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BIOTECHNOLOGIES APPLIQUEES A L’ENVIRONNEMENT HYGIENE DES LOCAUX ET DU PERSONNEL

BIOTECHNOLOGIES APPLIQUEES A L’ENVIRONNEMENT HYGIENE DES LOCAUX ET DU PERSONNEL AT 1 : Recherche de micro-organismes au laboratoire de microbiologie OBJECTIFS : - Mise en évidence de la présence de micro-organismes dans l’environnement du laboratoire. - Rédaction de la fiche BLP - Introduction de la notion d’UFC et de colonie. COMPETENCES : A 7 ,11, 12, 13 I Recherche de microorganismes dans l’air - prélèvement par sédimentation sur GN : au niveau paillasse ; étuve, fenêtre ouverte II Recherche de micro organismes des surfaces : - prélèvement par écouvillonnage: sur robinetterie, paillasse, poubelles, tiroirs, poignets de portes. - Technique d’adhérence : boîtes contact. III Recherche de micro organismes sur le personnel et les objets personnels - sur GN : dépôt de cheveux, empreinte de doigt, bijoux, parler devant une boîte. JOUR 2 : Lecture des milieux, dénombrement des UFC. Conclure sur la propreté microbiologique. Rédaction d’une partie de la fiche de BLP. TD : la sécurité au laboratoire → réflexion sur le risque chimique, physique et microbiologique (notion de classe de risque microbiologique) Fin de la rédaction fiche BLP. AT 2 : Maîtrise de l’hygiène OBJECTIFS : - Mise en évidence expérimentale de l’action d’antiseptique et de désinfectant . - Vérifier l’efficacité de la méthode de lavage des mains par le savon et du nettoyage de la paillasse par un détergent javellisant. - Initiation à la manipulation aseptique. - Réaliser un dénombrement en masse. COMPETENCES: A 5 8 9 11 12 14 15 17 21 22 B 1-6 C 11 14 15 17 I. Mise en évidence expérimentale de l’action d’antiseptiques et de désinfectants - Dans un tube de bouillon nutritif, introduite 2 mL d’un antiseptique (alcool 90°) et /ou désinfectant (celui utilisé au laboratoire, eau de javel….) et 0,2 mL d’une culture d’E coli et / ou S. aureus - Réaliser en parallèle, un témoin positif en absence d’antiseptique / désinfectant Après incubation, observer le(s) trouble(s) et conclure sur le pouvoir antiseptique désinfectant du ou des produits testés. II. Contrôle microbiologique de l’efficacité du lavage des mains (voir protocole opéron n°56) Pour des raisons de sécurité microbiologique, la souche utilisée est Saccharomyces cerevisiae. - Réalisation du témoin vérifiant l’absence de contamination initiale des mains par des levures « sauvages » - Contamination artificielle des mains par une suspension de levures (briochin dilué) → dénombrement en masse d’une gélose Sabouraud + chloramphénicol + possibilité d’observation microscopique de levures colorées au bleu de méthylène - Réalisation rigoureuse du protocole de lavage des mains→ dénombrement en masse d’une gélose Sabouraud + chloramphénicol Après dénombrement des UFC avant et après lavage des mains, conclure sur l’efficacité microbiologique du lavage des mains III. Contrôle microbiologique de l’efficacité du nettoyage de la paillasse Pour des raisons de sécurité microbiologique, la souche utilisée est Saccharomyces cerevisiae. -Réalisation du témoin vérifiant l’absence de contamination initiale de la paillasse par le détergent javellisant (prélèvement par écouvillonnage) - Contamination artificielle de la paillasse à l’aide d’un papier absorbant propre contaminée par une suspension de S cerevisiae → prélèvement par écouvillonnage + dénombrement en masse - Réalisation rigoureuse du protocole de nettoyage désinfection → prélèvement par écouvillonnage + dénombrement en masse. AT3 : Préparation d’un milieu de culture GN et isolement d’un germe de l’environnement PRE REQUIS : Notions des besoins nutritionnels des cellules OBJECTIFS : Réaliser toutes les étapes de préparation d’une gélose nutritive Repérer un germe de l’environnement à l’aide d’une étude macroscopique (suite de AT n°1) Réaliser l’étude macroscopique d’une colonie. Réaliser et interpréter une coloration de Gram Réaliser la technique d’isolement. COMPETENCES: A 5 7 9 16 19 20 21 C 1 4- 9 D 3 4 E 2 3 6 7 JOUR 1 : A partir de l’analyse d’un document : « procédure de préparation et de stérilisation d’un milieu de culture », repérer les risques (physiques principalement). En binôme préparer environ 80 mL de GN (à conditionner dans 2 flacons de 50 mL) Stériliser par autoclavage. Repérer un germe de l’environnement sur les boites de l’AT1 (Micrococcus, S. aureus ou S. epidermidis), à partir d’une étude macroscopique. Repiquer la souche en eau physiologique stérile (1 ou 2mL) et réaliser la coloration de GRAM. JOUR 2 : Couler 2 GN par élève Après séchage, réaliser un isolement sur GN du germe présenté en eau physiologique. AT 4 : Identification d’un germe de l’environnement OBJECTIFS : Réaliser une étude macroscopique de la colonie isolée + vérifier pureté Initiation à la démarche d’identification (orientation vers un genre) Réaliser et interpréter une coloration de Gram Réaliser un état frais Réaliser tests enzymatiques Etudier le comportement d’une souche avec l’O2 COMPETENCES : A 5 7 9 11-15 18-22 C 2 3 5-8 D 1-6 8 JOUR 1 : - GRAM, Etat frais, Catalase, orientation J1 - Ensemencement VF, GN (isolement), MEVAG + glucose - Ensemencement sur Chapman. JOUR 2: - GN : vérification pureté + étude macro - Lecture VF en parallèle avec schéma du métabolisme énergétique + confirmation genre. - Eventuellement pastorex Staph BIOTECHNOLOGIES APPLIQUEES A L’ENVIRONNEMENT POTABILITE DE l’EAU DANS UNE STATION DE TRAITEMENT DE L’EAU AT 5 : Dosage des nitrites dans une station de traitement de l’eau PRE-REQUIS : Expression des résultats expérimentaux (fait en MI) OBJECTIFS : - Contrôle de l’efficacité de lit de sable dans le traitement de l’eau ; - Contrôle de la qualité de l’eau – dosage des nitrites, recherche de coliformes (+ étude du métabolisme) COMPETENCES : A 5 7 9 13 18-22 E 2 3 6 7 F 9 ETAPES DE LA SEQUENCE: - Présentation d’une station de traitement de l’eau : potabilité de l’eau. o Schéma du process de traitement de l’eau dans la station. Rôle des différentes étapes de traitement de l’eau. o Quels sont les paramètres contrôlés pour le traitement de l’eau ? - Objectif de l’étude : o Contrôle de l’efficacité du lit de sable o Dosage de la qualité de l’eau – 2 paramètres suivis : nitrites  Coliformes - Choix des lieux de prélèvements dans la station : avant le traitement, après le traitement - Mise en œuvre des analyses : TD : Rôle de dénitratation et dénitrification des microorganismes présents dans le lit de sable -Nitrobacter et Nitrosomas. PROTOCOLE : Dosage des nitrites par diazotation Norme de potabilité : concentration massique inférieure à 0,1 mg.L-1 . Prélèvements de 10 mL Point A : à l’entrée de la station de traitement : 2 prélèvements (CNO2 = 0,2 mg.L-1 ) Point B : à la sortie du lit de sable 1 : 2 prélèvements (CNO2 = 0,17 mg.L-1 ) Point C : à la sortie du lit de sable 2 : 2 prélèvements . (CNO2 = 0,08 mg.L-1 ) AT 6 : Dénombrement et identification des Entérobactéries coliformes dans une station de traitement de l’eau OBJECTIFS : - Evaluer la qualité bactériologique d’une eau par le dénombrement et l’identification d’Entérobactéries coliformes - Réaliser la technique de dénombrement par filtration sur membrane - Identifier une Entérobactérie par macrogalerie, en étudiant son métabolisme glucidique puis protidique. COMPETENCES : A 5 7 9 11-15 18-22 B 1-4 C 1 3 5-8 11 15 17 18 D 1-8 Les coliformes sont des entérobactéries vivants principalement dans l’intestin de l’homme et des animaux à sang chaud mais elles sont aussi présentes dans l’environnement (les sols, les débris végétaux….). Les bactéries coliformes qui peuplent l’intestin peuvent être mise en évidence par leur tolérance à une température de 44 – 45°C. On parle de coliformes thermotolérants. La présence de coliformes thermotolérants dans l’eau (ou dans un aliment) est une preuve indiscutable d’une contamination par des matières fécales, ce qui signifie que l’eau peut être contaminée par des bactéries pathogènes. L’identification d’Escherichia coli (coliforme thermotolérant), survivant difficilement en dehors de l’intestin, traduira une contamination fécale récente. Dans les eaux brutes et dans les eaux usées, le nombre de coliformes est un indicateur de la présence probable de bactéries pathogènes. Les analyses suivantes seront réalisées avant et après traitement de l’eau JOUR 1 : I. Dénombrement des Entérobactéries coliformes totaux et thermotolérants - filtrer sur membrane 100 mL d’eau et mettre en culture sur gélose TTC et tergitol 7. Incuber à 30°C. - filtrer sur membrane 100 mL d’eau et mettre en culture sur gélose TTC et tergitol 7. Incuber à 44°C. II. Identification d’une Entérobactérie coliforme isolée d’une eau traitée, présentée sur GNi). - réaliser les examens microscopiques et respiratoires nécessaires à l’orientation. - Ensemencer la galerie : GN, VF, Hugh et Leifson + glucose, Mannitol Mobilité Nitrate, Hajna Kligler, Clark et Lubs, urée Tryptophane, LDC, ODC, ADH et un témoin sans AA JOUR 2 : I. Dénombrement des Entérobactéries coliformes totaux et thermotolérants - Procéder au dénombrement des colonies suspectes. Conclure. II. Identification d’une Entérobactérie coliforme isolée d’une eau traitée. Lecture des différents milieux d’étude du métabolisme glucidique et protidique. Identification du coliforme fécal. Conclusion. Identification qui introduit de nombreuses nouvelles techniques pourra se faire plutôt en deux semaines. uploads/Management/ biotechno-franqueville.pdf