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ANALYSE BACTERIOLOGIQUE DES DENREES ALIMENTAIRES La prise d’essai: A - cas de p

ANALYSE BACTERIOLOGIQUE DES DENREES ALIMENTAIRES La prise d’essai: A - cas de produit solide(exemple: fromage,viande….). B -cas de produit liquide(exemple: lait pasteurisé,jus…..). AZIZI - IPA - 2004 A- Cas de produit solide. 25 gr Peser dans un sachet stérile 3× 25 gr du produit à analyser aseptiquement. BALANCE La 1ère pesée servira au contrôle bactériologique. La seconde servira à la recherche des Salmonella. La troisième servira à la recherche de Listéria. AZIZI - IPA - 2004 a- La prise d’essai pour une analyse bactériologique classique: Verser le TSE dans le sachet stérile contenant 25 gr de produit à analyser. Broyer l’aliment 6 à 8 minutes. Verser le contenu dans le flacon de TSE. BROYEUR TSE 10ˉ¹ 225 ml (suspension mère) DE TYPE STOMACHER AZIZI - IPA - 2004 b- La prise d’essai pour la recherche des Salmonella et des Listéria. Verser l’Eau Peptonée Tamponnée(Salmonella) et le bouillon Fraser(Listéria) dans le sachet stérile contenant 25 gr de produit à analyser. Broyer l’aliment 6 à 8 minutes. Verser le contenu dans les flacons respectives. BROYEUR DE TYPE STOMACHER Eau Peptonée tamponnée Bouillon Fraser 225 ml ml 225 AZIZI - IPA - 2004 B – Cas de produit liquide: a- La prise d’essai pour une analyse bactériologique classique: Faire un mélange de 3 à 5 unités du produit à analyser. Lait pasteurisé Lait Lait Lait pasteurisé pasteurisé Lait pasteurisé pasteurisé Suspension mère +1 AZIZI - IPA - 2004 b- La prise d’essai pour les recherches des Salmonella et des Listéria. 5 ml 25 ml Prélever 2×25 ml de la Suspension mère. +1 Eau peptonnée tamponnée 25 ml FRASER Salmonella Listéria AZIZI - IPA - 2004 PREPARATION DES DILUTIONS DECIMALES a - cas de produit solide. b - cas de produit liquide. AZIZI - IPA - 2004 a - Cas de produit solide: Introduire 1 ml de la suspension 10ˉ¹ dans 9 ml de TSE. Mélanger,puis prélever 1 ml de la dilution 10ˉ² et l’introduire ensuite dans 9 ml de TSE. 1 ml 1 ml 1 ml 10ˉ² 10ˉ³ 10ˉ¹ 9 ml de TSE Suspension mère AZIZI - IPA - 2004 b - Cas de produit liquide: Introduire 1 ml de la suspension +1 dans 9 ml de TSE. Mélanger,puis prélever 1 ml de la dilution 10ˉ¹ et l’introduire ensuite dans 9 ml de TSE,mélanger, puis prélever 1 ml de la dilution 10ˉ² et l’introduire ensuite dans 9 ml de TSE pour obtenir la dilution 10³. 1 ml 1 ml 1 ml 10ˉ² 10ˉ³ 9 ml de TSE 10ˉ¹ 1 ml Solution mère +1 9 ml de TSE suspension mère AZIZI - IPA - 2004 RECHERCHE ET DENOMREMENT DES MICROORGANISMES PAR COMPTAGE DES COLONIES OBTENUES A 30 °C, DANS LES DENREES ALIMENTAIRES Milieu utilisé: Gélose PCA AZIZI - IPA - 2004 Inoculer les boites de pétri avec 1 ml des différentes dilutions. 1 ml ml ml 1 1 10ˉ¹ 10ˉ² 10ˉ³ 1 ml 1 ml 1 ml AZIZI - IPA - 2004 Couler la gélose PCA ≈ 15 ml refroidie ≈ 45°C. Mélanger et laisser solidifier. PCA PCA 10ˉ¹ 10ˉ² 10ˉ³ AZIZI - IPA - 2004 Couler une deuxième couche de gélose blanche ≈ 5 ml. Laisser solidifier. GELOSE BLANCHE GELOSE BLANCHE 10ˉ¹ 10ˉ² 10ˉ³ AZIZI - IPA - 2004 Incuber les boites couvercle en bas 72 ±3h à 30°C. Incuber 72h à 30°C AZIZI - IPA - 2004 RECHERCHE ET DENOMBREMENT DES COLIFORMES,COLIFORMES THERMOTOLERANTS ET ESCERICHIA COLI DANS LES DENREES ALIMENTAIRES A- En milieu liquide. (VBL + Cloche) a- Test de présomption. AZIZI - IPA - 2004 Introduire 1ml des différentes dilutions dans chaque tube. Chasser le gaz présent dans les cloches avant l’incubation. 10ˉ¹ 10ˉ¹ 10ˉ¹ 10ˉ² 10ˉ² 10ˉ² 10ˉ³ 10ˉ³ 10ˉ³ 1 ml 1 ml 1 ml Incuber 24 - 48h à 37°C VBL VBL VBL VBL VBL VBL VBL VBL VBL AZIZI - IPA - 2004 RECHERCHE ET DENOMBREMENT DES COLIFORMES,COLIFORMES THERMOTOLERANTS DANS LES DENREES ALIMENTAIRES B – En milieu solide : Gélose Désoxycholate 1 ‰ ou gélose VRBL. AZIZI - IPA - 2004 ml 1 1 ml 1 ml 10ˉ¹ 1 ml 1 ml Inoculer les 2 séries de boites avec 1 ml des différentes dilutions. 1 ml 10ˉ¹ 10ˉ² 10ˉ² 10ˉ³ 10ˉ³ AZIZI - IPA - 2004 Couler une couche de gélose de VRBL ou Desoxycholatee 1‰ ≈ 15 ml, refroidie à la température ≈ 45±1 °C. Mélanger et laisser solidifier. DESOXY- Cholate 1‰ Cholate DESOXY- 1‰ AZIZI - IPA - 2004 Incuber une série de boites 24-48 h à 37°C pour la recherche des coliformes totaux. Incuber l’autre série à 44 °C pour la recherche des coliformes thermo tolérants et Escherichia coli. 24-48h à 37°C 24-48h à 37°C 24-48h à 37°C 24-48h à 44°C 24-48h à 44°C 24-48h à 44°C AZIZI - IPA - 2004 RECHERCHE DES SALMONELLA DANS LES DENREES ALIMENTAIRES AZIZI - IPA - 2004 A - Cas de produit solide: Verser l’Eau Peptonée Tamponnée dans le sachet stérile contenant 25 gr de produit. Broyer l’aliment. Verser le contenu dans le flacon d’E.P.Tamponnée. BROYEUR DE TYPE STOMACHER Eau peptonnée tamponnée flacon de 225 ml AZIZI - IPA - 2004 B - Cas de produit liquide. 1 ml 25 ml Introduire dans 225 ml d’Eau Peptonée Tamponnée Prélever 25 ml de la Suspension mère (+1) Eau peptonnée tamponnée +1 AZIZI - IPA - 2004 Étape de pré enrichissement: Incuber la solution ensemencée d’Eau Peptonée Tamponnée 16-20h à 37°C. INCUBER 16- 20h à 37°C peptonnée tamponnée Eau AZIZI - IPA - 2004 RECHERCHE ET DENOMBREMENT DE STAPHYLOCOCCUS AUREUS DANS LES DENREES ALIMENTAIRES Milieu utilisé: Bouillon Giolitti cantoni AZIZI - IPA - 2004 Inoculer les tubes avec 1 ml des différentes dilutions: AZIZI - IPA - 2004 10¹ 10² 10³ Couler ≈ 15 ml du bouillon Giolitti Cantoni additionné d’1ampoule et ½ de Tellurite de K: AZIZI - IPA - 2004 10¹ 10² 10³ Incuber 48 h à 37°C RECHERCHE ET DENOMBREMENT DE STAPHYLOCOCCUS AUREUS DANS LES DENREES ALIMENTAIRES Milieu utilisé: Gélose Baird Parker AZIZI - IPA - 2004 Préparation du milieu Baird Parker: Ajouter au milieu de base Baird Parker 15 ml de la solution jaune d’œuf au tellurite de potassium. JAUNE D’OEUF au TELLERUTE de POTASSIUM MILIEU de Gélose BAIRD PARKER 15 ml Couler la gélose dans des boites de pétri et conserver à +4°C. AZIZI - IPA - 2004 Inoculer les boites avec 0,1 ml des différentes dilutions. 1 ml 1 1 ml ml 10ˉ¹ 10ˉ² 10ˉ³ 0,1 ml 0,1 ml 0,1 ml AZIZI - IPA - 2004 Étaler les gouttes à l’aide d’une pipette râteau. 10ˉ¹ 10ˉ² 10ˉ³ AZIZI - IPA - 2004 Incuber les boites de Baird Parker couvercle en haut 48h ±2 à 37°C. Incuber 48h ±2 à 37°C 1ére lecture 24h ±2 AZIZI - IPA - 2004 RECHERCHE ET DENOMBREMENT DES ANAEROBIES SULFITO- REDUCTEURS A 37°C DANS LES DENREES ALIMENTAIRES Milieu utilisé: Gélose Viande Foie AZIZI - IPA - 2004 Chauffer à 80°C pendant 10’;puis refroidir rapidement à l’eau de robinet : 100°C AZIZI - IPA - 2004 10¹ 10² Inoculer les tubes avec 1 ml des différentes dilutions: AZIZI - IPA - 2004 10¹ 10¹ 10² 10² Couler ≈ 15 ml de la gélose VF additionnée d’1ampoule de Sulfite de Na et 1 ampoule d’Alun de Fe: AZIZI - IPA - 2004 10¹ 10¹ 10² 10² Incuber 48 h à 37°C AZIZI - IPA - 2004 10¹ 10¹ 10² 10² Incuber 48 h à 37°C Mélanger doucement par retournement. Laisser solidifier. RECHERCHE ET DENOMBREMENT DES LEVURES ET MOISISSURES DANS LES DENREES ALIMENTAIRES Milieu utilisé: Sabouraud au Chloramphénicol AZIZI - IPA - 2004 1 ml 1 1 ml ml 10ˉ¹ 10ˉ² 10ˉ³ 0,2 ml 0,2 ml 0,2 ml ml 1 0,2 ml TEMOIN DILUANT TEMOIN MILIEU Ensemencer les boites comme l’indique le schéma. Ne pas ensemencer la boite témoin AZIZI - IPA - 2004 Étaler les gouttes à l’aide d’une pipette râteau. 10ˉ¹ 10ˉ² 10ˉ³ Témoin diluant AZIZI - IPA - 2004 Incuber les boites de Sabouraud au Chloramphénicol couvercle en haut 5 jours à 25°C. Incuber 5 jours à 25°C Lecture tous les jours. AZIZI - IPA - 2004 DEUXIEME JOUR DES TRAVAUX PRATIQUES RECHERCHE ET DENOMREMENT DES MICROORGANISMES PAR COMPTAGE DES COLONIES OBTENUES A 30 °C, DANS LES LAITS ET PRODUITS LAITIERS. 1ère Lecture après 24h d’incubation AZIZI - IPA - 2004 Dénombrer les colonies de formes lenticulaires qui poussent en masse et noter les dilutions correspondantes. Tenir compte des boites ayant un nombre compris entre 15 et 300. Germes totaux Germes totaux AZIZI - IPA - 2004 RECHERCHE ET DENOMBREMENT DES COLIFORMES,COLIFORMES THERMOTOLERANTS ET ESCERICHIA COLI DANS LES DENREES ALIMENTAIRES A- En milieu liquide. (VBL + Cloche) a- Test de présomption. AZIZI - IPA - 2004 Lecture des coliformes totaux à 37°C: Aspect d’ un tube de milieu VBL + cloche positif. Gaz + Acidification du milieu AZIZI - IPA - 2004 Noter le nombre de tubes positifs à 37°C et se référer à la table de NPP. 10ˉ¹ 10ˉ¹ 10ˉ¹ 10ˉ² 10ˉ² 10ˉ² 10ˉ³ 10ˉ³ 10ˉ³ VBL VBL VBL VBL VBL VBL VBL VBL VBL + + uploads/Industriel/ aliments-analyses-bacterio.pdf