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Immuno- hématologie Livret 4 d'activités technologiques Chantal Muller (Profess

Immuno- hématologie Livret 4 d'activités technologiques Chantal Muller (Professeur - Lycée La Martinière Duchère - LYON ) A+ Remerciements Mes remerciements vont à tous ceux qui ont permis la réalisation de cet ouvrage, en particulier certaines de mes collègues, professeurs au lycée La Martinière Duchère de Lyon avec qui j'ai travaillé avec énormément de plaisir en immuno-hématologie : Stéphanie Darmochod et Caroline Platroz qui m'ont aidé à améliorer ces fiches techniques ont réalisé de nombreux schémas (en particulier Stéphanie) et ont relu l'ensemble des livrets. Un remerciement aussi à Christiane Robin, technicienne de laboratoire au lycée La Martinière Duchère de Lyon, qui a contribué avec compétence et gentillesse à la mise au point de techniques. Des remerciements aussi pour Gilles et Sangeetha Muller qui m'ont aidé pour la mise en page. Avant-propos Ce livret 4 d'activités technologiques s'adresse aux étudiants de première année de section de technicien supérieur d'analyses de biologie médicale (B1ABM). Il correspond au module 4 des activités technologiques d'hématologie du référentiel 2008 du brevet de technicien supérieur d'analyses de biologie médicale. Ce livret 4 fait partie de quatre livrets relatifs aux enseignements technologiques d'hématologie de la section technicien supérieur d'analyses de biologie médicale. Livret 1 – Cellules normales du sang et de la moelle rouge des os Livret 2 – Hémopathies Livret 3 – Hémostase Livret 4 – Immuno-hématologie MAI MAI 2012 2012 Sommaire Sommaire Introduction à l'immuno-hématologie......................................................................................................... 5 Chapitre 1 – Groupes sanguins Chapitre 1 – Groupes sanguins Pré-requis et objectifs................................................................................................................................. Détermination des groupes sanguins-Généralités ..................................................................................... Fiche 1 – Détermination des groupes sanguins du système ABO ............................................................ Fiche 2 – Exercices: groupage ABO ........................................................................................................ Fiche 3 – Recherche de la substance H dans la salive.............................................................................. Fiche 4 – Groupage Rhésus standard........................................................................................................ Fiche 5 – Phénotypage Rhésus complet.................................................................................................... Fiche 6 – Détermination du groupe érythrocytaire dans le système Kell.................................................. Fiche 7 – Phénotype étendu....................................................................................................................... 7 8 11 18 21 23 31 37 41 Chapitre 2 – Anticorps irréguliers Chapitre 2 – Anticorps irréguliers Pré-requis et objectifs................................................................................................................................. Fiche 1 – Recherches des anticorps irréguliers - Généralités ................................................................... Fiche 2 – Test de Coombs indirect ........................................................................................................... Fiche 3 – Test enzymatique à la papaïne................................................................................................... Fiche 4 – Test de Coombs direct ............................................................................................................... Fiche 5 – Procédure d'identification des anticorps irréguliers (AI) et exercices d'application.................. Fiche 6 – Titrage des anticorps irréguliers de type IgM............................................................................. Fiche 7 – Titrage des anticorps irréguliers de type IgG............................................................................. 43 44 51 57 61 65 75 77 Chapitre 3 – Techniques en gel filtration Chapitre 3 – Techniques en gel filtration Généralités.................................................................................................................................................. Fiche 1 – Groupage ABO – RH1............................................................................................................... Fiche 2 – Exercices – Interprétations de résultats obtenus en minigel..................................................... 79 81 83 Module 4 – Immuno-hématologie Activités technologiques Introduction à l'immuno- Introduction à l'immuno- hématologie hématologie 1 - 1 - Généralités Généralités L’immuno-hématologie correspond à l’étude : - des antigènes portés par les éléments figurés du sang - de l’immunisation qu’ils peuvent induire. - des pathologies qui en résultent. L'immuno-hématologie est donc une partie de la médecine commune à l'hématologie et à l'immunologie. Elle concerne l'étude: – des groupes sanguins – du système HLA – des Ac irréguliers (RAI) mis en cause dans les les incompatibilités fœto-maternelles, transfusionnelles – d'auto-Ac formés lors de pathologies auto-immunes … 2 - 2 - Prélèvement sanguin Prélèvement sanguin Le sang est généralement prélevé sur EDTA ou sur citrate de sodium. Un prélèvement sur tube sec ne permettra pas la réalisation de tests automatisés. Les procédures qui concernent les groupes sanguins, et les examens immuno-hématologiques en général, doivent être rigoureuses, en particulier pour ce qui concerne la prescription des examens et l'identification des prélèvements. ATTENTION : Deux déterminations du groupe sanguin sont nécessaires pour obtenir une carte de groupe sanguin. La législation précise : deux prélèvements effectués à des moments différents. Étiquetage des tubes : L'étiquetage des tubes doit se faire : ➔par la personne qui a prélevé, ➔immédiatement après le prélèvement, ➔sur le lieu du prélèvement, ➔en contrôlant l'identité du patient et en la lui faisant décliner chaque fois que cela est possible. Les contrôles doivent être particulièrement vigilants chez les sujets comateux et les nouveaux-nés. L'étiquette doit comporter les informations suivantes: nom du patient, nom de jeune fille, prénoms, sexe et date de naissance. B1ABM CM © 5 Introduction à l'immuno-hématologie Demande d'examen : Toute demande comporte les mêmes informations que celles figurant sur l'étiquette ainsi que : ➔les noms du prescripteur et du préleveur, ➔la date et l'heure du prélèvement, ➔et selon les types d'examen, des renseignements complémentaires chaque fois qu'ils sont utiles à la réalisation correcte de l'analyse et à son interprétation : antécédents d'anticorps anti-érythrocytaires, de grossesse ou de transfusions, de réactions transfusionnelles. Le prélèvement doit être stérile, de moins de 7 jours et conservé dans de bonnes conditions à + 4 °C. Cependant il est souhaitable d'effectuer la détermination du groupe sanguin dès que possible après le prélèvement. (en aucun cas une hémolyse ne doit être visible). 6 CM © B1ABM Module 4 – Immuno-hématologie Activités technologiques - Chapitre 1 - - Chapitre 1 - Groupes sanguins Groupes sanguins Pré-requis : – Système ABO et système H :  Structure des Ag érythrocytaires et tissulaires  Génétique  Propriétés des Ac plasmatiques  Règles de transfusion – Système Rhésus  Structure des Ag érythrocytaires  Génétique  Propriétés des Ac plasmatiques  Règles de transfusion – Système Kell  Structure des Ag érythrocytaires  Génétique  Propriétés des Ac plasmatiques  Règles de transfusion – Système MNS, Duffy, Kidd, Lewis, Luthéran...  Structure des Ag érythrocytaires  Génétique  Propriétés des Ac plasmatiques  Règles de transfusion – Réactions immunologiques d'agglutination – Propriétés antigéniques des anticorps • Objectifs : – Savoir réaliser les tests de groupages et phénotypages sanguins – Savoir valider les tests réalisés – Savoir interpréter les tests réalisés – Connaître les règles de la transfusion B1ABM CM © 7 Introduction à l'immuno-hématologie D Détermination des groupes sanguins étermination des groupes sanguins 1 - 1 - Présentation générale des groupes sanguins Présentation générale des groupes sanguins Un certain nombre d’antigènes (plus de 250 connus à ce jour codés par 29 systèmes) sont présents sur les membranes des hématies humaines. Ces antigènes sont codés par des gènes correspondants à des systèmes dont la connaissance est nécessaire dans plusieurs domaines : transfusion sanguine, allo immunisation fœto-maternelle, transplantation ou études génétiques. Ces antigènes : – sont portés par des glycoprotéines et des glycolipides enchâssés dans la membrane des hématies et dirigés vers l’extérieur de la cellule. – sont divisés en deux groupes : 1°) Le groupe appelé « ABO et ses associés » , pour lequel l'antigène est une glycoprotéine ou glycolipide. Les antigènes sont des polyosides et à ce titre ne peuvent être les produits directs de gènes, ceux-ci ne sachant synthétiser que des protéines. Ils en sont donc le produit secondaire. Les anticorps sont naturels (réguliers ou irréguliers), appartiennent à la classe des IgM, Ac froids et complets.. Ils rarement acquis ou immuns (appartenant plutôt à la classe des IgG). Ce groupe est principalement composé de ABO, Hh, Lewis. 2°) Le groupe appelé « Rhésus (Rh) et ses associés » , dans lequel chaque molécule porte une spécificité propre. Les antigènes sont des protéines, (donc produits primaires des gènes). Les anticorps ne sont pas naturels mais immuns ; ils ne sont présents que s’il a existé une stimulation antigénique interhumaine (grossesse ou transfusion). Il appartient plutôt à la classe des IgG, Ac chauds et incomplets. Ce groupe est principalement composé de Rh, Kell, Duffy, Kidd, et MnSs. 2 - 2 - Principe des tests et validation technique Principe des tests et validation technique Les tests mis en œuvre lors des groupages sanguins (ABO/RH) ou lors des phénotypages sanguins sont tous basés sur des réactions d'agglutination active directe (si Ac=IgM) ou indirecte (si Ac=IgG). La validation technique (ou analytique)du typage érythrocytaire repose sur : –des résultats conformes des témoins et des contrôles de qualités internes (CQI), –une absence de double population érythrocytaire. –un profil réactionnel cohérent, –une absence de discordance entre deux réalisations, –une absence de discordance avec des résultats antérieurs éventuels. 8 CM © B1ABM Module 4 – Immuno-hématologie Activités technologiques 3 - 3 - Nomenclatures des principaux systèmes et antigènes de Nomenclatures des principaux systèmes et antigènes de groupes sanguins groupes sanguins Système Symbole Principaux antigènes Appellation courante Nomenclature internationale ABO ABO A ABO1 B ABO2 MNS MNS M MNS1 N MNS2 S MNS3 s MNS4 Rhésus RH D RH1 C RH2 E RH3 c RH4 e RH5 Kell KEL K KEL1 k KEL2 Duffy FY Fya FY1 Fyb FY2 Kidd JK Jka JK1 Jkb JK2 Lewis Le Lea LE1 Leb LE2 Luthéran Lu Lua LU1 Lub LU2 B1ABM CM © 9 Introduction à l'immuno-hématologie 4 - 4 - Principe général des règles transfusionnelles Principe général des règles transfusionnelles Avec les groupes ABO, Rh, Kell, Duffy, Kidd, MnS .. dont la connaissance assure la sécurité de la très grande majorité des transfusions, il est illusoire de penser que la réalisation des transfusions est « compatibles dans tous les systèmes ». uploads/Litterature/ livret-4.pdf