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bioMérieux SA Français - 1 20 500 07468K - fr - 2009/11 ® Staph Système d'ident

bioMérieux SA Français - 1 20 500 07468K - fr - 2009/11 ® Staph Système d'identification des staphylocoques, microcoques et apparentés INTRODUCTION ET OBJET DU TEST API Staph est un système standardisé pour l’identification des genres Staphylococcus, Micrococcus et Kocuria comprenant des tests biochimiques miniaturisés ainsi qu’une base de données. La liste complète des bactéries qu'il est possible d'identifier avec ce système est présente dans le Tableau d'Identification en fin de notice. PRINCIPE La galerie API Staph comporte 20 microtubes contenant des substrats déshydratés. Les microtubes sont inoculés avec une suspension bactérienne réalisée dans API Staph Medium qui reconstitue les tests. Les réactions produites pendant la période d'incubation se traduisent par des virages colorés spontanés ou révélés par l'addition de réactifs. La lecture de ces réactions se fait à l'aide du Tableau de Lecture et l'identification est obtenue à l'aide du Catalogue Analytique ou d'un logiciel d'identification. PRESENTATION (coffret de 25 tests) - 25 galeries API Staph - 25 boîtes d'incubation - 25 ampoules d'API Staph Medium - 25 fiches de résultats - 1 notice COMPOSITION Galerie La composition de la galerie API Staph est reportée dans le tableau de lecture de cette notice. Milieu API Staph Medium 6 ml Extrait de levure 0,5 g Bactopeptone (origine bovine/porcine) 10 g NaCl 5 g Oligoéléments 10 ml Eau déminéralisée qsp 1000 ml pH : 7,0 - 7,4 REACTIFS ET MATERIEL NECESSAIRES MAIS NON FOURNIS Réactifs - Huile de paraffine (Réf. 70 100) - Réactifs : VP 1 + VP 2 (Réf. 70 422) NIT 1 + NIT 2 (Réf. 70 442) ZYM A (Réf. 70 494) ZYM B (Réf. 70 493) - McFarland Standard (Réf. 70 900) - Catalogue Analytique API Staph (Réf. 20 590) ou logiciel d'identification apiweb TM (Réf. 40 011) (consulter bioMérieux) Matériel - Pipettes ou PSIpettes - Portoir pour ampoules - Protège-ampoule - Equipement général de laboratoire de bactériologie PRECAUTIONS D'UTILISATION xPour diagnostic in vitro et pour contrôle micro- biologique. xPour usage professionnel uniquement. xCe coffret contient des composants d'origine animale. La maîtrise de l'origine et/ou de l'état sanitaire des animaux ne pouvant garantir de façon absolue que ces produits ne contiennent aucun agent pathogène transmissible, il est recommandé de les manipuler avec les précautions d'usage relatives aux produits potentiellement infectieux (ne pas ingérer; ne pas inhaler). xLes prélèvements, cultures bactériennes et produits ensemencés doivent être considérés comme potentiellement infectieux et doivent être manipulés de façon appropriée. Les techniques aseptiques et les précautions usuelles de manipulation pour le groupe bactérien étudié doivent être respectées tout au long de la manipulation ; se référer à "CLSI M29-A, Protection of Laboratory Workers From Occupationally Acquired Infections; Approved Guideline - Révision en vigueur". Pour informations complémentaires sur les précautions de manipulation, se référer à "Biosafety in Micro- biological and Biomedical Laboratories - CDC/NIH - Dernière édition", ou à la réglementation en vigueur dans le pays d'utilisation. xNe pas utiliser les réactifs après la date de péremption. xAvant utilisation, s’assurer de l’intégrité de l’emballage et des composants. xNe pas utiliser de galeries ayant subi une altération phy- sique : cupule déformée, sachet déshydratant ouvert, ... xOuvrir les ampoules délicatement comme suit : - Placer l'ampoule dans le protège-ampoule. - Tenir l'ensemble verticalement dans une main (bouchon blanc vers le haut). - Bien enfoncer le bouchon. - Exercer une pression horizontale avec le pouce sur la partie striée du bouchon de façon à casser l'extrémité de l'ampoule. - Retirer l'ampoule du protège-ampoule et conserver le protège-ampoule pour une utilisation ultérieure. - Enlever délicatement le bouchon. xLes performances présentées sont obtenues avec la méthodologie indiquée dans cette notice. Toute dé- viation de méthodologie peut altérer les résultats. xL'interprétation des résultats du test doit être faite en tenant compte du contexte clinique ou autre, de l'origine du prélèvement, des aspects macro et microscopiques de la souche et éventuellement des résultats d'autres tests, en particulier de l'antibiogramme. xIl est recommandé de réaliser un contrôle qualité avant d’utiliser chaque nouvelle ampoule de réactif ZYM B. IVD api® Staph 07468K - fr - 2009/11 bioMérieux SA Français - 2 CONDITIONS DE STOCKAGE Les galeries et milieux se conservent à 2-8°C jusqu'à la date limite d'utilisation indiquée sur l'emballage. ECHANTILLONS (PRELEVEMENT ET PREPARATION) API Staph ne doit pas être utilisé directement à partir des prélèvements d'origine clinique ou autre. Les microorganismes à identifier doivent dans un premier temps être isolés sur un milieu de culture adapté selon les techniques usuelles de bactériologie. MODE OPERATOIRE Préparation de la galerie xRéunir fond et couvercle d'une boîte d'incubation et répartir environ 5 ml d'eau distillée ou déminéralisée [ou toute eau sans additif ou dérivés susceptibles de libérer des gaz (Ex : Cl2, CO2 ...)] dans les alvéoles pour créer une atmosphère humide. xInscrire la référence de la souche sur la languette latérale de la boîte. (Ne pas inscrire la référence sur le couvercle, celui-ci pouvant être déplacé lors de la manipulation). xSortir la galerie de son emballage individuel. xPlacer la galerie dans la boîte d'incubation. Préparation de l'inoculum xRéaliser une préculture sur gélose Columbia au sang (ou Agar P) 18-24 H à 36°C ± 2°C. xVérifier l'appartenance de la souche à la famille des Micrococcaceae (morphologie, Gram, catalase...), ainsi que sa pureté. xOuvrir une ampoule d'API Staph Medium comme indiqué au paragraphe "Précautions d'utilisation". xPréparer une suspension bactérienne homogène, d'opacité égale à 0,5 de McFarland. Utiliser préférentiel- lement des cultures jeunes (18-24 heures). Cette suspension doit être utilisée extemporanément. Inoculation de la galerie xA l'aide d'une pipette ou d'une PSIpette, remplir les tubes de la galerie avec API Staph Medium ensemencé. Ne remplir que les tubes et non les cupules, sans dépasser le niveau du tube. Pour éviter la formation de bulles au fond des tubes, poser la pointe de la pipette ou de la PSIpette sur le côté de la cupule, en inclinant légèrement la boîte d'incubation vers l'avant. xCréer une anaérobiose dans les tests ADH et URE en remplissant leur cupule d'huile de paraffine pour former un ménisque convexe. xRenfermer la boîte d'incubation. xIncuber à 36°C ± 2°C pendant 18-24 heures. LECTURE ET INTERPRETATION Lecture de la galerie xAprès incubation, lire les réactions conformément au Tableau de Lecture en ajoutant 1 goutte de chacun des réactifs suivants : - Test VP : VP 1 et VP 2. Attendre 10 minutes. Une couleur rose franche ou violette indique une réaction positive. Une couleur rose pâle ou rose claire obtenue après 10 minutes doit être considérée négative. - Test NIT : NIT 1 et NIT 2. Attendre 10 minutes. Une coloration rouge indique une réaction positive. - Test PAL : ZYM A et ZYM B (*). Attendre 10 minutes. Une coloration violette indique une réaction positive. (*) Il est recommandé de contrôler chaque ampoule de réactif ZYM B avant la 1ère utilisation. Pour cela, il est recommandé d’utiliser la souche ATCC® 700404 mentionnée au paragraphe Contrôle Qualité afin d’exclure tout réactif défectueux. xNoter les résultats sur la fiche de résultats. Test de résistance à la lysostaphine Déterminer la résistance à la lysostaphine sur milieu Agar P selon la procédure suivante ou selon les recommandations du fabricant. Pour cela, ensemencer par inondation la surface d’une gélose Agar P avec une suspension bactérienne d’environ 107 germes/ml. Laisser sécher 10-20 min à 36°C ± 2°C. Déposer à la surface de la gélose, une goutte d’une solution de lysostaphine à 200 µg/ml. Incuber 18-24 H à 35-37°C. Une lyse totale ou subtotale de la culture bactérienne indique une sensibilité à l’enzyme. Ce test constitue le 21ème test de la galerie. Il est considéré positif en cas de résistance à la lysostaphine. Interprétation L'identification est obtenue à partir du profil numérique. xDétermination du profil numérique : Sur la fiche de résultats, les tests sont séparés par groupes de trois et une valeur 1, 2 ou 4 est indiquée pour chacun. En additionnant à l'intérieur de chaque groupe les valeurs correspondant à des réactions positives, on obtient 7 chiffres qui constituent le profil numérique. xIdentification : Elle est réalisée à partir de la base de données (V 4.1) * à l'aide du Catalogue Analytique : - Rechercher le profil numérique dans la liste des profils. * à l'aide du logiciel d'identification apiweb TM : - Entrer manuellement au clavier le profil numérique à 7 chiffres. 6 706 113 Staphylococcus epidermidis api® Staph 07468K - fr - 2009/11 bioMérieux SA Français - 3 CONTROLE DE QUALITE Les galeries, milieux et réactifs font l'objet de contrôles de qualité systématiques à différentes étapes de leur fabrication. Le Contrôle de Qualité Minimum peut être utilisé pour vérifier que les conditions de stockage et de transport n’ont pas d’impact sur les performances de la galerie API STAPH. Ce contrôle peut être réalisé en suivant les instructions et critères attendues ci-dessus en lien avec le référenciel CLSI M50-A Quality Control for Commercial Microbial Identification Systems. Le contrôle peut être fait en utilisant la souche Staphylococcus capitis ATCC® 35661 pour évaluer les performances du test XYL. Des études réalisées par bioMérieux ont montré que sur la galerie API STAPH, le test XYL est le uploads/s3/ api20-staph.pdf