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FICHE TECHNIQUE GALERIE API 20E ® MICRO-GALERIE PRINCIPE : Le système API® BioM

FICHE TECHNIQUE GALERIE API 20E ® MICRO-GALERIE PRINCIPE : Le système API® BioMérieux (Appareillage et Procédé d’Identification) est une version miniaturisée et standardisée des techniques biochimiques conventionnelles pour l’identification des bactéries. Lorqu’une suspension bactérienne de densité convenable est répartie dans les différentes alvéoles qui composent la microgalerie (contenant de substrats déshydratés), les métabolites produits durant la période d’incubation se traduisent par des changements de couleur spontanés ou révélés par addition de réactifs. Elle permet l’identification d’une centaine de bacilles à Gram négatif dont les Entérobactéries. Elle comprend 20 tests biochimiques. TECHNIQUE : Ö Préparation de la galerie • Réunir fond et couvercle d’une boîte d’incubation et répartir de l’eau dans les alvéoles pour créer une atmosphère humide. • Déposer stérilement la galerie dans la boîte d’incubation Ö Préparation de l’inoculum • Ouvrir une ampoule de Suspension Medium (ou un tube d’eau distillée stérile) • Prélever une seule colonie bien isolée sur milieu gélosé • Réaliser une suspension bactérienne faible (opacité 0,5 sur l’échelle Mc Farland) Ö Inoculation de la galerie Remplir les tubules et les cupules des tests du type CIT Remplir les tubules des tests du type ADH et remplir la cupule avec de l’huile de paraffine, pour créer l’anaérobiose. Remplissage des tubes : Remplir uniquement les tubules des tests restants Remplir en posant la pipette contre la paroi de la cupule. Remarque : il est important de veiller à ne pas créer de bulles lors de l’inoculation qui pourraient fausser le résultat. De plus l’apparition de bulles après incubation apportera un caractère d’identification supplémentaire (GAZ+) Cupule Tubule Pipette Pasteur RESULTATS : • Noter sur la fiche de résultats toutes les réactions spontanées. • Réaliser les tests nécessitant l’addition de réactifs : Test VP, TDA, IND, Nitrate réductase… IDENTIFICATION : • Avec le tableau d’identification : comparer les réactions notées sur la fiche de résultats avec celle du tableau : chaque cellule de ce tableau contient les pourcentages de positivité • Avec le catalogue analytique : Les tests sont regroupés en groupe de 3, et une valeur (1, 2 ou 4) est indiquée pour chacun. Additionner à l’intérieur de chaque groupe les nombres correspondants aux tests positifs. On obtient un nombre à 7 chiffres qui sert de code d’identification • Avec un logiciel d’identification TABLEAU DE LECTURE DE LA GALERIE MINIATURISEE API 20E Microtube Substrat Caractère recherché Lecture directe ou indirecte (Test si nécessaire) Résultat + Résultat - ONPG Ortho-Nitro-Phényl-Galactoside β-galactosidase Lecture directe ADH LDC ODH Arginine Lysine Ornithine Arginine dihydrolase Lysine décarboxylase Ornithine décarboxylase Lecture directe CIT Citrate Utilisation du citrate Lecture directe H2S Thiosulfate de sodium Production d’H2S Lecture directe URE Urée Uréase Lecture directe TDA Tryptophane Tryptophane désaminase Lecture indirecte Test : ajouter 1 goutte de Perchlorure de Fer IND Tryptophane Production d’indole Lecture indirecte Test : ajouter 1 goutte de réactif de Kovacs VP Pyruvate de sodium Production d’acétoïne Lecture indirecte (Attendre 10 minutes) Test : ajouter 1 goutte de KOH et d’α-napthol GEL Gélatine emprisonnant des particules de charbon Gélatinase Lecture directe GLU à ARA Substrat carboné Utilisation de substrat carboné Lecture directe Lecture indirecte dans la cupule GLU NO 2- / N Nitrates (NO3) Nitrate réductase Test : ajouter 1 goutte de réactif de Griess Ajouter de la poudre zinc en cas de résultat négatif 2 TABLEAU DE LECTURE DE LA GALERIE MINIATURISEE API 20E Microtube Substrat Caractère recherché Lecture directe ou indirecte (Test si nécessaire) Résultat + Résultat - ONPG β-galactosidase Ortho-Nitro-Phényl-Galactoside Lecture directe ADH Arginine Arginine dihydrolase LDC Lecture directe Lysine Lysine décarboxylase ODH Ornithine Ornithine décarboxylase CIT Citrate Utilisation du citrate Lecture directe H S Thiosulfate de sodium Production d’H2S Lecture directe 2 URE Urée Uréase Lecture directe TDA Tryptophane Tryptophane désaminase Lecture indirecte Test : ajouter 1 goutte de Perchlorure de Fer IND Tryptophane Production d’indole Lecture indirecte Test : ajouter 1 goutte de réactif de Kovacs Lecture indirecte (Attendre 10 minutes) VP Pyruvate de sodium Production d’acétoïne Test : ajouter 1 goutte de KOH et d’α-napthol Gélatine emprisonnant des particules de charbon GEL Gélatinase Lecture directe GLU à ARA Substrat carboné Utilisation de substrat carboné Lecture directe Lecture indirecte dans la cupule GLU NO2- / N Nitrates (NO3) Nitrate réductase Test : ajouter 1 goutte de réactif de Griess 2 Ajouter de la poudre zinc en cas de résultat négatif uploads/Litterature/ galerie-api20-e 1 .pdf