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Département fédéral de l’intérieur DFI Office fédéral de la santé publique OFSP

Département fédéral de l’intérieur DFI Office fédéral de la santé publique OFSP Manuel suisse des denrées alimentaires 122.1 Dosage des nitrates et des nitrites du lait Méthode d’analyse 122.1 Dosage des nitrates et des nitrites du lait Octobre 1999 Manuel suisse des denrées alimentaires © Office fédéral de la santé publique 2/10 Table des matières I Résumé ...............................................................................................................................3 II Description de la méthode.................................................................................................4 1 Principe ................................................................................................................................4 2 Réactifs ................................................................................................................................4 3 Equipement ..........................................................................................................................5 3.1 Préparation de la colonne.....................................................................................................6 3.2 Vérification du pouvoir réducteur de la colonne ....................................................................6 3.3 Régénération de la colonne..................................................................................................7 4 Mode opératoire ...................................................................................................................7 4.1 Prise d’essai .........................................................................................................................7 4.2 Réduction (seulement pour le dosage des nitrates)..............................................................7 4.3 Dosage .................................................................................................................................8 4.4 Essai à blanc ........................................................................................................................8 4.5 Courbe d’étalonnage ............................................................................................................8 5 Calcul et présentation des résultats......................................................................................8 5.1 Ordre de précision ................................................................................................................9 5.2 Ordre de précision ................................................................................................................9 6 Note......................................................................................................................................9 7 Bibliographie.........................................................................................................................9 III Chronique des modifications ..........................................................................................10 Méthode d’analyse 122.1 Dosage des nitrates et des nitrites du lait Octobre 1999 Manuel suisse des denrées alimentaires © Office fédéral de la santé publique 3/10 I Résumé Titre Dosage des nitrates et des nitrites du lait Principe de mesurage – Numéro de la méthode 122.1 No. Avant 2006 1/8.2 Analyte Nitrate, nitrite Matrice Lait Abrégé Après précipitation de la matière grasse et des protéines, le lait est filtré. Une partie du filtrat est intro-duit dans une colonne de réduc- tion à cadmium. Les nitrates sont ainsi réduits à l’état de nitrites. Les concentrations de nitrites du filtrat non réduit et du filtrat réduit sont mises en évidence par adjonc-tion d’un réactif colorant. Les mesures s’effectuent par photométrie à une longueur d’onde de 538 nm. Les concentrations de nitrites sont déterminées à l’aide d’une courbe d’étalonnage. La concentration de nitrates est ensuite calculée à partir de la différence entre les deux teneurs en nitrites. Domaine de mesure – Limite de détection – Limite de détermination Nitrite: 0.5 mg/kg; Nitrate: 5 mg/kg Données de validation Oui Commentaires sur la validation – Statut de la méthode Recommandé Dernière modification en 2008 Méthode de base – Remarques FIL Internationale 95A: 1984 Dried milk - Determination of nitrate & nitrite contents Méthode d’analyse 122.1 Dosage des nitrates et des nitrites du lait Octobre 1999 Manuel suisse des denrées alimentaires © Office fédéral de la santé publique 4/10 II Description de la méthode Attention: le «réducteur à cadmium» utilisé pour cette méthode doit être éliminé conformément aux prescriptions relatives à la protection de l’environnement. 1 Principe Après précipitation de la matière grasse et des protéines, le lait est filtré. Une partie du filtrat est intro- duit dans une colonne de réduction à cadmium. Les nitrates sont ainsi réduits à l’état de nitrites. Les concentrations de nitrites du filtrat non réduit et du filtrat réduit sont mises en évidence par adjonc- tion d’un réactif colorant. Les mesures s’effectuent par photométrie à une longueur d’onde de 538 nm. Les concentrations de nitrites sont déterminées à l’aide d’une courbe d’étalonnage. La concentration de nitrates est ensuite calculée à partir de la différence entre les deux teneurs en nitrites. 2 Réactifs − Granulés de cadmium, granulométrie = 0.3 à 0.8 mm. On peut également préparer soi-même ces granulés. Voir à cet effet la Norme FIL Internationale n° 95A (1984). − Solution de sulfate de cuivre (II): dissoudre 20 g de cuivre (II) pentahydraté (CuSO4 • 5 H2O) dans de l’eau et compléter à 1000 ml. − Solution tampon de pH = 9.6 à 9.7: − diluer 50 ml d’acide chlorhydrique conc. [1 l = 1.19 kg; w (HCl) env. 0.37] dans 600 ml d’eau. Après mélange, ajouter 135 ml de solution d’ammoniac conc. [1 l = 0.91 kg; w (NH3) env. 0.25]. Compléter à 1000 ml avec de l’eau et mélanger. Note : A défaut d’une solution d’ammoniac à cette concentration, on peut utiliser une quantité équiva lente de solution plus concentrée, par ex. 100 ml d’une solution d’ammoniac à env. 35 % w = 0.35 (1 l = 0.88 kg). Ajuster le pH entre 9.6 et 9.7 si nécessaire. − Acide chlorhydrique, c (HCl) env. 2 mol/l: diluer 160 ml d’acide chlorhydrique conc. (1 l = 1.19 kg) avec de l’eau et compléter à 1000 ml. − Acide chlorhydrique, env. 0.1 mol/l: diluer 50 ml d’acide chlorhydrique c = 2 mol/l avec de l’eau et compléter à 1000 ml. − Solution d’hexacyanoferrate (II) de potassium: dissoudre 17.2 g K4[Fe(CN)6] • H2O dans de l’eau et compléter à 100 ml. − Solution de sulfate de zinc: dissoudre 53.5 g (ZnSO4 • 7H2O) dans de l’eau et compléter à 100 ml. − Solution EDTA: dissoudre 33.5 g d’éthylène diaminotétraacétique disodique dihydraté (Na2C10H14N2O8 • 2H2O) dans de l’eau et compléter à 1000 ml. − Réactif colorant I: dissoudre 0.5 g de sulfanilamide (NH2C6H4SO2NH2) dans une solution consti- tuée de 75 ml d’eau et de 5 ml d’acide chlorhydrique conc. (1 l = 1.19 kg) tout en chauffant le mé- lange au bain-marie. Refroidir à température ambiante et compléter avec de l’eau à 100 ml. Filtrer si nécessaire. − Réactif colorant II: dissoudre 0.1 g de dichlorhydrate de N-(naphtyl-1)-éthylène diamine (C10H7NHCH2CH2NH2 • 2HCl) dans de l’eau et compléter à 100 ml. Filtrer si nécessaire. La solu- tion peut être conservée jusqu’à 1 semaine au réfrigérateur, dans un récipient en verre brun bien fermé. − Solution destinée au développement de la coloration: diluer 450 ml d’acide chlorhydrique conc. (1 l = 1.19 kg) dans de l’eau et compléter à 1000 ml. Méthode d’analyse 122.1 Dosage des nitrates et des nitrites du lait Octobre 1999 Manuel suisse des denrées alimentaires © Office fédéral de la santé publique 5/10 − Solution étalon de nitrite (correspondant à 1 mg NO2⎯ par litre): le jour de l’utilisation, dissoudre dans de l’eau 0.150 g de nitrite de sodium (NaNO2), préalablement séché à 110 – 120 ºC jusqu’à masse constante, compléter avec de l’eau dans un ballon jaugé à 1000 ml et mélanger. Diluer 10 ml de cette solution avec 20 ml de la solution tampon, compléter ensuite avec de l’eau dans un ballon jaugé à 1000 ml et mélanger. 1 ml de la solution résultante contient 1.00 µg NO2⎯. − Solution étalon de nitrate (correspondant à 4.5 mg NO3⎯ par litre): le jour de l’utilisation, dissoudre dans de l’eau 1.468 g de nitrate de potassium (KNO3), préalablement séché à 110 - 120 ºC jus- qu’à masse constante; compléter avec de l’eau dans un ballon jaugé à 1000 ml et mélanger. Di- luer 5 ml de cette solution avec 20 ml de la solution tampon, compléter ensuite avec de l’eau dans un ballon jaugé à 1000 ml. 1 ml de la solution résultante contient 4.50 µg NO3⎯. 3 Equipement Toute la verrerie doit être soigneusement lavée et rincée à l’eau distillée de sorte qu’elle soit exempte de nitrates et de nitrites. − Balance analytique − Récipient pour échantillon, muni d’un couvercle étanche − Erlenmeyers de 250 et de 500 ml de capacité − Ballons jaugés de 100, 200, 500 et 1000 ml, conformes à la norme ISO 1042, classe A − Pipettes graduées, permettant de délivrer 2, 4, 5, 8, 10, 12, 20, 25 et 50 ml, conforme à la norme ISO 648, classe A, ou à la norme ISO 835 − Entonnoirs en verre, Ø env. 7 cm, à tige courte − Papier filtre, pour filtration moyenne, Ø env. 15 cm; exempt de nitrates et de nitrites − Spectrophotomètre travaillant à 538 nm, avec cuves de 1 à 2 cm de trajet optique − Colonne de réduction (cf. fig. 1): dans le but d’éviter l’inclusion de petites bulles de gaz dans la colonne de cadmium cuivré, l’eau distillée ou déionisée, utilisée pour la «préparation de la co- lonne», pour la «vérification du pouvoir réducteur de la colonne» et pour la «régénération de la co- lonne», doit être bouillie, puis refroidie à la température ambiante avant chaque utilisation. Méthode d’analyse 122.1 Dosage des nitrates et des nitrites du lait Octobre 1999 Manuel suisse des denrées alimentaires © Office fédéral de la santé publique 6/10 Illustration 1: Colonne de réduction (cotes en mm) 3.1 Préparation de la colonne − Introduire env. 40 à 60 g de granulés de cadmium dans un erlenmeyer de 250 ml. − Ajouter de la solution d’acide chlorhydrique (env. 2 mol/l) en quantité suffisante pour couvrir le cadmium, puis agiter durant quelques minutes. − Décanter la solution, puis laver à l’eau le cadmium dans l’erlenmeyer jusqu’à ce qu’il soit exempt de chlorures. − Cuivrer les granulés de cadmium en y additionnant la solution de sulfate de cuivre à raison d’env. 2.5 ml par g de cadmium, puis agiter pendant 1 min. − Décanter la solution et laver aussitôt le cadmium cuivré avec de l’eau, en prenant soin que le cadmium soit continuellement couvert d’eau. Arrêter le lavage lorsque l’eau de lavage est exempte de cuivre précipité. − Placer un tampon de laine de verre à la base de la colonne en verre destinée à contenir le cad- mium cuivré (cf. fig. 1). Remplir la colonne avec de l’eau. − Transférer le cadmium uploads/Sante/ dosage-des-nitrates-et-des-nitrites-du-lait.pdf