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Fiche technique onpg ère STL LE TEST ONPG Fiche technique n Intérêt Ce test est réalisé lors de l ? identi ?cation de très nombreuses bactéries Gram et Gram - La ? -galactosidase est une enzyme qui intervient dans le métabolisme du lactose L ? utilisation

ère STL LE TEST ONPG Fiche technique n Intérêt Ce test est réalisé lors de l ? identi ?cation de très nombreuses bactéries Gram et Gram - La ? -galactosidase est une enzyme qui intervient dans le métabolisme du lactose L ? utilisation du lactose par la bactérie requiert deux enzymes la lactose perméase qui permet au lactose de pénétrer dans la bactérie la ? -galactosidase qui catalyse l ? hydrolyse du lactose en glucose et galactose La recherche de la ? - galactosidase ne présente d ? intérêt que pour les bactéries lactose - En e ?et toutes les bactéries lactose sont ? -galactosidase La recherche de l ? enzyme est donc inutile Principe La ? -galactosidase est une enzyme inductible elle n ? est synthétisée par la bactérie que lorsque celle ??ci est en présence de son substrat ? La recherche de la ? -galactosidase ne peut donc se faire que sur un milieu contenant du lactose exemple le milieu Kligler Hajna On utilise un substrat synthétique l ? ortho-nitro-phényl-galactoside ONPG incolore de structure proche du lactose et capable de pénétrer dans la bactérie sans perméase ? Si la bactérie possède la ? -galactosidase on obtient du galactose et de l ? orthonitro-phénol ONP de couleur jaune La réaction est la suivante ONPG ? -gal ONP galactose substrat incolore produit jaune Ensemencement ATTENTION Ce test doit être e ?ectué à partir d ? une souche lactose - cultivée dans un milieu contenant du lactose Faire une suspension dense en eau stérile tube à hémolyse Déposer un disque d ? ONPG Placer au bain-marie à C Lire après minutes Lecture Observation Interprétation Coloration jaune La bactérie a hydrolysée l ? ONPG en ONP produit coloré jaune Conclusion La bactérie possède la ? -galactosidase elle est dite ONPG Incolore Il n ? y a pas d ? ONP dans le milieu la bactérie n ? a pas hydrolysé l ? ONPG La bactérie ne possède pas la ? -galactosidase elle est dite ONPG - C