvert, … • Avant utilisation, laisser les milieux revenir à température ambiante. • Ouvrir les ampoules délicatement comme suit : - Placer l'ampoule dans le protège-ampoule. - Tenir l'ensemble verticalement dans une main (bouchon blanc vers le haut). - Bien enfoncer le bouchon. - Exercer une pression horizontale avec le pouce sur la partie striée du bouchon de façon à casser l'extrémité de l'ampoule. - Retirer l'ampoule du protège-ampoule et conserver le protège-ampoule pour une utilisation ultérieure. - Enlever délicatement le bouchon. • Les performances présentées sont obtenues avec la méthodologie indiquée dans cette notice. Toute dé- viation de méthodologie peut altérer les résultats. • L'interprétation et la validation des résultats de l’antibiogramme doivent être faites en tenant compte du contexte clinique, de l'origine du prélèvement, de l’identification de la souche, éventuellement des résultats de tests complémentaires et des recommandations locales en vigueur. L'interprétation et la validation sont facilitées par le système Expert ATB. CONDITIONS DE STOCKAGE Les galeries et milieux se conservent à 2-8°C à l'obscurité jusqu'à la date limite d'utilisation indiquée sur le coffret. IVD ATB TM STAPH EU (08) 13956B - fr - 2010/01 bioMérieux SA Français - 2 ECHANTILLONS (PRELEVEMENT ET PREPARATION) La galerie ATB STAPH EU (08) ne doit pas être utilisée directement à partir des prélèvements d'origine clinique ou autres. Les microorganismes à tester doivent dans un premier temps être isolés sur un milieu de culture adapté selon les techniques usuelles de bactériologie. MODE OPERATOIRE Préparation de la galerie • Sortir la galerie de son emballage. • Noter l’identifiant de la bactérie à tester sur la languette latérale de la galerie. Préparation de l'inoculum • Préparer une suspension bactérienne d'opacité équivalente à l'étalon 2 de McFarland. Comparer au témoin d'opacité du kit McFarland Standard ou utiliser le Densitomètre ATB ou le DENSIMAT (se reporter au manuel d’utilisation). Deux méthodes : - culture en bouillon jusqu'à obtention de l'opacité indiquée ; - mise en suspension de 1 ou plusieurs colonies fraîchement isolées (souches cultivées depuis moins de 48 heures) dans une ampoule d’API® Suspension Medium ou API NaCl 0,85 % Medium (ouvrir l'ampoule comme indiqué au paragraphe "Précautions d’utilisation" de la notice du produit). Cette suspension doit être utilisée extemporanément. NOTE : il est recommandé de contrôler la pureté de l'inoculum et de réisoler dans le cas de cultures mixtes. • Transférer 200 µl de cette suspension dans une ampoule d’ATB Medium et 200 µl dans une ampoule d'ATB Na Medium 2 % (pour les tests OXAE/OXA/OXAC), à l'aide d'une pipette. Inoculation de la galerie • Inoculation MANUELLE : - Homogénéiser ATB Medium avec la Pipette Electronique ATB en évitant la formation de bulles. Inoculer la galerie en distribuant 135 µl d'ATB Medium par cupule avec la Pipette Electronique ATB (environ 2x107 germes/ml ou 3x106 germes/cupule) dans chaque cupule exceptée OXAE/OXA/OXAC. - Homogénéiser ATB Na Medium 2 % avec la Pipette Electronique ATB en évitant la formation de bulles et répartir 135 µl (environ 2x107 germes/ml ou 3x106 germes/cupule) avec la Pipette Electronique ATB dans les cupules OXAE/OXA/OXAC. • Inoculation AUTOMATIQUE : L’inoculation automatique est impossible avec la galerie ATB STAPH EU (08). • Mettre un couvercle sur la galerie. • Incuber 18-24 heures à 36 ± 2°C en aérobiose. LECTURE ET INTERPRETATION • Rechercher dans chaque cupule la présence d'un trouble (+) par lecture visuelle ou automatique par l’automate ATB ou mini API ® (se reporter aux manuels d’utilisation). Pour les antibiotiques testés à deux concentrations : Aspect des cupules Résultats La souche est : c C c C clair trouble trouble clair clair trouble – + + – – + S I R SENSIBLE INTERMEDIAIRE RESISTANTE Pour les antibiotiques testés à une seule concentration : Aspect de la cupule Résultat La souche est : clair trouble – + S R SENSIBLE RESISTANTE • Lors de la lecture automatique de la galerie : - Vérifier la propreté de la partie centrale de la galerie, afin de permettre la reconnaissance du code de la galerie par le lecteur, - Vérifier la concordance entre l’intitulé imprimé sur la galerie et l’intitulé de la galerie proposé par le logiciel. NOTES : • L'absence de croissance dans une (ou deux) cupule(s)- témoin invalide l'antibiogramme qui doit être recommencé. • Un résultat c(–)C(+) est un non-sens (N) : répéter le test avec une nouvelle galerie. • En lecture visuelle, une croissance limitée à la périphérie de la cupule doit être lue négative. • Une galerie dont les cupules sont partiellement desséchées suite à l'incubation peut induire de faux résultats. L’antibiogramme doit être recommencé. • Triméthoprime – Sulfaméthoxazole (TSU) : Considérer comme négatif toute croissance inférieure au témoin de croissance. • Rifampicine (RFA) : Du fait de l’utilisation d’une concentration à 0,5 mg/L, les souches catégorisées Intermédiaire (de CMI 0,12 à 0,5 mg/L) avec la méthode de référence seront catégorisées en Sensible avec le test RFA de la galerie ATB STAPH EU (08). • Oxacilline (OXA) : L'interprétation des tests OXA, OXAE et OXAC doit être effectuée de la manière suivante : - S. aureus : Résultats bruts OXA OXAC Résultat rendu OXA S S R R S R S R S R S (*) R (*) Possibilité de résistance par mutation des PLP. Rechercher la présence de la PLP2a après induction uploads/s3/ atb-staph.pdf