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Mme Abdellaziz épouse Zemmal Akila : M.A.A. FSB/USTHB. 1 FICHE TECHNIQUE N°10 :

Mme Abdellaziz épouse Zemmal Akila : M.A.A. FSB/USTHB. 1 FICHE TECHNIQUE N°10 : Dénombrement de spores de microorganismes anaérobies sulfito-réducteurs Clostridia (CSR). Les Clostridium sulfito-réducteurs (CSR) sont des bâtonnets Gram positif, anaérobies stricts et sporulés, susceptibles de produire plusieurs toxines provoquant des affections digestives, lors de leur processus de sporulation. Ils sont considérés comme la 3ème cause mondiale des toxi-infections alimentaires (TIA). Largement présents dans l’environnement, ils constituent, soit directement, soit par le biais de l’environnement, des contaminants fréquents des aliments à base de viande. Leurs spores sont persistantes dans le sol, les sédiments et les zones sujettes à des pollutions fécales. Milieu utilisé : gélose Viande Foie (VF) : Composition du milieu : Pour 1l de milieu :  Peptone viande-foie ............................................................... 30,0 g  Glucose .................................................................................... 2,0 g  Amidon soluble ......................................................................... 2,0 g  Sulfite de sodium (agent différentiel) ................................... 2,5 g  Citrate de fer ammoniacal ........................................................ 0,5 g  Agar agar bactériologique ...................................................... 11,0 g pH du milieu prêt-à-l’emploi à 25 °C : 7,6 ± 0,2. Principe : La peptone viande-foie favorise la croissance de la plupart des microorganismes et plus spécialement celle des germes anaérobies. Le glucose constitue la source énergétique du développement. L’amidon favorise la germination des spores. Les germes anaérobies réduisent le sulfite en sulfure qui, en présence de fer, provoque le noircissement des colonies par formation de sulfure de fer Technique : 1) Préparation des dilutions décimales : voir fiche technique 1. 2) Préparation de l’échantillon : la solution mère du produit à analyser ainsi que ses dilutions sont chauffés à 80°C ± 2 pendant 10 mn. Ce chauffage a pour but de détruire toutes les formes végétatives ainsi que l’activation des spores. 3) Ensemencement :  transférer 5 ml de la solution mère et de ses dilutions dans un tube contenant 20 ml de milieu VF en surfusion.  Bien homogénéiser par retournement en évitant au maximum l’incorporation de bulles d’air.  Refroidir immédiatement dans un bain d’eau froide.  Pour chaque dilution une répétition de 2 à 5 tubes est effectuée. 4) Incubation à 37°C pendant 24 – 48h. 5) Lecture : procéder à la numération des colonies entourée d’un halo noir. 6) Dénombrement : faire la moyenne des colonies pour les tubes de la même dilution. Appliquer la loi de Kass : N = m x 1/v x 1/D (spores/ml (ougr)). N : le nombre de spores de CSR. m : la moyenne des tubes. V : le volume ensemencé. D : la dilution correspondant aux tubes choisis. Mme Abdellaziz épouse Zemmal Akila : M.A.A. FSB/USTHB. 2 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml Dilution 10-1 Dilution 10-2 Dilution 10-3 Dilution 10-4 Solution mère 9 ml 1. Préparation des dilutions décimales 3. ensemencement Chauffage à 80°C mn 10 mn 2. Traitement des échantillons 5 ml dans 20 ml de gélose en surfusion 5. Lecture 37 °C 24 – 48 h 4. incubation Comptage des colonies entourées d’un halo noir 6. Dénombrement Résultat : «Nombre de spores/ml ou gr» uploads/Geographie/ ft-10-denombrement-csr.pdf