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Biologia molecular qpcr frances pdf

revue générale Ann Biol Clin ?? Quanti ?cation des acides nucléiques par PCR quantitative en temps réel abc C Tse J Capeau Hôpital Tenon Laboratoire de biochimie et d ? hormonologie rue de la Chine Paris Article reçu le novembre accepté le novembre Résumé La réaction de polymérisation en cha? ne PCR est devenue un outil essentiel en biologie moléculaire et son application à la détection des acides nucléiques a révolutionné l ? analyse quantitative des gènes et de leurs messagers Ce concept technologique a rapidement évolué au cours de ces dernières années et le nombre croissant des applications quantitatives de la PCR a contribué au développement de la PCR quantitative en temps réel Cette revue décrit après un bref rappel portant sur les bases mathématiques de la PCR les principes de base de la quanti ?cation par PCR en temps réel nouveau concept du cycle seuil ainsi que ceux des chimies les plus employées pour la détection en tube clos des acides nucléiques chimie SYBRTM Green I et chimies utilisant les sondes uorogéniques sondes TaqManTM sondes FRET en tandem et sondes BeaconTM Elle discute des di ?érentes stratégies de quanti ?cation et compare les systèmes de PCR quantitative en temps réel actuellement en compétition sur le marché Les principales applications en biologie médicale sont également décrites Mots clés PCR PCR en temps réel cycle seuil sonde uorogénique Summary The polymerase chain reaction PCR has become an essential tool for molecular biologists and its introduction into nucleic acids detection systems has revolutionized the quantitative analysis of DNA and RNA The technique has rapidly evolved over the last few years and the growing interest in quantitative applications of the PCR has favoured the development of real- time quantitative PCR In this paper we review after presentation of the theorical aspects of PCR the basic principles of real-time PCR with the introduction of the concept of threshold cycle More precisely we describe the novel assay formats that greatly simplify the protocols used for the detection of speci ?c nucleic acids We focus on the actual four technologies that enable sequence detection in a closed tube and that are SYBRTM Green I TaqManTM probes Hybridization probes and Molecular BeaconTM probes We then discuss the di ?erent quanti ?cation strategies in real time PCR and compare the competiting instruments on the market The most important real-time PCR applications in clinical biology are also described Key words PCR real time PCR threshold cycle uorogenic probe Le concept technologique de la réaction de polymérisation en cha? ne polymerase chain reaction ou PCR découvert par Kary Mullis en et qui lui a valu le prix Nobel de chimie en est aujourd ? hui devenu un outil quasiment universel dans le domaine de la biologie La PCR est une méthodologie hautement sensible et spéci ?que pour la dé- Tirés à part C Tse tection des acides nucléiques Son usage s ? est considérablement étendu à de nombreuses applications dont l ? analyse quantitative d ? acides nucléiques spéci