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1ère STL Fiche technique n°31 LA GALERIE API 20E 1. Ensemencement en 1er jour M

1ère STL Fiche technique n°31 LA GALERIE API 20E 1. Ensemencement en 1er jour MODE OPERATOIRE GALERIE API 20E  Préparation de la galerie o Répartir un peu d’eau dans les alvéoles du fond pour créer une atmosphère humide. o Inscrire la référence de la souche sur la languette latérale de la boîte o Déposer la galerie DE FACON STERILE dans la boîte  Inoculation de la galerie Ensemencer la galerie avec une pipette Pasteur stérile ouverte chargée en suspension, pointe posée sur un côté de la cupule, en laissant couler doucement la suspension dans la cupule. Tenir la boîte légèrement inclinée pour éviter la formation de bulles. o Pour les caractères encadrés (CIT, VP, GEL) : remplir entièrement la cupule (tube et orifice)  mise en aérobiose o Pour les autres caractères, ne remplir que le tube. o Pour les caractères soulignés (ADH, LDC, ODC, H2S, URE) : remplir l’orifice de la cupule avec de l’huile de vaseline stérile  mise en anaérobiose Refermer la boîte et mettre à l’étuve à 37°C pendant 18 à 24 heures. 2. Lecture en 2ème jour  Vérification de la pureté de la souche  Lecture de la galerie de façon ordonnée et méthodique après avoir vérifié la cupule du glucose.  Lecture des éventuels autres tubes  Identification Prélèvement d’une SEULE colonie isolée Suspension bactérienne dans 5 mL d’eau stérile Frottis fixé coloré au Gram Ensemencement : - une gélose VF  type respiratoire - une gélose Hajna Kliger  dégradation du lactose N° souche Ensemencement d’une Galerie API20E Isolement sur gélose ordinaire 4 1 2 3 ATTENTION 1ère STL Fiche technique n°31 Tableau des Caractères de la Galerie API20E Caractère Substrat Enzyme Produit(s) formé(s) indicateur Réactif(s) ajouté(s) Lecture + Lecture – ONPG ONPG ONPG-hydrolase -------------- -galactosidase ONP (jaune) galactose J Ja au un ne e I In nc co ol lo or re e ( (1 1) ) ADH Arginine Arginine Dihydrolase (ADH) Ornithine NH3 CO2 RP R Ro ou ug ge e - - o or ra an ng ge e J Ja au un ne e ( (2 2) ) LDC Lysine Lysine Décarboxylase (LDC) Cadavérine CO2 RP R Ro ou ug ge e - - o or ra an ng ge e J Ja au un ne e ( (2 2) ) ODC Ornithine Ornithine Décarboxylase (ODC) Putréscine CO2 RP R Ro ou ug ge e - - o or ra an ng ge e J Ja au un ne e ( (2 2) ) CIT Citrate CO2 H2O BBT B Bl le eu u V Ve er rt t ( (3 3) ) H2S S2O3 2- (Thiosulfate Réductase) S2- (H2S) Fer III N No oi ir r I In nc co ol lo or re e (jaune pâle) URE Urée Uréase NH4 + (HCO3 -) RP R Ro ou ug ge e J Ja au un ne e TDA Tryptophane Tryptophane Désaminase (TDA) Acide indole pyruvique NH3 TDA / immédiat (Fer III) M Ma ar rr ro on n B Br ru un n J Ja au un ne e IND Tryptophane Tryptophanase Indole A. pyruvique NH3 James / immédiat ou Kovacs / 2min R Ro ou ug ge e I In nc co ol lo or re e J Ja au un ne e VP Pyruvate Acétoïne VP1 (KOH) + VP2 (-naphtol) / 10min R Ro ou ug ge e I In nc co ol lo or re e ( (5 5) ) GEL Gélatine Gélatinase Acides Aminés N No oi ir r I In nc co ol lo or re e (+particules intactes) GLU Glucose Acides BBT J Ja au un ne e B Bl le eu u o ou u b bl le eu u- -v ve er rt t ( (4 4) ) SUCRES (AUXAN.) Man, Ino, Sor, Rha, Sac, Mel, Amy, Ara Acides BBT J Ja au un ne e B Bl le eu u o ou u b bl le eu u v ve er rt t ( (4 4) ) NO2 -/ N2 NO3 - (cupule GLU) Nitrate Réductase NO2 - ------------------ N2 Nit1 + Nit2 / 2min -------------------------- (Zinc) R Ro ou ug ge e - -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- - I In nc co ol lo or re e I In nc co ol lo or re e -------------- R Ro ou ug ge e (1) une très légère couleur jaune est positive (2) une couleur orange après 48H D’INCUBATION doit être considérée comme négative (3) le résultat se lit dans la cupule (zone aérobie) (4) la fermentation commence dans la partie inférieure des tubes et l’oxydation dans la cupule (5) une légère coloration rose après 10 minutes doit être considérée comme négative uploads/s3/ api20e1-pdf.pdf