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République Algérienne Démocratique et populaire Ministère de l’enseignement sup

République Algérienne Démocratique et populaire Ministère de l’enseignement supérieur de la recherche scientifique Université des sciences et de la technologie d’Oran Mohammed Boudiaf Faculté des sciences de la nature et de la vie Département vivant et de l’environnement Compte rendu de TP 01 : isolement de micro organisme a partir de différence biotopes -Elaboré par :  MILOUDI MERIEM  Tahar Yamina -Groupe : 05/06 -Section :02 -Module :écologie -Professeur: LAMIA MERMOURI L’année 2021 / 2022 En microbiologie, l’isolement est une technique permettant de séparer les micro-organismes présents dans un mélange microbien. La technique de l’isolement présente deux applications : - Dans le cadre d’un mélange bactérien, l’isolement est utilisé au préalable de l’étude du mélange. L’isolement permet ainsi de séparer les différents membres du mélange et de les étudier de façon séparée. - Dans le cadre d’une culture pure (une seule espèce), cette technique permet de vérifier sa pureté. Isoler et dénombrer des micro-organismes qui se trouvent dans les échantillons du sol et eau de mer par la méthode des dilutions tout en maintenant le plan de travail aseptique. l'isolement consiste à réaliser à partir d'un échantillon des suspensions dilution. seront développés . chaque germe sera à l'origine d'une colonie, le comptage des colonies permet par une méthode de calcul simple d'estimer la quantité de germes contenue. -le bec bunsen -vortex -anse de platine –pipettes pasteur –pipettes gradué-les tubes en ver – papier absorbant-désinfectant(eau javel) –boites pétri contenant les trois milieu de culture (BG11-sabouraud-GN)-balance-eau de mer-sol –bleu de méthylène-microscope optique-lame et lamelle-erlenmeyer fermé avec coton (BG11)- huile d’immersion- crayons-eau distillé stérile  -Précautions générales de travail :  Tous les objets utilisés doivent être stériles.  Les mains lavées à l’alcool. Le paillasse doit être lavé à eau de javel.  Le travail doit s’effectuer dans la zone de protection du bec bunsen, à l’abri des courants d’air.il faut flamber les goulots des tubes et flacons après leur ouverture et avant leur fermeture.  Les boites de pétri doivent être ouvertes en maintenant le couvercle à l’oblique avec ouverture du coté de la flamme. -1-Milieu sabouraud : La gélose Sabouraud est un milieu d'utilisation générale, permettant la croissance et l’isolement d'une grande variété de levures et moisissures. L'addition de chloramphénicol inhibe la croissance des bactéries Gram positif et Gram négatif. -2-Milieu GN (gélose nutritif): La Gélose Nutritive est un milieu largement utilisé pour la culture des micro-organismes peu exigeants. Elle est recommandée dans de nombreuses méthodes standardisées d’analyses des aliments, des laitages, de l’eau et d’autres produits. Introduction But Principe Matériel utilise Mode opératoire Isolement sur milieu solide sol s 1gramme du sol est introduit dans un tube contenant 9 mL d’eau distillée stérile . Les échantillons sont homogénéisés par agitation au vortex pendant quelques minutes. 1 - Prélever 1 ml(SM) à l’aide d’une micropipette stérile et déposer dans un tube à essai contenant 9 ml d’E.D stérile - Agiter pendant au moins une minute. - Répéter les étapes pour les deux autres dilutions (10-2, 10-3, ). - En prenant juste la dilution 10-2, pipeter 0,1 ml et déposer dans chacune des 2 boites de Pétri contenant (boite1 :milieu sabouraud/boite2 :milieu GN) . Étendre sur toute la surface avec un étaloir stérile . b- la dilution décimale : Schéma1 : la dilution décimale 1g sol b- Ensemencement : - L’ensemencement a 0.1ml de dilution10-2 est prélevé a l’aide d’une pipette et déposée dans les deux boites de pétri. Etaler à l’aide d’un étaloir stérile chaque boite par mouvement de stries. Incuber la boite1 contient le milieu sabouraud à28°c et la boite 2(GN) à 37°c. -on observe les boites après 72h jusqu'à une semaine -a-Préparation de la solution :mère Fig01 :dilution décimale -Dénombrement : : selon la loi 15<colonie<150 nous avons compté la boite 1 et en avons trouvé jusqu’au 25colonies de différentes forme, couleur et aspect.(15colonie présente des levures et jusqu'à 10 colonie représente des macro mycètes -champignon ) -Etude macroscopique des colonies : Boite01 forme relief contou r taille surface opacité couleur consis tance Colonie1 : levure circulaire bombé régulier petites lisses opaque s blanche créme uses Colonie2 : Moissisures et champignon s irrégulière bombé ondulé Moyennes Et grosses rugueus es opaque s blanche sèche -Dénombrement : nous avons dénombré la culture microbienne de la boite 2 et en avons trouvé jusqu’au 51colonies de différentes forme, couleur et aspect.la boite contient des Lecture des résultats : Fig02 : culture microbienne boite01(milieu sabouraud) Fig03 : culture microbienne boite02(milieu GN) colonies présente des bactéries (jusqu’au 30colonies)-10colonies des champignons filamenteux-et les autres colonies retour à des levures. -Etude macroscopique des colonies : Boite02 forme relief contour taille surface opacité couleur consistance macro mycètes filamenteuse convex e Ondulé et lobé Moyenne et ya grande rugueuse opaque Blanche -beige sèche bactéries circulaire bombé régulier Petites et y’a moyennes lisse opaque blanchatr e crémeuses levures circulaire Bombé convex e régulier petites lisse opaque blanche Crémeuses -nous avons pris deux milieux de culture, le milieu GN et un milieu de BG11. -Milieu BG11 : est optimisé pour la croissance et l'entretien de certaines cyanobactéries. -Mode opératoire : -a-Préparation de la dilution décimale : - Prélever 1 ml de la solution mère (eau de mer) à l’aide d’une micropipette stérile et déposer dans un tube à essai contenant 9 ml d’E.D stérile - Agiter pendant au moins une minute. - Répéter les étapes pour les deux autres dilutions (10- 2, 10-3, ). - En prenant la dilution 10-1, pipeter 0,1 ml et déposer dans chacune des 2 boites de Pétri contenant (boite1 :milieu GN/boite2 :milieu BG11). Étendre sur toute la surface avec un étaloir stérile . b- Ensemencement : - L’ensemencement a 0.1ml de dilution10-1 est prélevé a l’aide d’une pipette et déposée dans les deux boites de pétri. Etaler à l’aide d’un étaloir stérile chaque boite par mouvement de stries. Incuber la boite1 contient le milieu GN et la boite 2(BG11) à 37°c. -on observe les boites après 72h jusqu'à une semaine - Isolement : eau de mer s Résultat : Fig04 : culture microbiennes Sur milieu GN –boite1- -Dénombrement de la boite : nous avons dénombré la boite 1 et en avons trouvé jusqu’au 40colonies de différentes forme, couleur et aspect.(colonies présente des levures - macro mycètes (champignon )-bactéries) -Etude macroscopique des colonies : Boite01 forme relief contour taille surfac e opacit é couleur consistanc e levures circulair e Bombé convex e régulie r petites lisse opaqu e blanche crémeuses macro mycètes (champignon ) circulair e bactéries circulair e bombé régulie r Petite s lisse opaqu e blanchatr e crémeuses -Dénombrement de boite : on a dénombré la boite et on a trouvé des quelques colonies retour à des algues bleue vertes qui s’appelle les cyanobactéries. --Etude macroscopique des colonies : Boite02 forme relief contour taille surface opacite couleur consistance Les cyanobactéries. Fig05 : tapis microbien sur le milieu bg11 -boite02- Isolement sur milieu liquide eau de mer -BG11  nous avons apporté un erlenmeyer qui contient 20ml du solution BG11 (recouvert de coton pour le passage de l’oxygène) et avec un ph égale 7.2.  On a pris 0.5ml de la dilution10-2 et nous le mettons dans l’erlenmeyer  On a agité la solution obtenue pour la rendre homogène  On le mets sur une paillasse à 25 °c et à éclairement ambiants  Lecture de résultat après chaque semaine. Mode opératoire : Fig 06 : solution BG11 dans un erlenmeyer - Résultat : -les résultats obtenus après deux semaine d’observation nous ont permis d’établir un changement de la couleur (vert) et dégagement du gaz ,cela indique la présence des algues vertes (cyanobactéries). Fig 07 : solution BG11 dans un erlenmeyer après incubation. -on a comparé les colonies de la culture microbienne contient le milieu gélose nutritive pour les deux boites eau de mer et sol -les deux cultures présentent une croissance microbienne.(bactéries-levures et champignon) -D’après le dénombrement qu’on a fait pour le comptage des colonies sur les deux boites, on interprète que le nombre des micro-organismes présentent dans le sol plus croitre par apport l’ eau de mer. -L’isolement étudié dans notre manipulation sur les deux biotopes (sol ,eau de mer) montre qu’il ya une croissance importante sur les milieux de culture préparé et par la comparaison qu’on a fait indique : le sol est plus riche des micro-organismes que l’eau. cette différence résulte le sol contient la plupart des éléments nutritifs pour la croissance microbienne. -interprétation et discussion : Conclusion Etude microscopique par la coloration de bleu de méthylène -Préparation du frottis : Nous avons mis une goutte de L’eau de mer sur lame et lamelle après la Coloration avec bleu de méthylène (même méthode pour l’eau stagnantes) et on le met dans le microscope pour l’observation avec grossissement x100 et on va ajouter huile d’immersion est utilisée pour augmenter la résolution des microscopes. Observation microscopique L’eau de mer Observation microscopique L’eau stagnantes Observation microscopique L eau de mer : Avoir quelques protozoaire. L eau stagnantes : Présence des diatomée( grosse et petite) et plusieurs protozoaire. Interprétation: - présence d'un grand uploads/Geographie/ ecologie-ma.pdf