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CONTRÔLE DE LA QUALITÉ DES MILIEUX ET DES RÉACTIFS F. OHMANI INSTITUT NATIONAL

CONTRÔLE DE LA QUALITÉ DES MILIEUX ET DES RÉACTIFS F. OHMANI INSTITUT NATIONAL D’ HYGIENE I - PRINCIPE : Le contrôle des milieux de culture et réactifs reçus ou préparés au laboratoire Travailler dans des règles de conformité strictes Des résultats meilleurs, Plus fiables Reproductibles II - METERIEL Pour réaliser ce contrôle, on aura besoin de matériel suivant : Un réfrigérateur Un autoclave Une étuve Un congélateur à - 20°C ou - 80°C Des boites de pétri stériles Des tubes à essai à vis stériles Un pH mètre Un bain marie de 45°C à 100°C Milieux déshydratés à tester Réactifs prêts à l’emploi à tester Souches de référence. III - CONTRÔLE DE LA QUALITÉ DU MATÉRIEL On ne peut effectuer des tests de bonne qualité si le matériel utilisé est de mauvaise qualité ou mal entretenu contrôler et entretenir le matériel du laboratoire IV- CONTROLE DE LA QUALITÉ DES MILIEUX DE CULTURE ET DES RÉACTIFS 1- A la réception : Livraison de nouveaux lots Le fournisseur est tenu de remettre Responsable de gestion, Une attestation de CQ du produit livré par le fabriquant Cette attestation tiendra lieu de contrôle initial. V- CONTROLE DE LA QUALITÉ DES MILIEUX DE CULTURE ET DES RÉACTIFS : 2- Au moment de l’emploi : Ouverture d’un nouveau lot de réactifs ou de produits Réaliser un ensemble de tests de contrôle Noter les résultats sur la fiche d’évaluation Classer la fiche 1- Milieux déshydratés : Deux types de caractères doivent être contrôlés 1. Caractéristiques physico-chimiques 2. Caractères bactériologiques ou épreuves d’efficacité a. Caractéristiques physico-chimiques L’aspect de la poudre : lisse ou granulée La dissolution de la poudre dans l’eau au bain-marie : rapide ou lente Le pH ≈ pH indiquée par le fabriquant Aspect du milieu préparé : solide, liquide semi-liquide Couleur du milieu préparé. b. Caractères bactériologiques ou épreuves d’efficacité: Juger la fiabilité Tester avec des souches de référence à défaut avec des souches de laboratoire de réactivité connue Tableau N°1 Noter les résultats sur la fiche d’évaluation des milieux Milieux Durée d’incubation Micro-organismes de contrôle Résultats attendus Gélose au sang 24h avec ou sans CO2 S.pyogenes ATCC 19615 S.pneumoniae ATCC 6035 Staphylocoque aureus ATCC 25923 E.coli ATCC 25922 Croissance + β hémolyse Croissance + α hémolyse Croissance Croissance Tableau N°1:l’efficacité des milieux couramment employés Milieux Durée d’incubation Micro-organismes de contrôle Résultats attendus GC+ isovitalex 24h, CO2 (jarre à bougie) Haemophilus.influenz ae ATCC 10211 Croissance Muller Hinton 24h E.coli ATCC 25922 S.aureus ATCC 25923 P.aeruginosa ATCC 27853 Dimensions et zones acceptables selon le C.Q de l’antibiogramme. Bouillon Trypticase- soja 24h S.pyogenes ATCC 19615 E.coli ATCC 25922 Croissance Croissance Milieu à l’urée 24h E. coli P. mirabilis Négatif Positif (rose) Milieux Durée d’incubation Micro-organismes de contrôle Résultats attendus Gélose CLED ou PBC 24h E.coli P.mirabilis E.faecalis Colonies de 1 à 2 mm de Φ lactose (+) Colonies de 2 à 3 mm de Φ lactose (-) Colonies < 1 mm de Φ Gélose SS 24h E.coli S.typhimurium Y.enterolitica S.flexneri Colonies rouges Colonies incolores à centre noir Colonies incolores Colonies incolores Milieu TCBS 24h Vibrio spp Colonies jaunes Milieu Chapman 24h S.aureus S.epidermidis E.coli Colonies jaunes Colonies roses Pas de croissance Bile-Esculine azide 24h E.faecalis S.pyogenes Croissance et noircissement Pas de croissance Milieux Durée d’incubation Micro-organismes de contrôle Résultats attendus Milieu simmons- citrate 24h E.coli K.pneumoniae Pas de croissance Croissance, virage au bleu Recherche de phénylalanine - désaminase 24h E.coli P.mirabilis Négatif Positif Milieu MRVP 24h E.coli K.pneumoniae Positif / négatif Négatif / positif Milieu Malonate 24h E.coli K.pneumoniae négatif positif Recherche des décarboxylases : - lysine : 24 à 48h S.typhimurium S.flexneri Positif Négatif - Ornithine : 24 à 48h S.typhimurium K.pneumoniae Positif Négatif - Arginine : 24 à 48h S.typhimurium P.mirabilis Positif Négatif 2 - Réactifs prêts à l’emploi Conditionnement Les réactifs sont présentés sous forme : Disques (étuits) Bandelettes Lyophilisé Poudre Liquide L’efficacité des réactifs couramment employés Tableau N° 2: Réactifs Espèces pouvant être testées Milieux utilisés Réaction positive Réaction négative ONPG E.coli ATCC 25922 S.typhi murium TSA Disques d’Optochine S.pneumoniae ATCC6305 S.mitis GS Oxydase P.aeruginosa ATCC27853 E.coli ATCC 25922 TSA Facteur V H.parainfluenzae H.influenzae ATCC 10211 TSA Facteur V + X H.influenzae ATCC10211 H.parainfluenzae TSA Kit Gram Staphylocoque [Gram(+)] E.coli [Gram(-)] PBC Galerie Neisseria NH Neisseria Gonnorhae S.aureus ATCC 25923 GC + polyvitex Tableau N° 2: L’efficacité des réactifs couramment employés Réactifs Espèces pouvant être testées Milieux utilisés Réaction positive Réaction négative Pastorex méningitidis N.meningitidis B ATCC 13090 H.influenzae b ATCC 10211 S.pneumoniae ATCC 6306 Strepto B ATCC 12386 Pas d’agglutination avec tous les autres groupes. GC + polyvitex Disque de β lactamase H.influenzae β- lactamase (+) H.influenzae ATCC 10211 GC + polyvitex Réactifs Espèces pouvant être testées Milieux utilisés Réaction positive Réaction négative Glucose N.gonnorhae ATCC 430069 Branamella cataralis ATCC 25240 Lactose N.lactamica ATCC 23971 N.gonnorhae ATCC 430069 GC + polyvitex Maltose N.meningitidis ATCC 13090 N.gonnorhae ATCC 430069 Saccharose N.sicca ATCC 9913 N.gonnorhae ATCC 430069 GS Test de lyse par les sels biliaires S.pneumoniae ATCC 49619 S.pyogenes FICHE D’EVALUATION DE MILIEU DESHYDRATE Milieu : Marque: Lot : Date d’expiration : Conditionnement : Analyses Résultats obtenus Résultats Théoriques - Caractères physico-chimiques Aspect de la poudre Dissolution Aspect du milieu prêt pH Conditionnement - Activité bactériologique Souches utilisées * Résultat Final : Conforme  Non Conforme  Contrôle effectué par : Le : Identification de la galerie API : Lot N° : Date d’expiration : Analyses Résultats obtenus Résultats Théoriques Aspect des substrats : Tests bactériologiques: Souches utilisées * * Résultat final : Conforme  Non Conforme  Contrôle effectué par : Le : FICHE D’EVALUATION DE GALERIE API RESULTAT DU CONTRÔLE La personne responsable de l’évaluation doit poser une étiquette pour chaque milieu et réactif contenant : la date d’ouverture la date du test d’évaluation  La date limite de validité (DLV) La date limite d’utilisation (DLU) la lettre « C » pour les milieux conformes. Les lettres « NC »pour les milieux non conformes. V –ARCHIVAGE Résultats Fiches d’évaluation Classeur approprié 1- Des milieux déshydratés et des colorants A la température ambiante Bien fermer les couvercles Eviter l’humidité atmosphérique Mettre dans un endroit sombre, frais et bien aéré. VI –CONSERVATION: VI –CONSERVATION: 2- Des réactifs la température recommandée par le fabriquant : + 4°C ou - 20°C Eviter les congélations et décongélations successives. Aliquoter le réactif ou le sérum en portions suffisantes pour chaque test VII - ELIMINATION Les milieux, réactifs ou colorants doivent être jetés lorsque : DLU dépassée DLV dépassée Apparition des signes de détérioration (trouble, précipité, changement de couleur ou d’aspect). uploads/Industriel/ cq-milieu-et-reactifs.pdf