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Département fédéral de l’intérieur DFI Office fédéral de la santé publique OFSP

Département fédéral de l’intérieur DFI Office fédéral de la santé publique OFSP Manuel suisse des denrées alimentaires 118.1 Dosage du lactose du lait Méthode d’analyse 118.1 Dosage du lactose du lait Octobre 1999 Manuel suisse des denrées alimentaires © Office fédéral de la santé publique 2/6 Table des matières I Résumé ...............................................................................................................................3 II Description de la méthode.................................................................................................4 1 Principe ................................................................................................................................4 2 Réactifs ................................................................................................................................4 3 Equipement ..........................................................................................................................4 4 Mode opératoire ...................................................................................................................4 4.1 Traitement préliminaire des échantillons...............................................................................4 4.2 Mesure .................................................................................................................................5 5 Calcul et expression des résultats ........................................................................................5 6 Bibliographie.........................................................................................................................5 III Chronique des modifications ............................................................................................6 Méthode d’analyse 118.1 Dosage du lactose du lait Octobre 1999 Manuel suisse des denrées alimentaires © Office fédéral de la santé publique 3/6 I Résumé Titre Dosage du lactose du lait Principe de mesurage Méthode enzymatique Numéro de la méthode 118.1 No. Avant 2006 1/6.1 Analyte Lactose Matrice Lait Abrégé La β-galactosidase hydrolyse le lactose en galactose et en glucose. Dans une réaction catalysée par la β-galactose déshydrogénase (Gal-DH), le galactose est oxydé en acide galactonique par le nicoti- namide adénine dinucléotide (NAD), avec formation d'une quantité de nicotinamide adénine dinucléotide forme réduite (NADH) équiva- lente à la quantité de galactose. La différence entre le galactose total et le galactose libre donne la teneur en lactose. Domaine de mesure – Limite de détection – Limite de détermination – Données de validation Non Commentaires sur la validation – Statut de la méthode Recommandé Dernière modification en 2008 Méthode de base – Remarques Alternative: ISO 5765-1: Lait sec, mélanges secs pour crèmes glacées et froma- ges fondus - Détermination de la teneur en lactose - Partie 1: Mé- thode enzymatique par la voie glucose ISO 5765-2: Lait sec, mélanges secs pour crèmes glacées et froma- ges fondus - Détermination de la teneur en lactose - Partie 2: Mé- thode enzymatique par la voie galactose Méthode d’analyse 118.1 Dosage du lactose du lait Octobre 1999 Manuel suisse des denrées alimentaires © Office fédéral de la santé publique 4/6 II Description de la méthode 1 Principe En premier lieu, le lait est clarifié avec les solutions de Carrez. Le lactose présent dans la solution est ensuite hydrolysé, en présence de β-galactosidase en D-galactose, et en D-glucose. e glu galactose O H lactose ase galactosid cos 2 + − ⎯ ⎯ ⎯ ⎯ ⎯ ⎯ → ⎯ + − β β Le galactose est oxydé en acide galactonique par le nicotinamide-adénine-dinucléotide (NAD), en présence de β-galactose-déhydrogénase (Gal-DH). Au cours de cette réaction, il se forme une quanti- té de NADH (forme réduite de NAD) directement proportionnelle au galactose consommé. NADH ue galactoniq acide NAD galactose DH Gal + ⎯ ⎯ ⎯ → ⎯ + − − β La teneur en galactose libre est déterminée à partir d'un «échantillon de galactose», et la teneur en galactose total à partir d'un «échantillon de lactose» obtenu lors d'un essai mené en parallèle après hydrolyse de l'échantillon par la β-galactosidase. La teneur en lactose est calculée par différence entre le galactose total et le galactose libre. 2 Réactifs − Solution de Carrez 1: dissoudre 35.9 g d'hexacyanoferrate de potassium (ll), K4[Fe(CN)6] 3 H20 (masse molaire 422 g/mol) dans de l'eau, et compléter à 1 litre (85 mmol/l). − Solution de Carrez Il: dissoudre 71.9 g de sulfate de zinc, ZnS04 7 H20, (masse molaire 287.5 g/mol) dans de l'eau, et compléter à 1 litre (250 mmol/l). − Coffret de réactifs pour le dosage par vole enzymatique du lactose et du galactose (ex. Boehrin- ger). − Solution d'hydroxyde de sodium 0.1 mol/l. 3 Equipement − Photomètre pour mesures à 340 nm − Cuvettes en quartz ou jetables de 1 cm d'épaisseur − Filtres ronds, ex. S & S 5892 − Bain réfrigéré (env. 0 °C) 4 Mode opératoire 4.1 Traitement préliminaire des échantillons − avant la pesée, vérifier que l'échantillon de lait est parfaitement homogène. − introduire 10 g de lait dans un ballon jaugé de 500 ml − ajouter env. 200 ml d'eau et bien mélanger − ajouter 5 ml de chacune des solutions de Carrez (I et ll), puis − 10 ml de solution d'hydroxyde de sodium 0.1 mol/I, en mélangeant bien après chaque ajout − compléter jusqu'à la marque avec de l'eau et mélanger plonger dans un bain réfrigéré froid pen- dant 10 minutes, puis filtrer à travers le filtre rond en éliminant les premiers ml (solution pour l'ana- lyse). Facteur de dilution = 50. Méthode d’analyse 118.1 Dosage du lactose du lait Octobre 1999 Manuel suisse des denrées alimentaires © Office fédéral de la santé publique 5/6 4.2 Mesure Analyser la, solution obtenue selon «Traitement préliminaire des échantillons» en suivant les indica- tions du coffret de dosage (tableau de dilution, mesure). 5 Calcul et expression des résultats La teneur en lactose ou en galactose des solutions analysées est exprimée en g/kg, avec 1 décimale, en tenant compte du facteur de dilution des échantillons. 6 Bibliographie 1. Boehringer Mannheim Biochemica. Methoden der enzymatischen BioAnalytik und Lébensmittela- nalytik (1994). 2. Standard FIL IDF No 79B (1991): Lait, produits laitiers et fromages fondus - Détermination de la teneur en lactose (méthodes enzymatiques). 3. Bergmeyer, H.U. (éditeur): Methods of enzymâtic analysis, 3rd ed. vol VI. 4. Bergmeyer, H.U, (éditeur): Mlethoden der enzymatischen Analyse, 3. Aufl. Bd. ll; G. Kurz et K Walienfets. Lactose und andere > β-D-Galactoside, 1225-1229 und 1324-1327. Verlag Chemie Weinheim (1974). Méthode d’analyse 118.1 Dosage du lactose du lait Octobre 1999 Manuel suisse des denrées alimentaires © Office fédéral de la santé publique 6/6 III Chronique des modifications Tableau synoptique Version Commentaires 118.1 Mise à jour en raison du transfert dans la version internet du MSDA uploads/Sante/ dosage-du-lactose-du-lait.pdf