Remerciez-le!

Remerciez @Admin pour avoir partagé cet document gratuitement, de la manière la plus simple, en partageant sur les réseaux sociaux.

Spécialité : C.Q.I.A.A Module : Préparation pour analyses microbiologique Theme

Spécialité : C.Q.I.A.A Module : Préparation pour analyses microbiologique Theme : Préparation de milieu de culture GN Enseignant : insfp souk ahras Objectif opérationnel : Matériels et outils utilisés STAGIAIRE PROFESSEUR Milieu de culture déshydraté GN Balance analytique pH métre Flacon Pissette Bécher Erlen Autoclave Agitateur magnétique Tableau pH métre Marqueur Balance analytique Flacon Agitateur magnétique Pissette Bécher Erlen Autoclave Milieu de culture déshydraté GN Aides pédagogiques : ………………………………………………………………………………………………………………………………. .. Bibliographie :…………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………………………………….. FICHE TECHNIQUE A la fin de la séance le stagiaire sera capable de préparer un milieu de culture « Gélose Nutritif » à partir de sa composition et sans faute Date: cours : 1 TP no : 3 Temps alloue :04h00mn Temps ecoule Plan de leçon Enseignant Stagiaires ➢ Rappel ➢ Centre d'intérêt Dans le cadre de la microbiologie alimentaire, le milieu de culture le plus utilisé pour une grande variété́ de microorganismes c’est le GN, comment peut-on le préparer ? ➢ Titre du cours Préparation d’un milieu de culture « Gélose nutritif » ➢ Objectif opérationnel « A la fin de la séance le stagiaire sera capable de préparer……… » ➢ Réponses justes ➢ Les stagiaires essayent de répondre Faire mélanger avec l’eau distillée, autoclaver, ➢ Les stagiaires s’intéressent et suivent ➢ Répétition de l’objectif opérationnel par quelques stagiaires. ➢ Mise en difficulté 01 ➢ Explication et démonstration 01 1. Dissolution - Matériels utilisés - Suivez les consignes de sécurité ➢ Exécution partielle N°1 : ➢ Les stagiaires essayent de répondre juste ➢ Attention et concentration ➢ Les stagiaires exécutent ➢ Mise en difficulté 02 ➢ Explication et démonstration 02 2. Stérilisation - Matériels utilisés - Suivez les consignes de sécurité ➢ Exécution partielle N°2 : ➢ Les stagiaires essayent de répondre juste ➢ Attention et concentration ➢ Les stagiaires exécutent ➢ Mise en difficulté 03 ➢ Explication et démonstration 03 3. Mesure et ajustement du pH - Matériels utilisés - Suivez les consignes de sécurité ➢ Exécution partielle N°3 ➢ Les stagiaires essayent de répondre juste ➢ Attention et concentration ➢ Les stagiaires exécutent ➢ Exécution finale Suivant les étapes de préparation d’un milieu de culture, préparez un milieu GN. ➢ Les stagiaires exécutent sans faute Préparation d’un milieu de culture « Gélose Nutritif » 1. Dissolution ➢ Peser la quantité appropriée de milieu en prenant soin de mettre en place les équipements de protection individuelle (EPI) indiqués dans les fiches de données de sécurité. ➢ Ajouter progressivement le volume d’eau nécessaire à la reconstitution (indiqué sur l’étiquette et la fiche technique). ➢ Agiter lentement et régulièrement pour solubiliser les composants et répartir la gélose de façon homogène. ➢ Porter à ébullition (sans les surchauffer) les milieux contenant de l’agar avant de répartir en tubes ou en flacons. La dissolution complète de la gélose est obtenue lorsque la solution visqueuse ne contient plus aucune particule d’agar s’accrochant aux parois du récipient. Dans le cas des milieux présentant normalement des précipités, homogénéiser la suspension obtenue avant de répartir. Pour les milieux liquides, on obtient des solutions limpides sans avoir besoin de chauffer avant d’autoclaver. Sauf dans le cas de certains bouillons tels que le bouillon sélénite cystine qui nécessite un court chauffage (se référer à la fiche technique et à l’étiquette). ➢ Répartir le volume de milieu requis en flacons ou en tubes selon l’utilisation. 2. Stérilisation : Les flacons et les tubes ainsi prepares sont sterilises pendant une duree et a une temperature specifiques a chaque milieu de culture. Par ailleurs, certains milieux ne necessitent pas d'autoclavage. Les particularites propres a chaque milieu sont notifiees dans la fiche technique et sur I'etiquette. ➢ D'une maniere generale, les milieux de culture repartis en flacons ou en tubes sont sterilises par autoclavage a 121 °C ± 3 °C pendant 15 minutes. Pour information, le cycle de sterilisation doit etre adapte aux volumes superieurs a 1000 mL. Apres autoclavage, il est important de refroidir le milieu rapidement de maniere a empecher toute surchauffe. Porter des lunettes et des gants de protection contre la chaleur pour sortir le milieu de /'autoclave. Risgue de brulure severe. ➢ Laisser reposer sur une surface thermoresistante a temperature ambiante pendant un court instant (2 minutes par exemple). ➢ Refroidir le milieu en surfusion dans un bain d'eau thermostate a une temperature comprise entre 44 °C et 47 °C . 3. Mesure et ajustement du pH : Les milieux sont ajustes au pH d'utilisation determine pour le milieu complet (avec supplement) pr et aI'ensemencement, apres autoclavage et refroidissement a la temperature de 25 °C (NF EN I SO 11133 : 072014). Respecter precisement les consignes de preparation du milieu pour eviter t oute variation du pH. ➢ Mesurer le pH a I'aide d'un pH-metre a une temperature de 25 °C. ➢ Si necessaire, ajuster le pH. L'ajustement est generalement effectue avec une solution sterile d'hydroxyde de sodium a 40 g/L (c(NaOH) 1 mol/L) ou avec une solution sterile d'acide chlorhydrique a 36,5 g/L (c(HCI) 1 mol/L). ➢ Évaluation finale Suivant les étapes de préparation d’un milieu de culture , préparez un milieu GN. uploads/Geographie/ ppam-cours-3.pdf