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MASTDISCS® Combi AmpC and Extended Spectrum Beta- Lactamase (ESL) Detection Di

MASTDISCS® Combi AmpC and Extended Spectrum Beta- Lactamase (ESL) Detection Discs D68C Utilisation Détection de la production d’enzyme du gène AmpC et/ou des Beta-Lactamase à spectre étendu (ESßL). USAGE IN VITRO UNIQUEMENT Composition et Formule* 4 cartouches (D68C), chaque cartouche contient 50 disques. Cartouche A Cefpodoxime 10g Cartouche B Cefpodoxime 10g + inhibiteur ESL Cartouche C Cefpodoxime 10g + inhibiteur AmpC Cartouche D Cefpodoxime 10g + inhibiteurs ESL et AmpC Conservation Conserver à 2 à 8C dans la boîte d’origine jusqu’à la date de péremption indiquée sur l’étiquette. Porter la boîte à température ambiante avant ouverture. Précautions Pour usage in vitro uniquement. Observer les techniques d’aseptie et les précautions d’usage pour les produits biologiques dangereux. A n’utiliser que par du personnel de laboratoire formé et qualifié. Stériliser tous les déchets dangereux avant de les jeter. Se référer à la fiche de sécurité. Matériels nécessaires non fournis Fournitures et équipements standard de microbiologie: anses, milieu de culture MAST®, écouvillons, applicateurs, incubateurs, etc… , réactifs sérologiques et biochimiques et additifs tels que du sang. Procédure 1. Préparer une suspension dans de l’eau distillée ou une solution saline physiologique d’une culture pure de 18 à 24 heure équivalente à 0,5 McFarland soit dans de l'eau désionisée ou une solution saline physiologique selon la méthode suivie. 2. A l’aide d’un écouvillon stérile, répendre la suspension uniformément à la surface de gélose pour antibiogramme (ex: Mueller Hinton Agar DM170D selon Clinique et Laboratory Standards Institute (CLSI). 3. A l’aide d’un aiguille stérile, d’une pince ou d’un distributeur MAST® DISCMASTER, placer chaque type de disque MASTDISCS® Combi AmpC and ESL Detection Set discs sur la gélose ensemencée en assurant un espace suffisant entre chaque disque pour obtenir des zones d’inhibition bien définies. 4. Incuber la boîte à 35 à 37C pendant 18 à 24 heures. 5. Mesurer et enregistrer le diamètre de toutes les zones d'inhibition, au millimètre près. Les disques ne présentant pas de zone d’inhibition ont alors un résultat de 6 mm. Interprétation des résultats Comparer les diamètres des zones d’inhibition selon les étapes suivantes : Etape 1 Comparer le diamètre d’inhibition du disque Céfpodoxime (A) par rapport aux diamètres d’inhibition des disques Céfpodoxime + inhibiteur (B, C et D). Si les zones d’inhibition sont toutes identiques à 2 mm près, la souche n’a ni activité ESL ni activité AmpC. Etape 2 Calculer les différences de diamètres B-A, D-C, D-B et C-A. Si les différences B-A et D-C sont supérieures ou égales à 5 mm et les différences de diamètres entre B et D et entre A et C sont inférieures ou égales à 4 mm alors la souche possède uniquement une activité ESßL Etape 3 Calculer les différences de diamètres D-B et C-A. Si chacune des différences D-B et C-A sont supérieures à 5 mm et les différences de diamètres entre les disques A et B et entre les disques C et D sont inférieures ou égales à 4 mm alors la souche possède uniquement une activité AmpC. Etape 4 Calculer la différence de diamètre D-C. Si la différence D-C est supérieure ou égale à 5 mm et la différence de diamètres entre les disques A et B est inférieure ou égale à 4 mm la souche a une activité combinée ESßL et AmpC. Un programme de calcul est aussi disponible sur le site www.mast-group.com Contrôle de qualité Vérifier tout signe de détérioration. Le contrôle de qualité doit être effectué avec au moins une souche de contrôle positive et une souche de contrôle négative. Les zones d’inhibition des combinaisons de disques avec ou sans inhibiteurs avec seulement le disque de cefalosporine par rapport à la souche de contrôle E. coli (e.g. ATCC 25922) ne doivent pas être supérieures de  2 mm. Toute différence supérieure implique un mauvais fonctionnement ou une détérioration. Ne pas utiliser le produit si les réactions avec les souches de contrôle sont incorrectes. La liste ci-dessous donne les résultats de souches de contrôle courantes. Souche de contrôle Résultat Escherichia coli NCTC 13351 ESL Positive Escherichia coli NCTC 13352 ESL Positive Escherichia coli NCTC 13353 ESL Positive Enterobacter cloacae NCTC 13406 AmpC Positive Escherichia coli ATCC 25922 Négative Limites Pour éviter le risque de mauvais resultants, ne jamais tester les cartouches de différents lots ensemble.Les lots ne doivent jamais être mélangés. Les microorganismes ayant un profil de résistance total (par exemple l’absence de zone d’inhibition autour de tous les disques) peuvent être producteur d’enzymes MßL ou KPC carbapénèmase pouvant masquer l’expression concommittante de ßLSE ou d’AmpC. Bibliographie Bibliographie disponible sur demande. IFU179 FR 06/20 V12 MAST est une marque déposée ATCC est une marque de American Type Culture Collection, Manassas, Virginie, USA *Formule ajustable pour une performance optimale uploads/Management/ ifu179-fr.pdf