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MODULE 1: Hygiène 1 Formation du Dimanche 23 novembre 2008 Objectifs et applica

MODULE 1: Hygiène 1 Formation du Dimanche 23 novembre 2008 Objectifs et applications ••• Pratiques et préparation ••• Contrôle qualité - Solide ••• Contrôle qualité - Solide Assurance qualité et performance des milieux de culture : exigences de la norme ISO 11.133-1 et -2 en matière de fabrication et de contrôle des milieux de culture et de la verrerie Jean-Yves François, Quality Partner s.a., Belgique MILIEU DE CULTURE: « mélange de substances, sous forme liquide, semi-liquide ou solide, qui contient des constituants naturels et/ou synthétiques permettant la croissance des microorganismes ou le maintien de leur viabilité » Préalable à toutes analyses microbiologique Contrôles afinde démontrer Objectifs Contrôles afinde démontrer Acceptabilité de chaque lot de milieu Milieu répond au besoin Milieu donne des résultats constants Applicable à : Milieux commerciaux prêt à l’emploi Milieux préparés à partir de formules déshydratées commerciales Milieux préparés à partir de ses composants individuels Documentation fournie par le fabricant Nom du milieu, de ses composants et suppléments, et leurs codes produits numéro de lot valeur du pH du milieu avant utilisation conditions de stockage et date d’expiration Pratiques conditions de stockage et date d’expiration évaluation des performances et organismes de contrôles utilisés fiche technique certificat de contrôle qualité fiche de sécurité, si nécessaire Vérification au laboratoire nom du milieu et numéro de lot date de réception date d’expiration conditions et intégrités de l’emballage MODULE 1: Hygiène 2 Conservation Toujours suivre les recommandations du fabricant ! Gestion FEFO nouvelle vérification de l’étanchéité date de la première ouverture (< 6 mois) évaluation visuelle (couleur prise en masse homogénéité) Pratiques évaluation visuelle (couleur, prise en masse, homogénéité) Milieux préparés 3 mois à 5 ± 2 °C 1 mois à 18 – 23 °C A l’abri de la lumière et de la dessication sauf spécifications contraires Conservation Toujours suivre les recommandations du fabricant ! Gestion FEFO nouvelle vérification de l’étanchéité date de la première ouverture (< 6 mois) évaluation visuelle (couleur prise en masse homogénéité) Pratiques évaluation visuelle (couleur, prise en masse, homogénéité) Milieux préparés 3 mois à 5 ± 2 °C 1 mois à 18 – 23 °C A l’abri de la lumière et de la dessication sauf spécifications contraires Traçabilité Pesées de chaque composant date de préparation conditions et date de stérilisation pH opérateur Préparation opérateur Eau Eau distillée Déchlorée avant distillation Matériau inerte Résistivité > 300 000 Ohm.cm Pauvre en microorganisme Pesée Précision 2 % Protection contre les inhalations Ajout progressif de l’eau MODULE 1: Hygiène 3 Dissolution Agitation énergique à intervalle régulier Avant chauffage (surtout gélose) Mesure et ajustement du pH Après stérilisation Préparation Après stérilisation Milieu à 25 °C Correction à l’aide de NaOH ou HCL 1N Sans modifier le volume final du milieu Répartition Précision 2 %, si nécessaire Récipient = 1,2 à 3 fois le volume du milieu Stérilisation Chaleur humide 121 °C, 15 min barême adapté en fonction de la charge ! Surchauffe ! Préparation ! Surchauffe ! Vérification (sonde externe ou papier réactif) Filtration 0,22 µm sous vide ou sous pression Filtre stérilisé Physique pH mesuré à 25 °C quantité répartie et/ou épaisseur du milieu couleur clarté, présence de défaut optique stabilité du gel consistance humidité Contrôle qualité stabilité du gel, consistance, humidité Microbiologique Stérilité Fertilité à partir de souches de test de différents types Souches robustes montrant des caractères positifs typiques Souches positives poussant faiblement (plus sensible) Souches non réactives Souches inhibées MODULE 1: Hygiène 4 Fertilité - Croissance 3 méthodes Quantitative Semi-quantitative Qualitative Points à évaluer Contrôle qualité - Fertilité Photo Points à évaluer Productivité Sélectivité Spécificité Microorganismes pour essais Souce de référence : issue d’une collection nationale ou internationale OU souche isolée au laboratoire définie au moins par son genre et son espèce ainsi que par ses caractéristiques Stock de référence : aliquots obtenus par sous-culture de la souche de référence Culture de travail : sous-culture primaire d’un aliquot du stock de référence Modèle enregist Culture de travail Culture pure En bouillon non sélectif En phase stationnaire Inoculum pour essais de productivité Contrôle qualité - Fertilité Inoculum pour essais de productivité Quantitatifs : 102 cfu Semi-quantitatifs et qualitatifs : 103 à 104 cfu Milieu liquide : 10 à 102 cfu Inoculum pour essais en sélectivité 104 à 106 cfu Méthode quantitative - méthode Etaler l’inoculum à la surface du milieu à tester et du milieu de référence (TSA ou TSG) Incuber les boîtes (selon leur usage) Compter les boîtes Calculer P et S Contrôle qualité – Fertilité (solide) Calculer PR et SF PR = NS / N0 avec NS = nombre de colonies obtenu sur le milieu de culture à tester N0 = nombre de colonies obtenu sur le milieu de culture de référence SF = D0-DS avec D0 = dilution la plus élevée présentant une croissance d’au moins 10 colonies sur le milieu de référence DS = dilution la plus élevée présentant une croissance comparable sur le milieu testé MODULE 1: Hygiène 5 Méthode quantitative - interprétation Souche désirée PR > 0,1 Souche non désirée SF ≥ 2 Contrôle qualité – Fertilité (solide) Méthode semi-quantitative (écométrie) - méthode Ensemencement en strie à l’anse de 1 µl (milieu à tester et milieu de référence) Calcul de l’indice G = nombre de stries présentes Contrôle qualité – Fertilité (solide) Calcul de l’indice GI = nombre de stries présentes Méthode semi-quantitative (écométrie) - interprétation Souche désirée GI ≥ 6 Souche non désirée GI ≤ 1 Contrôle qualité – Fertilité (solide) MODULE 1: Hygiène 6 Méthode qualitative - méthode Ensemencement en ligne à l’anse de 1 µl (milieu à tester et milieu de référence) Incubation Evaluation de la croissance 0 = pas de croissance Contrôle qualité – Fertilité (solide) 0 = pas de croissance 1 = faible croissance 2 = bonne croissance Méthode qualitative - interprétation Souche désirée 2 Souche non désirée 0 ou 1 Contrôle qualité – Fertilité (solide) Méthode quantitative - méthode Ensemencement d’un tube de milieu à tester et d’un tube de milieu de référence (TSB, Thio) par microorganisme testé µorganisme désiré : 10-102 cfu µorganisme non désiré : > 104 cfu Incubation Contrôle qualité – Fertilité (liquide) Incubation Dénombrement sur gélose non sélective Calculer PR et SF PR = NS / N0 avec NS = nombre de colonies obtenu sur le milieu de culture à tester N0 = nombre de colonies obtenu sur le milieu de culture de référence SF = D0-DS avec D0 = dilution la plus élevée présentant une croissance d’au moins 10 colonies sur le milieu de référence DS = dilution la plus élevée présentant une croissance comparable sur le milieu testé MODULE 1: Hygiène 7 Méthode quantitative - Interprétation Souche désirée PR ≥ 0,1 Dénombrement ≥ 106 cfu/ml Souche non désirée SF ≥ 2 Dénombrement ≤104 cfu/ml Contrôle qualité – Fertilité (liquide) Dénombrement ≤ 104 cfu/ml Méthode semi-quantitative - Méthode Ensemencement d’un tube de milieu à tester avec un mélange des souches (tube 1) µorganisme désiré : 10-102 cfu µorganisme non désiré : > 104 cfu Ensemencement d’un tube de milieu à tester avec une souche Contrôle qualité – Fertilité (liquide) Ensemencement d’un tube de milieu à tester avec une souche (tube 2) µorganisme non désiré : > 104 cfu Incubation Etalement de 10 µl du tube 1 sur milieu spécifique Etalement de 10 µl du tube 2 sur milieu non spécifique Incubation des boîtes Lecture Méthode semi-quantitative - Interprétation Souche désirée > 10 cfu isolée Souche non désirée < 10 cfu isolée Contrôle qualité – Fertilité (liquide) MODULE 1: Hygiène 8 Méthode qualitative - méthode Ne convient pas au milieu trouble Ensemencer un tube à l’aide d’une anse de 1 µl Incubation Lecture du trouble apparu dans le milieu 0 = turbidité nulle Contrôle qualité – Fertilité (liquide) 0 = turbidité nulle 1 = turbidité très faible (< 0,5 McFarland) 2 = turbidité marquée (> 0,5 McFarland) Méthode qualitative - interprétation uploads/Geographie/ iso-11133-1-mode-de-compatibilite 1 .pdf