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DEPARTEMENT DE BIOLOGIE Mémoire de fin d’études Présenté par Belmahi Loubna Sam

DEPARTEMENT DE BIOLOGIE Mémoire de fin d’études Présenté par Belmahi Loubna Samah et Fliti Abd El-karim Pour l’obtention du diplôme de Master en(biologie) Spécialité: Microbiologie fondamental et appliquée Thème Soutenue publiquement le ……...…/…………../2017 Devant le Jury Président Encadreur Examinateur Invité: Année Universitaire:2016/2017 Thème réalisé au Laboratoire de la faculté SNV-Université de Mostaganem N°……………………………………………………..…….……/SNV/2017 Université Abdelhamid Ibn Badis-Mostaganem Faculté des Sciences de la Nature et de la Vie REPUBLIQUE ALGERIENNE DEMOCRATIQUE ET POPULAIRE جامعة عبد الحميد بن باديس مستغانم كلية علوم الطبيعة و الحياة Effets antimicrobiens de l’extrait hydrométhanolique de Thymus vulgaris (Thym) récolté dans la région de SETIF sur la croissance des germes spécifiques du yaourt : Streptococcus thermophilus et Lactobacillus bulgaricus AIT SAADA.D M.C.A Université Mostaganem AIT CHABANE Ouiza M.A.A Université Mostaganem EKADA.D PR. Université Mostaganem HAROUNE Doctorant Université Mostaganem Remerciement Au terme de ce travail, On tient à remercier Dieu le tout puissant de nous avoir donné le courage, la volonté et la patience pour achever ce travail. J'ai l'honneur et le plaisir de présenter ma profonde gratitude et mes sincères remerciements à Notre encadreur Mr AIT SAADA , pour sa précieuse aide, ces orientations et le temps qu'il m'a accordé pour mon encadrement. Nous remercions par ailleurs vivement les membres du jury de nous avoir fait l’honneur de juger notre travail et d’assister à la soutenance. Nous adressons nos sincères remerciements à Mme Houaria de nous avoir accueilli dans son laboratoire et pour la confiance et l’aide qu’il nous a accordé, ainsi que toute l’équipe du laboratoire d’ADE Sont oublier tous les employées de la bibliothèque de l’ita pour leur aide et leur compréhension. Finalement, nous remercions toutes les personnes qui ont participé de près ou de loin à la concrétisation de ce mémoire Dédicace A mon très cher père Pour m’avoir soutenu moralement et matériellement jusqu’à ce jour, pour son amour, Et ses encouragements. Que ce travail, soit pour vous, un faible témoignage de ma Profonde affection et tendresse. Qu’ALLAH le tout puissant te préserve, t’accorde Santé, bonheur et te protège de tout mal. A ma très chère mère Autant de phrases aussi expressives soient-elles ne sauraient montrer le degré d’amour et d’affection que j’éprouve pour toi. Tu m’as comblé avec ta tendresse et affection tout au long de mon parcours. Tu n’as cessé de me soutenir et de m’encourager durant toutes les années de mes études. Qu’ALLAH te protége et te donne la santé, le bonheur et longue vie. A mes frères Aymen, Marouane et Anes que j’aime tant Pour leur petit mot et leur soutien A Ikram une personne qui a une place spéciale dans mon cœur,une grande soeur,une amie Qui a été a mes cotés tous au long de cette année qui a partagé avec moi beaucoup de choses. En particulier à mon binome Abd karim un frere qui a toujours viellé a me soutenir A tous la promo MFA que jaime tant un par un . Loubna Dédicace A mon très cher Père Mohamed Que Dieu te protège et t’accorde santé et longue vie Je t’aime tellemen t … A ma très chère mère Que Dieu te protège et t’accorde santé et longue vie tu m’a toujours soutenue A mes très chères sœur nassima et amina et mon frère Abdelmalek je vous souhait tous le bonheur du monde A mon binôme loubna pour tous les souvenirs pendant les années d’études ensemble surtout les deux dernières années tu a une place dans mon cœur, Tes plus qu’une sœur Abdelakarim Sommaire Dédicace Remerciement Résumé Abstract Listes de abréviation Liste des figures Liste des tableaux PARTIE BIBLIOGRAPHIQUE I. Les Bactéries lactique 1- Introduction................................................................................................................................................................................... 3 2- Définition des bactéries lactiques .............................................................................................................................. 3 3- Caractéristiques générales.............................................................................................................................................. 4 4- Habitat .............................................................................................................................................................................................5 5- Classification .................................................................................................................................................................................5 5. 1- Lactobacilles ..........................................................................................................................................................................5 5. 1.1 -Lactobacilles homofermentaires . ................................................................................................................6 5. 1.2- Lactobacilles héterofermentaires ................................................................................................................6 5. 2.1- Homofermentaires. ........................................................................... ...............................................6 5. 2.2- Hétérofermentaires....................................................................... ............................................................................6 5- 2.3- Lactobacillace. ........................................................................... ...................................................................................6 6- Propriétés métaboliques ....................................................................... .............................................................................7 6. 1.1- Transport du sucre. ............... ............................................... ..............................................................................7 6. 1.2- Catabolisme de sucre. ......................... ...............................................................................................................7 6. 1.2.1- Voies métaboliques centrales ...................................................................................................................7 6. 1.2.2- Voies métaboliques spécifiques des sucres ..................................................................................7 6. 1.2.3- Voies métaboliques en aval pyruvate ...............................................................................................7 6. 1.3- Métabolisme de l’acide malique ................................................................................................................8 6. 2- Métabolisme lipidique ....................................................................................................................................................8 7- Bactéries lactiques spécifiques du yaourt ...........................................................................................................8 7. 1- Lactobacilles bulgaricus .........................................................................................................................................8 7. 2- Streptococcus thermophilus .................................................................................................................................9 8- Exigences nutritionnelles des bactéries lactiques ....................................................................................10 8. 1- Exigences en acides aminés .............................................................................................................................10 8. 2- Exigences en vitamines ........................................................................................................................................10 8. 3- Exigences en bases azotés .................................................................................................................................10 8. 4- Exigences en sels minéraux .............................................................................................................................11 8. 4.2- Manganèse (Mn++) ...........................................................................................................................................11 8. 4.3- Calcium (Ca ++) ...................................................................................................................................................11 8. 4.4- Sodium (Na++) .......................................................................................................................................................11 8. 4.5- Potassium (K+) ......................................................................................................................................................11 9- Rôle et intérêt des bactéries lactiques...................................................................................................................11 9. 1- Domaine alimentaire.............................................................................................................................................11 9. 1.1- Role sur la structure et la texture.........................................................................................................11 9.1.2- Rôle dans la conservation.............................................................................................................................12 9.1.3- Rôle sur les caractéristiquesorganoleptiques..............................................................................12 9.2 Domaine de santé .................................................. .....................................................................................................12 9.3- Les bactéries lactiques comme probiotiques....................................................................................12 9.3.1- Rôle des probiotiques ............................................................................... .....................................................12 10- Caractères bio industriels des bactéries lactiques...........................................................................13 II. Le thymus vulgaris (Le thym) 1- Généralité............................................................................... ................................................................................................14 2- Présentation et origine ............................................................................ .........................................................................14 3- Historique ............................................................................... .....................................................................................................15 4- Classification............................................................................... ...............................................................................................16 5- Description botanique ................................................................ ......................................................................................16 6- Répartition géographique ......................................................................... ..........................................................................16 7- Composition chimique ....................................................................... ...................................................................................17 8- Principes actifs du thym............................................................................... .........................................................................18 9- Utilisation............................................................................... .........................................................................................................18 10- Propriétés du thym..................................................................................................................................................19 11- Propriétés pharmacologiques et recherche en cours ......................................................................19 11. 1- Effet antioxydants ...................................................................................................................................................19 11. 2- Effet antimicrobiens...............................................................................................................................................20 11. 3- Effet spasmolytique.................................................................................................................................................20 12- Toxicité et effets indésirable..............................................................................................................................20 PARTIE EXPERIMENTALE III. Matériels Et Méthodes 1- Objectifs.......................................................................... .................................................................................................................21 2- Région de prélèvement et traitements préliminaires du matériel végétal...........................................21 3- Extraction des composés bioactifs...................................................................................................................................22 4- Etude des effets antimicrobiens des extraits de thym........................................................................................25 4. 1- Activation des inocula microbiens ................................................ ..................................................................25 4. 2- Méthode de contact direct .......................................................................... ..........................................................25 4. 3- Méthode des disques par diffusion sur gélose ................................................ .........................................27 4. 4- Détermination de la concentration minimale inhibitrice (CMI) .................................................27 4. 5- Détermination de la concentration minimale bactéricide (CMB) ..............................................29 IV. Résultats et discussion 1- Résultats................................................ ........................................................................................ ................................................30 1. 1- Lactobacillus bulgaricus ............................................................................................ ................................................30 1.1.1Méthode de contact direct. .... ...........................................................................................................................30 1.1-2 Diamètres d’inhibitions ................................................ ................................................................................31 1-1-3 Taux d’inhibition ................................................ ................................................................................................33 1-1-4 Concentration Minimale Inhibitrice: CMI ............................................................................34 1-1-5 Concentration Minimale Bactéricide(CMB) : ...............................................................35 1-2Streptococcus thermophilus ................................................ ..........................................................................36 1-2-1 Méthode de contact direct ................................................ .........................................................................36 1-2-2Diamètre d’inhibition................................................ .................. .......................................................................38 1-2-3 Taux d’inhibition ................................................ ..............................................................................40 1-2-4 Concentration Minimale Inhibitrice ( CMI). .................................................................41 1-2-5 Concentration Minimale Bactéricide (CMB) ................................................................................42 2. Discussion des résultats................................................ ................................................ ..................................................44 Conclusion. Références Bibliographiques.. Annexe Listes des figures Figure 1.Lactobacilus bulgaricus observé au microscope électronique à transmission (×10000)...................................................................................................................................9 Figure 02. streptococcus thermophilus observé au microscope électronique à transmission (×10000).................................................................................................................................10 Figure 03: Thymus vulgaris...................................................................................................15 Figure 04 : Aspects morphologiques de Thymus vulgaris L ................................................16 Figure5. Zone de prélèvement du matériel végétal...............................................................22 Figure6.Extraction par macération........................................................................................23 Figure7.méthode de filtration des extraits hydro alcooliques de thymus vulgaris ...............23 Figure 8. Concentrations des extraits de thymus vulgaris obtenus par macération..............24 Figure9. Méthodes d’extractions des composées bioactif...................................................24 Figure 10.activation des deux souches streptococcus thermophilus et lactobacillus bulgaricus .............................................................................................................................25 Figure11. Méthode de contact direct...................................................................................26 Figure 12 .Détermination de la CMI...................................................................................28 Figure 13. Déterminations de la concentration minimal bactéricide...................................29 Figure 14. effet des extraits bioactifs de thym sur la croissance de lactobacillus bulgaricus..............................................................................................................................30 Figure15. Diamètres d’inhibition des solutions hydro-alcooliques de l’extrait de thym , ainsi que de la pénicilline chez Lactobacillus bulgaricus.............................................................33 Figure 16 .Détermination de la concentration minimale bactéricide de l’extrait Thymus vulgaris chez Lactobacillus bulgaricus...............................................................................35 Figure 17. Effet des extraits bioactifs de thym sur la croissance de streptococcus thermophilus ........................................................................................................................37 Figure18.Effet des solutions d’extrait hydro-méthalonique de Thymus vulgarispréparées à (20,40, 60, 80,100%) et de la pénicilline sur le diamètre d’inhibition chez Streptococcus thermophilus..........................................................................................................................39 Figure 19..Détermination de la concentration minimale bactéricide de l’extrait Thymus vulgaris sur leStreptococcus thermophilus...........................................................................42 Listes des tableaux Tableau 01. Les différents genres de bactéries lactiques.....................................................4 Tableau 02 .Caractères physiologiques de Lactobacillus bulgaricus d’âpres (Droissart et Luquet.,1993)......................................................................................................................9 Tableau 03. Classification botanique de Thymus vulgaris.................................................15 Tableau 04 : Teneur en polyphénols (en µg EAG/mg d’extrait) dans l’infusion aqueuse du Thymus vulgaris ..................................................................................................................17 Tableau.5 Effet des différentes dilutions d’extraits bioactifs de thymus vulgaris sur la croissance de Lactobacillus bulgaricus...............................................................................31 Tableau.6. Effet des différentes dilutions d’extrait de Thymus vulgaris sur les variances des diamètres d’inhibition chez Lactobacillus bulgaricus........................................................32 Tableau7.Effet des différentes dilutions d’extrait de Thymus vulgaris sur les variances des taux d’inhibition chez le Lactobacillus bulgaricus..............................................................34 Tableau 8.Evaluation de la concentration minimale inhibitrice d’extrait de Thymus vulgaris sur la croissance de Lactobacillus bulgaricus.....................................................................35 Tableau 9.Action inhibitrice des extraits bioactifs de thymus vulgaris sur la croissance de lactobacillus bulgaris .......................................................................................................36 Tableau10. Effet des différentes dilutions d’extrait de Thymus vulgaris sur la croissance de Streptococcus thermophilus................................................................................................38 Tableau11.Effet des différentes dilutions d’extrait de Thymus vulgaris sur les variances des diamètres d’inhibition chez le Streptococcus thermophilus................................................40 Tableau12. Effet des différentes dilutions d’extrait de Thymus vulgaris sur les variances des taux d’inhibition chez le Streptococcus thermophilus.........................................................41 Tableau13.Evaluation de la concentration minimale inhibitrice d’extrait de Thymus vulgaris sur la croissance de Streptococcus thermophilus.................................................................42 Tableau14. Action inhibitrice des extraits bioactifs de thymus vulgaris sur la croissance de streptococcus thermophilus ..................................................................................................43 Listes des abréviations  ARN : Acide RiboNuclique  ARNt : ARN uploads/Litterature/ memoire-final 4 .pdf