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REPUBLIQUE ALGERIENNE DEMOCRATIQUE ET POPULAIRE MINISTERE DE L'ENSEIGNEMENT SUP

REPUBLIQUE ALGERIENNE DEMOCRATIQUE ET POPULAIRE MINISTERE DE L'ENSEIGNEMENT SUPERIEUR ET DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE SECTEUR SANITAIRE DE KOUBA HOPITAL BACHIR MENTOURI LABORATOIRE CENTRAL Chef de service : Pr M DAHMMANE RAPORT DE FIN DE STAGE De Rédigée par : Mlle NADJEM KHALIDA Sous la direction de : Dr R. OUSSEDIK Année 2002 / 2003 Les travaux décrits tout au long de ce rapport de fin de stage ont été réalisé au laboratoire central de l'hôpital de Kouba " BACHIR MENTOURI ", dirigé par Madame le professeur M. DAHMANE . Je tiens à remercier , tout d'abord Mlle Oussedik, de m'avoir encadré de si prés et dirigé tout au long de mon séjours au sein de son unité de Sérologie . Je n'oublierais pas de remercier Melles Abdenbi Meriama et Saidani Linda de m'avoir apprise, avec sympathie, les différentes techniques des paillasses . I- Dosage de la CRP. II- Dosage des ASLO . III- Recherche du facteur rhumatoïde par test au latex sur carte . IV- Test d'hemagglutination de la syphilis TPHA . V- Test de grossesse . VI- Détection des anticorps antiVIH1 et VIH2 par technique immunienzymatique . VII- Dépistage des anticorps anti HCV par technique immunoenzymatique . VIII- Détection des antigènes de surface du virus de l'hépatite B par technique immunoenzymatique . I- Dosage de la C.R.P : ( Protéine C réactive ) : 1°/ Définition et intérêt diagnostique : La protéine C réactive ( CRP : PM : 120 000 DA ) est synthétisme dans le foie, à une demi vie de 20 à 30 heures . La CRP fait partie des protéine dites de la phase aiguë, dont la concentration sérique augmente au cours de la réponse générale non spécifique à des processus inflammatoire infectieuse ou non infectieuse des nécroses cellulaire et des néoplasies malignes . La CRP participe en particulier, par l’activation du complément et l’accélération de la phagocytose à la protection non spécifique. La Concentration sérique de CRP chez les sujets sains est : < 5 mg /l [ C ] = 20 à 900 mg /l en 4 à 8 heures dans les maladies aiguës . Le Dosage de la CRP est indiqué dans les cas suivants :  Teste de dépistage des processus inflammatoires et nécrotiques .  Diagnostic et contrôle de l’évolution des infections et des processus inflammatoire Comme par exemple : - Septicémie néonatale, méningite . - Pneumonie . - Pyélonéphrite - Complication postopératoires . - Maladies malignes en particulier en association avec d’autres protéines de la phase aiguë et des marqueurs tumoraux . Appréciation du tableau clinique dans les maladie inflammations . - En cas de Rhumatisme palendronique - En cas d’infection à pousser aiguë ou intermittente . Diagnostic différentiel des maladies inflammatoires . - Lupus érythémateux systématique . - Arthrite rhumatoïde ou autre . - Cystite aiguë / pyélonéphrite . 2°/ Principe de la méthode : C’est une technique qui permet la détermination qualitative et semi quantitative de la protéine C réactive dans le sérum par agglutination directe au latex sur lame . Les particules de latex sont recouvertes d’anti CRP humaine mono spécifique et sensibilisées de façon à détecter un seuil de 0,3 mg de CRP/l ( soit 6 mg de CRP / de sérum pur ) . 3°/ Mode opératoire : Réactifs particulier de latex recouverts d’anti CRP . - Tampon glycine PH = 8,2 . - Sérum humain de contrôle positif . - Sérum humain de contrôle négatif . - Sérum de malade obtenu après centrifugation du sang total recueilli sur tube sec , porter tous les réactifs et les prélèvements à la température ambiante . a) Test qualitatif : Diluer le sérum au 1/20 avec le tampon glycine . exp : sérum 50 µl . tampon 1 ml . - Utiliser à chaque test sur lame , le contrôle positif et le contrôle négatif , ils sont pré dilués . * Test sur lame : - Placer 50µl sur une lame de sérum dilué . - Ajoute une goutte de réactif latex après l’avoir bien agité . - Mélanger les 2 gouttes avec un agitateur propre et étendre le mélange jusqu’à la limite de cercle . - Balancer doucement la lame d’avant en arrière et observer l’agglutination à l’œil nu . - Lire au bout de 2 mn sous un éclairage en lumière directe . b) Test semi quantitatif : - A partir de la dilution au 1/20 préparer une série de dilution dans le tampon glycine à raison de 1/40 - 1/64 . - Tester chaque dilution en qualitatif . - A partir de la plus grande dilution donnant un test positif calculer la concentration limite , en sachant que le seuil de détection au niveau de la lame est de 0,3 mg de CRP /L : 0,30 x dilutions de sérum = concentration de la CRP en mg/l . 4°/ Lecture : Réaction positive : L’agglutination est ( possible ) visible sous forme d’agglomérats de taille plus ou moins grosse apparaissant dans les 2 minutes . Pour le test semi quantitatifs , le calcul doit être fait à partir de la plus grande dilution qui donne une agglutination mette en moins de 2 mn . Réaction négative : Aucun agglutination n’est visible, le réactif reste homogène comme pour le témoin négatif . - On dit que la réaction est positive si CRP >6mg/l . - On dit que la réaction est négative si CRP <6mg/l . - On dit qu’il y a une inflammation quand le taux de CRP est supérieur à 6mg/l . II- Dosage des ASLO : 1°/ Définition : ASLO : anticorps antistreptolysine 0 Ces anticorps sont synthétises contre la streptomycine 0 qui est un enzyme sécrétée par les streptocoques ß hémolytiques du groupe A lors de leur introduction dans l’organisme Le danger du streptocoque est double. Le 1er est du à son effet bactériologique Le 2ème à la synthèse excessive des ASLO qui sont à l’origine des syndrome du rhumatisme articulaire aigu ( RAA ). Donc l’indication biologique du dosage des ASLO est le diagnostic du RAA . 2°/ Principe de la méthode : Le test consiste en une réaction immuno-chimique entre l’antistreptolysine o du sérum et la streptolysine O fixée sur des particules de latex en cas de concentration d’antistreptolysine o augmentée , il se produit une agglutination visible des particules de latex . 3°/ Mode opératoire : a) Test qualitatif avec une sensibilité de 200 UI/ml : - Porter les échantillons sériques et les réactifs à la température ambiante . - Déposer sur les champs d’une plaque test une goutte de sérum de contrôle positif une goutte de sérum de contrôle négatif puis 80 µl de chacun des sérums de patient non dilué . - Ajouter à coté de chaque goutte déjà déposée 1 goutte de Rapitex ASL bien mélanger à l’aide d’un agitateur puis imprimer à la plaque un mouvement de rotation . - Lire l’agglutination après 2 mn . - Une agglutination nette indique un taux d’anti streptolysine 0 > 200UI/ml -+ 20% . b) Test qualitatif avec une sensibilité de 100 UI/ml : - Porter les échantillon sérique et les réactifs à la température ambiante . - Déposer sur les champs d’une plaque test une goutte de sérum de contrôle positif , une goutte du sérum de contrôle négatif puis 80 µl de chacun des sérums de patient non dilué - Ajouter à coté de chaque goutte déjà déposée une goutte de Raplex ASLO, bien mélanger à l’aide d’un bâtonnet , puis imprimer à la plaque un mouvement de rotation . - Lire l’agglutination après 4 minutes . - Une agglutination mette indique un taux d’anti-streptolysine 0 > 100 UI /ml -+20 % . c) Test quantitatif : C’est l’évaluation de la concentration d’antistreptolysine O pour cela , diluer l’échantillon du patient en solution satire wotonique. Tester ensuite les dilutions avec le réactif comme il a été décrits précédemment . 4°/ Résultats : a) Test qualitatif avec une sensibilité de 200 UI/ml : une agglutination mette révèle les échantillons dont la concentration d’ASLO est > 200 UI / ml +- 20% . - Les échantillon dont la [ c ] d’ASLO est < à 200UI /ml 1er pressentent par d’agglutination b) Test qualitatif avec une sensibilité de 100 UI/ml : - Les échantillon dont le résultat est négatif avec la méthode (a ) et la réaction positive avec la méthode (b) ont une concentration d’ASLO comprise entre 100 et 200 UI / ml une agglutination mette révèle les échantillon dont : Le [ c ] d’ASLO est > 100 UI /ml -+ 20% . Les échantillon dont la [ c] est < 100 UI / ml ne pressentent aucune agglutination test qualitatif avec une sensibilité de 100 UI /ml . c) Exploration semis quantitative : Retenir la dilution pour laquelle une agglutination nette est encore visible lire la concentration d’anti streptolysine O de l’échantillon selon le tableau suivant : Agglutination à la dilution Concentration d’ASLO -+ 20% 1/2 1/4 1/8 1/16 400 UI / uploads/Finance/ serologie.pdf