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Rédigé par : Vérifié par : Validé par : Nom JOFACK BERTHOL MBEP Christian Dr ATEBA Ghislaine Date Signatures 1. OBJECTIFS ET PORTÉE a. Objectif La réalisation du test de l’anticorps HCV permet de déterminer si le système immunitaire d’un patient développe les anticorps spécifiques aux antigènes du virus de l’hépatite C b. Personnes concernées Personnel de l’unité des ELISA 2. Domaine d’application Unité des ELISA 3. RÉFÉRENCES Fiche d’utilisation du réactif Ac anti-HCV (HUMAN) 4. TACHES, AUTORISATIONS ET RESPONSABILITÉS Tâches Personnes autorisées Responsables Réalisation du test Personnels de l’unité des ELISA JOFACK BERTHOL Validation du test Personnels de l’unité des ELISA et le responsable technique MBEP Christian CERIMED ANALYSES BIOMEDICALES PROCÉDURE DE REALISATION DE L’Ac HCV Pages : Applicable le : Code : P001 Version : 1 Sign val : 5. PRINCIPE Le principe du dosage de l’anticorps HCV repose sur la réaction entre l’antigène du HCV fixé au font des puits et l’anticorps spécifique à celui-ci s’il est présent dans le sérum du patient après une période d’incubation les éléments non fixés sont retirer par lavage et l’ajout du conjugué est faite un second lavage est effectué puis ajout du substrat (TMB) et en fin une solution stop est ajouté pour l’arrêt de la réaction avec formation d’une coloration jaune. L’intensité de la coloration est proportionnelle à la concentration des anticorps présent dans le sérum. 6. PROTOCOL DE REALISATION DU TEST  PREPARATION DE LA SOLUTION DE LAVAGE Elle se fait en diluant la solution Wash buffer avec de l’eau distillée fraichement préparée : 1+19 Multiplier la concentration du Wash buffer avec le volume total du flacon pour avoir le volume total d’eau distillée à utiliser pour un flacon de Wash. NB : Ramener les réactifs à température ambiante au moins 30min avant utilisation MODE OPERATOIRE - Distribuer 100ul du CN, CP, et l’échantillon dans les puits recouvrir d’un feuillet adhésif et incuber 60 min à 37 ͦ c ; - Laver 08 fois avec la solution de lavage (régler le combis Wash à 350ul de solution par puits) ; - Dilué le conjugué au 1+20 distribuer 100ul dans les puits recouvrir d’un feuillet adhésif et incuber 30 min à 37 ͦ c ; - Laver 08 fois avec la solution de lavage ; - Mélanger à parts égale substrat A et B dans un tube stérile, ajouter 100ul du mélange dans tous les puits et recouvrir d’un feuillet adhésif incuber 15 min à 37 ͦ c à l’abri de la lumière ; - Ajouter 100ul du Stop ; - Lire à 450nm de densité optique dans les 15 min qui suivent l’ajout du stop. Si les puits sont doublés ou triplé toujours faire la moyenne des DO pour avoir la DO finale. Le teste est valable si DO blanc < 0,100 ; MCN ≤ 0,200 ; MCP ≥ 0.600, MCN-MCP ≥ 0.400 Interprétation des résultats qualitatifs Valeur seuil (VS) = MCN+0.100 Index seuil = DOéchantillon VS - Si Index seuil > 1.1 → NEGATIF pour anti-HBc (non-réactif) - Si Index seuil < 0.9 → POSITIF pour anti-HBc CERIMED ANALYSES BIOMEDICALES PROCÉDURE DE REALISATION DE L’Ac HCV Pages : Applicable le : Code : P001 Version : 1 Sign val : 7. MATERIELS UTILISES Micropipette Plaque pour les puits Puits pour le test Réactif Gants Embouts Chronomètre Fiche de paillasse Combi Wash Huma Reader  CERIMED ANALYSES BIOMEDICALES PROCÉDURE DE REALISATION DE L’Ac HBc Pages : Applicable le : Code : P001 Version : 1 Sign val : CERIMED ANALYSES BIOMEDICALES PROCÉDURE DE REALISATION DE L’Ac HCV Pages : Applicable le : Code : P001 Version : 1 ATTESTATION DE LECTURE Je reconnais avoir lu et compris la Procédure de Rédaction des Procédures Ref : CERIMED SOP 001, version 1 11 uploads/Management/ pos-hcv.pdf