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Création du document : 02 Mars 2022 Nom Fonction Date et Signature Auteur(s) FO

Création du document : 02 Mars 2022 Nom Fonction Date et Signature Auteur(s) FOLLY Yao Anani Surveillant du laboratoire Vérificateur(s) Personne validant le document Evolution du document Versio n Date d’application Modification faite par Modifications opérées par rapport à version précédente 1 HÔPITAL STE JOSEPHINE BAKHITA 13 B.P. 119 Agoé-Kové Route de Mission Tové Tel : 00228-70-47-06-62 PROCEDURE DU DOSAGE DE L’ALANINE AMINOTRANSFERASE (ALAT) Code : PDALAT-HSJB-01 Version :01 Nombre de pages : Date d’application : Table des matières 1- Objectifs et portée.......................................................................................................................3 2- Abréviations et définitions..........................................................................................................3 3- Tâches, autorisations et responsabilités......................................................................................3 4- Principe......................................................................................................................................3 5- Sécurité et environnement..........................................................................................................3 6- Échantillon :...............................................................................................................................4 7- Équipements et fournitures.........................................................................................................4 8- Réactifs et produits chimiques....................................................................................................4 9- Contrôle de la qualité..................................................................................................................4 10- Mode opératoire......................................................................................................................4 11- Valeurs de référence...............................................................................................................5 12- Interférences...........................................................................................................................5 13- Valeurs critiques.....................................................................................................................6 14- Formulaires connexes.............................................................................................................6 15- Références..............................................................................................................................6 16- Pièces jointes..........................................................................................................................6 2 HÔPITAL STE JOSEPHINE BAKHITA 13 B.P. 119 Agoé-Kové Route de Mission Tové Tel : 00228-70-47-06-62 PROCEDURE DU DOSAGE DE L’ALANINE AMINOTRANSFERASE (ALAT) Code : PDALAT-HSJB-01 Version :01 Nombre de pages : Date d’application : 1- Objectifs et portée Cette procédure vise à décrire les différentes étapes du dosage de l’Alanine Aminotransferase (ALAT) dans le sang. Elle permet de mettre en évidence certaines maladies du foie 2- Abréviations et définitions CIQ : Contrôle Interne de Qualité SL : Surveillant du laboratoire RQ : Responsable Qualité ALAT : Alanine Aminotransferase LDH : Lactate Heshydrogénase IFCC : Fédération internationale de la chimie clinique 3- Tâches, autorisations et responsabilités Tâche Autorisé Responsable Démarrage du spectrophotomètre et maintenance quotidienne RQ, SL SL Mesure à blanc RQ, SL SL Préparation des réactifs RQ, SL SL Préparation des sérums de contrôle RQ, SL SL Passage des contrôles et validation des contrôles RQ, SL SL Passage des échantillons RQ, SL SL Validation analytique RQ, SL SL 4- Principe Méthode développé IFCC selon le schéma réactionnel suivant : La diminution de l’absorbance due à la conversion du NADPH en NAD+ et proportionnelle à l’activité de l’ALAT dans le spécimen, est mesurée à 340 nm. 5- Sécurité et environnement - Utiliser les équipements de protection (Gant, blouse, lunettes) - Rincer abondamment à l’eau en cas de contact avec la peau ou les yeux. - Respect la procédure de tri et de gestion des déchets 3 HÔPITAL STE JOSEPHINE BAKHITA 13 B.P. 119 Agoé-Kové Route de Mission Tové Tel : 00228-70-47-06-62 PROCEDURE DU DOSAGE DE L’ALANINE AMINOTRANSFERASE (ALAT) Code : PDALAT-HSJB-01 Version :01 Nombre de pages : Date d’application : Par mesure de sécurité, tous échantillon doit être traité comme potentiellement infectieux 6- Échantillon : Matériel Quantité minimale Stabilité Sérum 100 µl 7 jours 2 et 8° C 7- Équipements et fournitures Consommable Embouts de pipette, 10-100 µl Embouts de pipette, 100-1000 µl Tube à hémolyse Matériel et équipement : Spectrophotomètre Micropipette 10-100 µl Micropipette 100-1000 µl 8- Réactifs et produits chimiques Désignation Réactif Conditions de stockage Lieu de stockage Flacon R1 Réactif de travail 2 à 8 ° C Réfrigérateur - Préparation de la solution de travail : Ajouter au flacon R1, la quantité d’eau déminéralisée indiquée sur l’étiquette. Mélanger doucement jusqu’à dissolution complète (2 minutes). - Stabilité et conservation : Après reconstitution, la solution de travail est stable 60 jours l’absence de contamination de 2 à 8 °C. 9- Contrôle de la qualité Faire au moins un contrôle de qualité (Sérum de contrôle normal, sérum de control pathologique) dans chaque série ou au moins par 24 heures. Procédure de contrôle qualité 10- Mode opératoire o Enregistrement et étiquetage : Les échantillons sont enregistrés après avoir vérifié leurs conformités. o Centrifugation et décantation : Centrifuger à 4000 tours pendant 10 minutes puis décanter le sérum. Ne pas utiliser le plasma hépariné ou du sérum hémolysé. 4 HÔPITAL STE JOSEPHINE BAKHITA 13 B.P. 119 Agoé-Kové Route de Mission Tové Tel : 00228-70-47-06-62 PROCEDURE DU DOSAGE DE L’ALANINE AMINOTRANSFERASE (ALAT) Code : PDALAT-HSJB-01 Version :01 Nombre de pages : Date d’application : o Préparation de la liste de travail : Faire la liste de travail o Ramener les réactifs à la température du Laboratoire et préparer les réactifs si nécessaire o Démarrage du spectrophotomètre et maintenance quotidienne : rinçage de la cuve avec l’eau distillée. Vérifier l’état de la cuve de lecture en faisant une mesure à blanc. Le blanc consiste mesurer la densité optique de l’eau distillée. o Dosage des échantillons : Le dosage des échantillons est fait comme l’indique le tableau ci-dessous Blanc Etalon Dosage Solution de travail 1ml 1ml 1ml Eau déminéralisée 100 µl Etalon 100 µl Spécimen 100 µl Mélanger, après 1 minute, enregistrer l’absorbance initiale à 340 nm puis toutes les minutes pendant 3 minutes. Il est impératif de valider les résultats des sérums de contrôle normal et pathologique avant d’analyser chaque série d’échantillon. o Calcul Résultat : (Variation de l’absorbance/min) x1746 o Validation technique : Elle consiste à vérifier le bon déroulement des différentes phases de réalisation des analyses et surtout de la validité des CIQ. o Intervalle de mesure : 7 – 350 UI/l, diluer au 1/5 avec du sérum physiologique si la valeur est supérieur à 350 UI/l. 11- Valeurs de référence Femme : ≤ 32 UI/I Homme : ≤ 40 UI/I 12- Interférences Hémoglobine : Pas d’interférence jusqu’à 0,48 g/dl Hémolyse : Interférence positive en raison de l’ALAT contenu dans les érythrocytes Bilirubine : Pas d’inférence jusqu’à 20 mg/l (342 µmol/l) Turbidité : Pas d’interférence jusqu’à 6,16 g/l (7 mmol/l) 5 HÔPITAL STE JOSEPHINE BAKHITA 13 B.P. 119 Agoé-Kové Route de Mission Tové Tel : 00228-70-47-06-62 PROCEDURE DU DOSAGE DE L’ALANINE AMINOTRANSFERASE (ALAT) Code : PDALAT-HSJB-01 Version :01 Nombre de pages : Date d’application : La LDH contenue dans le réactif permet pendant la phase de préincubation, de réduire la pyruvate endogène qui sinon produirait une interférence positive. Des taux élevés d’ALAT, peuvent conduire à une déplétion en NADH pendant la phase de préincubation, conduisant à des résultats erronés par défaut. Dans le cas de spécimens lipidiques ou ictériques, l’augmentation de l’absorbance du mélange réactionnel peu masquer ce phénomène. Il est recommandé de contrôler ces spécimens en diluant au 1/5 dans une solution du NaCl 9 g/l. 13- Valeurs critiques Sans objet 14- Formulaires connexes - Fiche de paillasse - Fiche de gestion des CIQ : 15- Références - Normes ISO 15189 - Fiche technique du réactif du dosage de l’acide urique BIOLABO Ref : 80027, 80127. 16- Pièces jointes Fiche technique de la notice de réactif en cours d’utilisation 6 HÔPITAL STE JOSEPHINE BAKHITA 13 B.P. 119 Agoé-Kové Route de Mission Tové Tel : 00228-70-47-06-62 PROCEDURE DU DOSAGE DE L’ALANINE AMINOTRANSFERASE (ALAT) Code : PDALAT-HSJB-01 Version :01 Nombre de pages : Date d’application : uploads/Management/ procedure-du-dosage-alat.pdf