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Rédigé par : Vérifié par : Validé par : Nom JOFACK BERTHOL MBEP Christian Dr ATEBA Ghislaine Date Signatures 1. OBJECTIFS ET PORTÉE a. Objectif Le dosage d’anticorps H-pylori permet de déterminer si une personne a été infectée par la bactérie et de permettre au médecin ou à l’infirmier(e) de faire une prise en charge efficace de celle-ci. b. Personnes concernées Personnel de l’unité des ELISA 2. Domaine d’application Unité des ELISA 3. RÉFÉRENCES Fiche d’utilisation du réactif de Helicobacter pylori 4. TACHES, AUTORISATIONS ET RESPONSABILITÉS Tâches Personnes autorisées Responsables Réalisation du test Personnels de l’unité des ELISA JOFACK BERTHOL Validation du test Personnels de l’unité des ELISA et le responsable technique MBEP Christian CERIMED ANALYSES BIOMEDICALES PROCÉDURE DE REALISATION DE H-PYLORI KIT BIOGENIX Pages : Applicable le : Code : P001 Version : 1 Sign val : 5. PRINCIPE Le dosage d’ Helicobacter pylori repose sur la méthode ELISA indirecte. Les antigènes spécifiques à H- pylori sont fixé au font des puits ; si les anticorps (IgM ou IgG) sont présent dans le sérum du patient, un complexe antigène-anticorps se forme. Après une période d’incubation les éléments non fixés sont retirer par lavage et l’ajout du conjugué est faite un second lavage est effectué puis ajout du substrat (TMB) avec formation d’un précité bleu et en fin une solution stop est ajouté pour l’arrêt de la réaction avec apparition d’une coloration jaune. L’intensité de la coloration est proportionnelle à la concentration des anticorps présent dans le sérum. 6. PROTOCOL DE REALISATION DU TEST PREPARATION DE LA SOLUTION DE LAVAGE Multiplier la concentration du Wash buffer avec le volume total du flacon pour avoir le volume total d’eau distillée à utiliser NB : laisser les réactifs à température ambiante pendant 30min au minimum, utiliser un nouveau embout pour chaque spécimen et à chaque étape. MODE OPERATOIRE - Diluer l’échantillon, le CN, le CP et le calibreur au 1/40 (5ul de chaque spécimen et 200ul de diluant) - Ajouter 100ul des solutions diluées dans les puits sauf celui du blanc - Incuber 30min à température ambiante - Laver 03 fois avec la solution de lavage (régler le combis Wash à 350de solution par puits) - Ajouter 100ul du Conjugué dans les puits et incuber 30min à température ambiante - Laver 03 fois avec de solution de lavage - Ajouter 100ul du Substrat 15min à température ambiante à l’abri de la lumière - Ajouter 100ul du Stop - Lire à 450nm de densité optique pendant les 10min qui suivent l’ajout du stop Si les puits sont doublés ou triplé toujours faire la moyenne des DO pour avoir la DO finale Interprétation des résultats Cut-off (CO) ¿moyenne calibreur × F - Si DOP CO <1 → NEGATIVE - Si DOP CO =0,9−1,1→ refaire le test en doublant les puits du patient et si même résultat est observé, - considéré POSITVE - Si DOP CO >1 → POSITIVE CERIMED ANALYSES BIOMEDICALES PROCÉDURE DE REALISATION DE H-PYLORI KIT BIOGENIX Pages : Applicable le : Code : P001 Version : 1 Sign val : 7. MATERIELS UTILISES Micropipette Plaque pour les puits Puits pour le test Réactif Gants Embouts Chronomètre Fiche de paillasse Combi Wash Huma Reader Eau distillée - CERIMED ANALYSES BIOMEDICALES PROCÉDURE DE REALISATION DE H-PYLORIRO KIT BIOGENIX Pages : Applicable le : Code : P001 Version : 1 Sign val : CERIMED ANALYSES BIOMEDICALES PROCÉDURE DE REALISATION DE H-PYLORI KIT BIOGENIX Pages : Applicable le : Code : P001 Version : 1 ATTESTATION DE LECTURE Je reconnais avoir lu et compris la Procédure de Rédaction des Procédures Ref : CERIMED SOP 001, version 1 11 uploads/Management/ pos-h-pylori-m-et-g-v.pdf