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27 LES TECHNOLOGIES DE LABORATOIRE - 2013, Volume 8, N°31 Composition chimique

27 LES TECHNOLOGIES DE LABORATOIRE - 2013, Volume 8, N°31 Composition chimique et activité antibactérienne des huiles essentielles de deux plantes aromatiques du centre nord marocain : Thymus vulagris et Thymus satureioïdis Thymus essential oils (Thymus vulagris and Thymus satureioïdis) from center of Morocco: chemical composition and antimicrobial activity EL OUALI LALAMI Abdelhakim1*, EL-AKHAL Fouad1,4, OUEDRHIRI Wissal2, OUAZZANI CHAHDI Fouad3, GUEMMOUH Rajae4, GRECHE Hassane2 1- Laboratoire Régional de Diagnostic Epidémiologique et d’Hygiène du Milieu, Direction Régionale de la Santé, Hôpital EL Ghassani, Fès, Maroc. 2- Département de Valorisation et Application Industrielle, Institut National des Plantes Médicinales et Aromatiques, Université Sidi Mohamed Ben Abdellah, Fès, Maroc. 3- Laboratoire de Chimie Organique Appliquée, Faculté des Sciences et techniques Sais, Fès, Maroc. 4- Laboratoire d’Analyse et de Modélisation des Ecosystèmes Continentaux, Faculté des Sciences Dhar EL Mahraz, Université Sidi Mohamed Ben Abdellah, Fès, Maroc. (*) Auteur correspondant E-mail : eloualilalami@yahoo.fr Résumé Les bactéries sont le plus souvent mises en cause dans les cas d'intoxications alimentaires et l’usage extensif des agents antibactériens chimiques dans la médication conduit à la sélection de souches bactériennes résistantes. Les huiles essentielles des plantes médicinales et aromatiques peuvent être utilisées comme alternative pour le traitement des maladies infectieuses et pour la protection des aliments contre toute altération. Cette étude a été réalisée dans le but d’examiner in Vitro l’activité antibactérienne de l’huile essentielle du Thymus vulgaris et du Thymus satureioïdis cultivées au centre nord du Maroc, ces huiles essentielles sont obtenues par Hydrodistillation par Clevenger et sont testées sur des bactéries pathogènes: Salmonella sp, Escherichia coli et Staphylococcus aureus, responsables des toxi- infections alimentaires dans la région de Fès. La composition chimique des huiles essentielles a été réalisée par chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse. L’huile essentielle de Thymus vulgaris est riche en γ- terpinène (22,25 %) et en thymol (41,39%). Les composés chimiques les plus abondants dans l’huile essentielle du Thymus satureioïdis sont p-cymène (27,59%) et le thymol (14,09%). Les deux huiles essentielles ont montré une activité bactéricide importante sur Salmonella sp, Staphylococcus aureus et Escherichia coli. Mots clés : Huile essentielle, composition chimique, activité anti bactérienne, intoxication alimentaire, thymus, Maroc Abstract The bacteria are often put in issue in the case of food poisoning and the extensive use of antibacterial chemicals in the medication led to the selection of resistant bacterial strains. Essential oils of medicinal and aromatic plants can be used as an alternative for the treatment of infectious diseases and for the protection of food against any tampering. This study was conducted to examine in Vitro antibacterial activity of the essential oil of Thymus vulgaris and Thymus satureioidis grown in the North- Central of the Morocco, these essential oils are obtained by steam distillation by Clevenger and are tested for pathogenic bacteria: Salmonella sp., Escherichia coli and Staphylococcus aureus, responsible for food-borne diseases in the region of Fes. The chemical composition of the essential oils made by gas chromatography-mass spectrometry. The essential oil of Thymus vulgaris is rich in γ- terpinene (22,25%) and thymol (41,39%). The most abundant chemical compounds in the essential oil of Thymus satureioidis are p-cymene (27,59%) and thymol (14,09%). Two essential oils showed important bactericidal activity on Salmonella sp, Staphylococcus aureus and Escherichia coli. Key words: Essential oil, chemical composition, anti bacterial, poisoning, thymus, Morocco. Article original 28 LES TECHNOLOGIES DE LABORATOIRE - 2013, Volume 8, N°31 INTRODUCTION Dans le monde, 2,1 millions d’adultes et 3 millions d’enfants meurent à cause de la consommation d’eau et/ou l'ingestion d’aliments contaminés [1-2]. La contamination est généralement causée par un microorganisme nocif ou par un contaminant chimique engendrant ainsi des intoxications alimentaires de conséquences graves. Les bactéries sont, à côté des virus et des parasites, les microorganismes les plus souvent mises en cause dans le cas d'intoxications alimentaires et leurs traitements par des agents antibactériens chimiques conduit régulièrement à la sélection de souches bactériennes résistantes [3-4]. Ainsi, les chercheurs et scientifiques tentent d’ores et déjà de trouver des alternatives efficaces et accessibles à partir de produits naturels qui connaissent de nos jours un regain d’intérêt et jouissent d’une popularité grandissante. Les huiles essentielles font partie de cette gamme, de produits naturels extraits de plantes médicinales et aromatiques, qui sont connues pour être douées de propriétés antiseptiques et antimicrobienne [5]. En effet, beaucoup d’entre elles ont des propriétés anti- toxiques, anti virales, anti oxydantes et anti parasitaires. Plus récemment on leur connait des propriétés anti cancéreuses [6]. Le thym est l’une des plantes les plus utilisées comme épices et extraits à fort pouvoir antibactérien et anti inflammatoire dans la pharmacopée traditionnelle. En effet, le thym "Zaatar" est très utilisé en médecine traditionnelle sous plusieurs formes : les feuilles sont utilisées en infusion contre la toux, en décoction pour guérir les maux de tête, hypertension et gastrites, en usage externe comme cicatrisants et antiseptiques. Les feuilles de thym sont riches en huile essentielle dont les propriétés mises à profit en phytothérapie. Elle est très antiseptique et utilisée à ce titre pour soigner les infections pulmonaires. Son action antiseptique s’exerce également sur le système digestif et notamment en cas de diarrhée et il est aussi vermifuge [7-8]. Thymus vulgaris, à titre d’exemple, est largement utilisé comme antitussif, antispasmodique, antibroncholitique, propriétés anthelminthiques, carminatives et diurétiques. Les espèces Iraniens et Turques du thymus ont été, respectivement, déclarées pour leur activité antibactérienne [9]. Ce travail a pour objectif la détermination de la composition chimique et l’évaluation de l’activité antibactérienne de deux huiles essentielles, extraites de deux plantes médicinales et aromatiques originaires du centre du Maroc : Thymus vulgaris et Thymus satureioïdis, sur des germes responsables de toxi-infections alimentaires. MATÉRIELS ET MÉTHODES 1. Matériel biologique Les échantillons de plantes de Thymus vulgaris et du Thymus satureioïdis ont été fournis par le service des eaux et des forets de la ville d’Ifrane située en Moyen Atlas au centre du Maroc. Les échantillons ont été identifiés et un spécimen de chaque espèce a été déposé à l’herbier de l’Institut National des Plantes Médicinales et Aromatiques de la ville de Taounate. 2. Extraction des huiles essentielles Les huiles essentielles ont été obtenues par entraînement à la vapeur d’eau à l’aide d’un distillateur de type Clevenger pendant 2h30 mn. Chaque huile, après extraction a été divisée en deux parties. • La première a servi à l’analyse chimique alors que ; • La deuxième a été utilisée pour étudier les tests antibactériens in vitro. Les huiles, après leur extraction, sont récupérées et conservées dans de petits flacons opaques et stockée à 4°C avant leur utilisation. 3. Etude chimique et identification des composés Les huiles essentielles ont été analysées par Chromatographie sur phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse. 29 LES TECHNOLOGIES DE LABORATOIRE - 2013, Volume 8, N°31 Les analyses chromatographiques en phase gazeuse ont été réalisées à l’aide d’un appareil Trace GC ULTRA, équipé d’un injecteur en mode Split, d’une colonne VB-5 (Longueur : 30 m, Diamètre interne : 0.25 mm, Epaisseur du film : 0.25 µm). Les conditions opératoires sont les suivantes: gaz vecteur: hélium, solvant : Acétate d’éthyle température d’injection 220 C°, volume d’injection 1 µl, débit 1,4 ml/min, programmation de température: de 40 à 180°C à 4°C/mn, avec un palier de 20 mn à 300°C. Le couplage avec le spectromètre de masse Polaris Q MS ce fait avec une température d’interface de 300 C°. Les conditions opératoires sont les suivantes: Type d’ionisation EI (70 eV), Température de la source d’ionisation 200°C, détecteur Trappe à ionique. La base de données utilisée : NIST MS Search. L’identification des composés dans chaque huile essentielle est basée:  Sur la comparaison de leur indice de rétention (IR) sur les colonnes apolaires et polaires, déterminés par rapport aux indices de rétention d’une gamme étalon d’alcanes; avec ceux des composés de référence ;  Sur la comparaison de leur spectre de masse avec les spectres de la base de données. 4. Souches bactériennes Le choix des souches bactériennes a été basé sur une recherche bibliographique de leur fréquence élevée à contaminer les denrées alimentaires et de leur pathogénicité. En effet, plusieurs études menées dans le cadre de la surveillance sanitaire des denrées alimentaires, ont montré que les bactéries : Salmonella sp, Staphylococcus aureus, Escherichia coli sont parmi les principaux agents pathogènes responsables d’intoxications alimentaires [10-12]. Ainsi, trois souches pathogènes ont été choisies et testées : Escherichia coli, Salmonella sp et Staphylococcus aureus. Ces dernières ont été isolées de denrées alimentaires incriminées dans des toxi infections alimentaires, purifiées, identifiées et entretenues par repiquage sur milieu nutritif gélosé au laboratoire. Les trois bactéries appartiennent à la collection de la bactériothèque du Laboratoire Régional de Diagnostic Epidémiologique et d’Hygiène du Milieu de la Direction Régionale de la Santé Fès Boulemane. Ce laboratoire du ministère de la santé est situé à l’hôpital El-Ghassani de la ville de Fès et opère entre autres sur le contrôle et la surveillance sanitaire des maladies à transports hydriques et/ou alimentaires. Il est le premier laboratoire régional du Ministère de la Santé du Maroc accrédité NM ISO 17025. 5. Activité antibactérienne La uploads/Science et Technologie/ composition-chimique-et-activite-antibacterienne-des-huiles-essentielles-de-deux.pdf