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Article original Évaluation de l’inﬂuence des conditions de culture sur les per

Article original Évaluation de l’inﬂuence des conditions de culture sur les performances du milieu gélosé sélectif MRSA-ID pour l’identiﬁcation de Staphylococcus aureus résistant à la méticilline dans les prélèvements de dépistage Evaluation of the impact of different lengths of pre-enrichment in a nutritive broth and prolonged incubation of MRSA-ID, a chromogenic agar medium, on its performances for identifying methicillin-resistant Staphylococcus aureus in screening samples S. Grandin, C. Deschamps, F. Magdoud, N. Zihoune, C. Branger, M. Eveillard * Service de microbiologie-hygiène, hôpital Louis-Mourier (AP–HP), 178, rue des Renouillers, 92700 Colombes, France Reçu le 28 janvier 2008 ; accepté le 14 mars 2008 Disponible sur Internet le 5 mai 2008 Résumé Le dépistage des patients porteurs de Staphylococcus aureus résistant à la méticilline (SARM) est recommandé pour prévenir la dissémination de ces bactéries en milieu hospitalier. L’identiﬁcation rapide et spéciﬁque des SARM au laboratoire est un élément essentiel pour la mise en place des mesures de prévention. Notre objectif était d’évaluer l’effet de différentes durées d’incubation en milieu liquide et d’une incubation prolongée du milieu gélosé sélectif MRSA-ID sur les performances de ce milieu dans l’identiﬁcation des SARM dans les prélèvements de dépistage. D’après nos résultats, les enrichissements de courte durée en milieu liquide n’ont permis qu’une faible augmentation de la sensibilité par rapport à l’absence d’enrichissement. En revanche, un enrichissement en milieu liquide de 18 à 24 heures s’est accompagné d’une augmentation non négligeable de la sensibilité. L’allongement de la durée d’incubation du milieu gélosé sélectif et chromogène (48 heures au lieu de 24 heures) n’a pas permis d’augmenter la sensibilité, mais a induit une diminution forte et signiﬁcative de la spéciﬁcité. Ainsi, il semble pertinent de ne pas retenir l’incubation prolongée du milieu gélosé et de choisir entre l’absence d’enrichissement (résultats plus rapides) et l’enrichissement pendant une nuit (gain en sensibilité) en fonction de l’épidémiologie locale et de la stratégie employée localement dans le cadre de la maîtrise de la dissémination des SARM. # 2008 Elsevier Masson SAS. Tous droits réservés. Abstract MRSA-carrier screening is recommended to prevent MRSA dissemination in hospitals. Rapid and speciﬁc detection of MRSA in the laboratory is a key element in enabling control measures. Our objective was to evaluate the impact of different lengths of pre-incubation in a nutritive broth and prolonged incubation of MRSA-ID, a chromogenic agar medium, on its performances for identifying MRSA in screening samples. According to our results, short-length pre-enrichments only provided a weak increase of sensitivity as compared to the absence of pre-enrichment. On the contrary, the sensitivity increase provided by an overnight pre-enrichment was signiﬁcant. The prolongation of incubation in the chromogenic agar medium (48 hours instead of 24 hours) did not provide any signiﬁcant increase of sensitivity but was associated with a strong and signiﬁcant loss of speciﬁcity. Therefore, it seems relevant to reject prolonged incubation of selective agar media and to make a choice between the absence of pre- Pathologie Biologie 57 (2009) e37–e42 * Auteur correspondant. Laboratoire de bactériologie-hygiène, CHU d’Angers, 4, rue Larrey, 49000 Angers, France. Adresse e-mail : MaEveillard@chu-angers.fr (M. Eveillard). 0369-8114/$ – see front matter # 2008 Elsevier Masson SAS. Tous droits réservés. doi:10.1016/j.patbio.2008.03.008 enrichment (faster results) and an overnight pre-enrichment (higher sensitivity), according to local epidemiology and local practices implemented for prevention. # 2008 Elsevier Masson SAS. Tous droits réservés. Mots clés : SARM ; Dépistage ; Milieu gélosé sélectif ; Enrichissement ; Performance Keywords: MRSA; Screening; Selective agar medium; Pre-enrichment; Performance 1. Introduction Pour la plupart des experts, les infections à Staphylococcus aureus résistant à la méticilline (SARM) représentent un problème majeur de santé publique [1]. Des études de modélisation récentes ont montré que l’association d’une politique de dépistage des patients porteurs de SARM à l’admission et de la mise en place rapide des mesures de prévention et d’un traitement adaptés pouvaient contribuer fortement à limiter la dissémination hospitalière de ces bactéries multirésistantes [2,3]. Il apparaît donc que l’utilisa- tion des techniques sensibles, spéciﬁques et pouvant donner un résultat rapide occupent une place majeure dans une stratégie de maîtrise. De plus en plus de milieux chromogènes sont disponibles depuis ces dernières années. De nombreuses études ont permis de montrer que ces milieux présentaient une bonne sensibilité et une bonne spéciﬁcité [4–8]. Cependant, certaines questions comme la nécessité d’un enrichissement préalable en milieu liquide [9] ou l’intérêt d’un allongement de la durée d’incubation du milieu gélosé [10] restent en suspens. L’un des inconvénients de l’enrichissement préalable est un allongement de 24 heures de la durée nécessaire pour l’obtention des résultats. Il pourrait être ainsi intéressant de déterminer si des enrichissements de courtes durées pourraient donner des sensibilités comparables à celles qui peuvent être obtenues avec une durée d’enrichissement classique, tout en permettant l’ensemencement du milieu gélosé le jour même. Notre objectif était d’évaluer l’inﬂuence de différentes durées d’enrichissement en milieu liquide et de l’incubation prolongée du milieu gélosé sélectif et chromogène MRSA-ID (bioMérieux, La Balme et Craponne, France) sur les performances de ce milieu. 2. Méthodes 2.1. Patients L’étude a été réalisée sur une période de deux mois dans un centre hospitalier universitaire de 600 lits. Une stratégie active de dépistage des patients porteurs de SARM et de mise en place de mesures complémentaires pour ces patients existe dans cet établissement depuis 1997. Ces mesures ont contribué à une diminution signiﬁcative de la transmission croisée des SARM de 2002 à 2004 [11]. Au cours de l’étude, les patients hospitalisés en réanimation étaient prélevés pour dépistage au moment de leur admission et une fois par semaine jusqu’à leur sortie du service. Les patients présentant des risques de colonisation à SARM (antécédents de portage, hospitalisation récente, institutionnalisation en maison de retraite ou en établissement de long séjour, présence de lésions cutanées chroniques, plaies ou escarres) étaient dépistés au moment de leur admission dans les services de médecine et de chirurgie. Une cartographie du portage de SARM (répartition des patients porteurs dans l’espace) est réalisée dans notre département de long séjour, aﬁn de maîtriser la diffusion du SARM au sein de ce département et lorsque les résidents porteurs sont transférés en court séjour. Aﬁn de mettre à jour cette cartographie, des prélèvements de dépistage ont été réalisés chez les 28 résidents connus pour être colonisés antérieurement. 2.2. Méthodologie microbiologique Des prélèvements de dépistage nasal et/ou rectal ont été réalisés par écouvillonnage de chaque patient inclus dans l’étude. Chaque écouvillon a été remis en suspension par agitation vigoureuse (vortex) dans 2 ml de bouillon cœur cervelle stérile (BHI) et 100 ml de la suspension obtenue ont été ensemencés immédiatement sur milieu MRSA-ID. Le reste de la suspension a été incubé à 37 8C et des aliquotes de 100 ml ont été ensemencés sur MRSA-ID après une heure, deux heures et 18 à 24 heures d’enrichissement dans ces conditions. Pour chacune des quatre méthodes précédentes, une lecture a été réalisée sur les géloses MRSA-ID après 24 et 48 heures d’incubation. Ainsi, huit conditions de culture différentes ont été évaluées. Aﬁn d’identiﬁer les SARM, un test d’agglutination (Slidex, Staph Plus, bioMérieux) a été réalisé pour les colonies caractéristiques isolées sur MRSA- ID (colonies vertes). La résistance à la méticilline a été conﬁrmée systématiquement par la méthode de diffusion en gélose d’après les recommandations du comité de l’anti- biogramme de la Société française de microbiologie (http:// www.sfm.asso.fr) et par la détection de la PLP2a carac- téristique des SARM par agglutination en cas de résultat douteux pour la diffusion. 2.3. Déﬁnitions Un résultat positif vrai correspondait à la présence des colonies caractéristiques identiﬁées déﬁnitivement comme du SARM. Un résultat faussement négatif pour une méthode était une culture sans colonie caractéristique, avec un prélèvement retrouvé positif à SARM avec l’une au moins des sept autres conditions de culture testées pour le même prélèvement. Un résultat faussement positif correspondait à la présence des colonies caractéristiques n’ayant pas été conﬁrmées comme du SARM. Pour une méthode, la sensibilité était le rapport du S. Grandin et al. / Pathologie Biologie 57 (2009) e37–e42 e38 nombre de vrais positifs sur le nombre total de prélèvements retrouvés positifs au moins une fois avec l’ensemble des méthodes. La spéciﬁcité était le rapport du nombre de vrais négatifs sur la somme des nombres de faux positifs et de vrais négatifs. 2.4. Analyse statistique Les comparaisons concernant les sensibilités et spéciﬁcités ont été réalisées à l’aide du test du khi-carré. 3. Résultats Au cours de l’étude, 176 patients ont été inclus, ce qui a représenté un total de 314 prélèvements (173 écouvillonnages de nez et 141 écouvillonnages rectaux). Parmi ces patients, 34 (19,3 %) ont été identiﬁés comme porteurs de SARM. Huit patients ont été retrouvés positifs seulement sur le prélèvement nasal, six seulement sur le prélèvement rectal et 20 sur les prélèvements des deux sites anatomiques. Des colonies caractéristiques ont été identiﬁées sur 465 géloses MRSA-ID. L’identiﬁcation SARM a été conﬁrmée pour 354 colonies, 30 ont été identiﬁées comme du S. aureus sensible à la méticilline (SASM) et 81 n’étaient pas du S. aureus. La plupart des colonies de SASM ont été identiﬁées par écouvillonnage nasal après 48 uploads/Geographie/54-francais.pdf