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Année Universitaire : 2017-2018 Master Sciences et Techniques : CMBA Chimie des

Année Universitaire : 2017-2018 Master Sciences et Techniques : CMBA Chimie des Molécules Bio Actives MEMOIRE DE FIN D’ETUDES Pour l’Obtention du Diplôme de Master Sciences et Techniques TITRE Présenté par:  Benrzeil Hajar Encadré par:  Pr.Sabir safia  Dr. Alaoui Asmae Soutenu Le 12 juin 2018 devant le jury composé de :  Pr. S.Sabir (FST)  Pr. A.Meliani (FST)  Pr. J.Hazm (FST)  Dr. A.Alaoui (LNCM) Stage effectué à : Laboratoire Nationale De Contrôle Des Médicamentes(Rabat). Dosage du principe actif et des impuretés par HPLC dans les Insulines Glargines médicament au sein du LNCM Mémoire de fin d’études pour l’obtention du Diplôme de Master Sciences et Techniques Nom et prénom: Benrzeil Hajar Année Universitaire : 2017/2018 Titre: Dosage du principe actif et des impuretés par HPLC dans les insulines glargines médicaments Résumé Les médicaments biologiques, également connus sous l’appellation produits biologiques, sont fabriqués à partir de tissu humain ou animal ou des microorganismes. Parmi ces produits on trouve les insulines humaines [1] et les insulines recombinantes [2]. L’insuline humaine est une hormone produite par des cellules spécialisées du pancréas : les cellules β. L’insuline recombinante est une protéine produite par des cellules dont l’ADN a été modifié par recombinaison génétique [3]. L’insuline est systématiquement prescrite aux personnes atteintes d’un diabète insulino dépendant, (le diabétique de type 1) et à de nombreux diabétique de type 2. Le traitement consiste à injecter quotidiennement de médicament. Avant qu’un médicament puisse être vendu au Maroc, le fabricant doit prouver au laboratoire national de contrôle des médicaments sa qualité, son innocuité et son efficacité via un dossier d’autorisation de mise sur le marché qui comporte des méthodes de contrôles analytiques de la matière première et du produit fini. Alors notre étude au sein de LNCM porté sur le contrôle de qualité de deux spécialités pharmaceutique par le dosage des principes actifs ; des impuretés, ainsi que le conservateur par HPLC. Pour montrer que ces médicaments sont conformes aux spécifications. Mots clés : Insuline humaine, insuline recombinant, ADN recombinant, hormone, protéine, LNCM, HPLC. Dédicace J’offre ce modeste travail : A mes chers parents, Mais aucune dédicace ne serait témoin de mon profond amour, mon immense gratitude et mon plus grand respect, car je ne pourrais jamais oublier la tendresse et l’amour dévoué par lesquels ils m’ont toujours entourer depuis mon enfance. Je dédie aussi se travail : A mes chers frères et ma petite sœur Pour leurs compréhensions et patience. A mes adorables grands parents et à toute ma famille A tous ceux que j’aime et à toutes les personnes qui m’ont prodigué des Encouragement et se sont données la peine de me soutenir durant tout mes études. A mes chères enseignantes sans exception. A mes collègues du master CMBA. Remerciement : C’est pour moi un réel plaisir de remercier toutes les personnes qui m’ont, de près ou de loin, d’une manière ou d’une autre, permis par leur collaboration, leur soutien et leur avis judicieux, de mener à bien ce travail. Je tiens à remercier dans un premier temps, l’ensemble du corps enseignant du département de chimie, pour avoir porté un vif intérêt à ma formation, et pour avoir accordé la plus claire de leur temps, leur attention et leur énergie, dans un cadre très agréable de complicité et de respect. Je tiens à remercie Mrs. F.ELOUAZANI responsable du master Chimie des Molécules Bioactives Pour m’avoir donné l’occasion de m’inscrire au master, et pour son aide précieuse tout au long de mes études. J’adresse aussi mes sincères remerciements à mon encadrante Pr. S.SABIR pour l’honneur qu’elle m’a fait en acceptant de m’encadrer et diriger ce travail. Sa gentillesse, sa modestie, sa riche expérience, et l’accueil cordial qu’elle m’a toujours réservé. Toutes ces qualités m’ont inspiré une grande admiration à son égard. Mes plus vifs remerciements à DR .A. Alaoui mon encadrante au Laboratoire National de Contrôle des Médicaments, pour ses qualités humaines et professionnelles, pour sa disponibilité, sa gentillesse et ces précieuses directives tout au long de la réalisation de se travail. J’ai pris un grand plaisir de travailler avec elle. Mes sincères remerciements s’adressent également aux Dr. K. KARROUCHI, Dr. M. ELKARBANE, Mme LATIFA, Mme ILHAM, Mme. NARJIS, Mrs M. ALAMI et Mrs M. BENLFILALI pour leurs soutiens et de la disponibilité qu’il mon accordé pour faire avancer ce travail soit au niveau scientifique ou matériel. Mes remerciements particuliers s’adressent aux chefs du service physico-chimique et d’essai biologique Dr. Saadiya et Dr. L.Hakkou. Je tiens à remercier et à témoigner toute ma reconnaissance à l’ensemble de l’équipe du service physicochimie du LNCM pour leur convivialité, leur disponibilité ainsi que leur gentillesse, aussi pour avoir facilité mon intégration et pour la bonne ambiance qu’ils ont maintenue au sien du laboratoire. Pr. A. MELIANI et Pr .J .HAZM. C’est un grand honneur que vous me faites en jugeant mon travail, veuillez trouver l’expression de mon admiration, ma grande gratitude, ma profonde reconnaissance, et ma haute considération. LISTE DES ABREVIATIONS : LNCM : Laboratoire Nationale de Contrôle des Médicaments HPLC : chromatographie liquide à haut performance ICH : international conférence on harmonisation DMP : la direction des médicaments et de pharmacie ADSP : l’Autorisation de débit des spécialités pharmaceutiques. OMS : l’organisation mondiale de la santé USP : United State Pharmacopée SCR : substance chimie de référence OCDE : Organisation de coopération et de développement économique CTD : document technique commun SST : système suitability test Rs : la résolution α : la sélectivité Nth : Nombre de plateaux Théoriques Fs : Facteur de symétrie p/v : rapport de pic-vallée PA : Principe Actif LOD : limite de détection LOQ : limite de quantification HMWP : les impuretés de haut poids moléculaire RSD : relative standard diviation ou coefficient de variation STD : standard IG : insuline glargine FR : facteur de réponse LISTES DES FIGURES : Figure1 : Organigramme de la direction des médicaments et de la pharmacie ............................ 5 Figure 2: organigramme de service physico-chimique ................................................................ 6 Figure 3 : schéma de circuit des médicaments au sein de LNCM ............................................... 7 Figure 4: l’équivalence entre un médicament princeps et générique .......................................... 8 Figure 5: la structure de l’insuline humaine ................................................................................. 14 Figure 6: la structure de l’Insuline Glargine ................................................................................ 16 Figure 7: l’appareille de chromatographie liquide à haut performance ....................................... 18 Figure 8: les constituons de chromatographie liquide à haut performance .................................. 20 Figure 9: injection avec boucle a) remplissage de la boucle, b) injection dans la colonne .......... 21 Figure 10: colonne standard et pré-colonne de HPLC ................................................................. 21 Figure 11:Les grandeurs de calcul de nombre des plateaux théorique......................................... 23 Figure 12: calcul du facteur de résolution .................................................................................... 24 Figure 13: Détermination du rapport pic-vallée ……………………………. ............. 25 Figure 14: chromatogramme d’un pic asymétrique ……………………………. ............. 25 Figure 15: chromatogramme de vérification de conformité du système ...................................... 28 Figure 16: Chromatogramme de solution d’essai 1 à 276 nm ...................................................... 29 Figure 17: Chromatogramme de solution d’essai 2 à 276 nm ...................................................... 30 Figure 18: Chromatogramme de solution d’essai 3 à 276 nm ...................................................... 31 Figure 19: chromatogramme de six injections de solution standard ............................................ 33 Figure 20: chromatogramme de solution d’essai 1à 214 nm ....................................................... 34 Figure 21: chromatogramme de solution d’essai 2 à 214 nm ...................................................... 35 Figure 22: chromatogramme de solution d’essai 3 à 214 nm ...................................................... 36 Figure 23: chromatogramme de solution de référence ................................................................. 38 Figure 24 : chromatogramme de dosage des impuretés dans l’essai 1 ......................................... 38 Figure 25: chromatogramme de dosage des impuretés dans l’essai 2 .......................................... 39 Figure 26: chromatogramme de dosage des impuretés dans l’essai 3 .......................................... 39 Figure 27: chromatogramme d’Insuline Glargineet de 0A-Arg-Insuline Glargineà215 nm….. .. 43 Figure 28: Chromatogramme du standard d’Insuline Glargineà 215 nm .................................... 44 Figure 29: chromatogramme de solution d’essai ......................................................................... 46 Figure 30: chromatogramme du standard d’Insuline Glargineà 215nm....................................... 47 Figure 31: courbe d’étalonnage d’Insuline Glargine .................................................................... 47 LISTE DES TABLEAUX : Tableau 1: les conditions chromatographiques utilisé pour le dosage de HMWP .............................. 28 Tableau 2: résultats du rapport pic/vallée ............................................................................................ 29 Tableau 3: résultats d’essai 1 .............................................................................................................. 29 Tableau 4: résultats de la solution d’essai 2 ...................................................................................... 30 Tableau 5: résultats de la solution d’essai 3 ........................................................................................ 31 Tableau 6: les normes de limite de détection et de limite de quantification ....................................... 31 Tableau 7: les conditions chromatographiques du dosage de PA (l’Insuline Glargine) ..................... 32 Tableau 8: programme d’élution ......................................................................................................... 32 Tableau 9: résultats de six injections de solution standard d’Insuline Glargine ................................. 33 Tableau 10: résultats d’injection de solution d’essaie 1 ...................................................................... 34 Tableau 11: résultats d’injection de solution d’essai 2 ........................................................................ 35 Tableau 12: résultats d’injection de solution d’essai 3 ........................................................................ 36 Tableau 13: résultats du dosage des impuretés en % .......................................................................... 39 Tableau 14: standards de références .................................................................................................... 40 Tableau 15: programme d’élution ....................................................................................................... 41 Tableau 16: conditions chromatographique utilisé pour le dosage du PA. ......................................... 42 Tableau 17: séquence des injections........... ........................................................................................ 42 Tableau 18: résultats d’injection du standard d’Insuline Glargine ...................................................... 44 Tableau 19: résultats de calcul de uploads/Sante/dosage-du-principe-actif-et-de-hajar-benrzeil-5329.pdf