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LABORATOIRE D'ANALYSES DE BIOLOGIE MEDICALE Professeur A.TARZAALI Alger, le 10

LABORATOIRE D'ANALYSES DE BIOLOGIE MEDICALE Professeur A.TARZAALI Alger, le 10 mars 2022 INFORMATION AUX LABORATOIRES Anticorps anti-nucléaires (ANA) revue de notre démarche décisionnelle, introduction du BioPlex 2200 et changement de prix Chères Consœurs, chers confrères, Nous vous informons du changement de notre démarche décisionnelle concernant la recherche des anticorps anti-nucléaires (ANA) et de l’introduction du dépistage et du TITRAGE du ds-DNA et des anticorps anti-antigènes nucléaires solubles (ENA) par immunofluorimétrie en flux (technologie Luminex ®) sur BioPlex 2200 de la société Bio-Rad. L’exploration immunologique d’une affection systémique évoquant une maladie auto-immune non spécifique d’organe débute par une recherche des anticorps anti-nucléaires (ANA). Le lupus érythémateux systémique, la polyarthrite rhumatoïde, les sclérodermies, le syndrome de Sjögren, la dermatomyosite, les polymyosites, la connectivite mixte de Sharp sont des exemples de maladies auto-immunes non spécifiques d’organes dites également maladies systémiques ou connectivites. Toute recherche d’ANA commence par un dépistage en immunofluorescence indirecte (IFI) sur cellules Hep-2. Parce que plus sensible que n’importe quelle autre technique, l’IFI demeure le gold standard pour le dépistage des anticorps anti-nucléaires. Seule l’IFI permet de rendre un résultat positif d’ANA avec un titre et un aspect de fluorescence du noyau. Quand la recherche des ANA est positive, il faut identifier les cibles antigéniques en dosant à minima les anticorps anti-ADN natif et les anticorps anti-antigènes nucléaires solubles (ENA). Dans le cadre d’une prescription globale, le dépistage d’autres cibles antigéniques des ANA peut être réalisé à la demande du prescripteur. L’ensemble des résultats issus de cette cascade diagnostique, la positivité des ANA, le titre obtenu, la cohérence entre l’aspect de fluorescence et les anticorps mis en évidence s’interprète en fonction du contexte clinique du patient et souligne l’importance du dialogue clinico-biologique et donc de la FICHE DE RENSEIGNEMENTS. Pour une meilleure compréhension, nous vous avons détaillé ci-après les grandes lignes de notre démarche diagnostique.  1ere étape : le dépistage des ANA par IFI sur cellules HEp-2 (Gold standard) Pour cette première partie, la lecture des lames se fait sur un microscope à fluorescence (IFA) entièrement automatisé, le NOVA View® de la société Inova Diagnostics (Werfen). Le NOVA View® est un système d’automatisation de l’interprétation de l’immunofluorescence indirecte, il permet la reconnaissance des différents aspects avec une mesure de l’intensité en unités de fluorescence dans le but d’augmenter la reproductibilité de ces tests. Ce système permet l’enregistrement des images de l’IFI, leur mémorisation et leur archivage pour d’éventuelles comparaisons. Une relecture peut donc être effectuée à tout moment afin de confirmer ou modifier l’aspect de la fluorescence de certains échantillons. Les aspects de la fluorescence : * Fluorescence nucléaire : homogène, membranaire, mouchetée (gros grains, grains fins), centromères, nucléolaire, dots nucléaires (dots multiples, 4-6 dots), fuseau mitotique, mixte. * Fluorescence cytoplasmique : grains fins des anti-synthétases, mitochondries ribosomes, golgi …  2ème étape : l’identification des antigènes cibles Pour cette seconde partie, l’identification se fait sur le système BioPlex 2200 de la société Bio-Rad qui est une plateforme de tests multiplex entièrement automatisés. La technologie multiplex permet de détecter simultanément un panel de 15 cibles antigéniques : ds DNA*, chromatine ou nucléosome, protéines ribosomale P, SSA, SSA Ro60, SSA Ro 52, SSB, Sm, Sm/RNP,U1-RNP, RNP A, RNP 68, Scl 70, Jo1,Centromére B. *Anticorps anti-ds DNA : marqueurs du lupus érythémateux disséminé (LED) de très bonne spécificité lorsque les taux sont élevés. La technique immunofluorimétrique en flux multiplex utilisée par le BioPlex 2200 quantifie cet auto-anticorps et permet d'apprécier et de suivre l'évolution de la maladie. Pour les autres cibles antigéniques, anticorps anti-antigènes nucléaires solubles ( ENA ), les résultats sont semi-quantitatif. Ces dosages sont couplés au MDSS (Medical Decision Support Software) qui est un logiciel d’aide à l’interprétation basé sur plus de 15'000 résultats venant de différents groupes de plus de 1'400 cas cliniques. *Contrôle qualité : Chaque panel réalisé sur le système BioPlex 2200 contient en plus des billes de la réaction, trois billes de contrôle interne (SVB / ISB /RBB) sécurisant le résultat obtenu.  Cas particuliers (cas rares, environ 10% des IFI positifs ) :  Présence d’aspect cytoplasmique : type mitochondrie, grains cytoplasmique anti- synthétase…  Si le contexte clinique*** est évocateur d'un syndrome des anti-synthétases ou syndrome de chevauchement (hépatopathies auto-immunes et connectivites par exemple). /!\ *** importance +++ de la fiche de renseignements /!\ D’autres panels (par immuno-dot) seront utilisés pour l’identification des anticorps anti- mitochondries, anti-Sp100, anti-EJ, anti-PL7, anti-PL12 : • BlueDriver Quantrix ANA 24 Screen IgG (D-TEK) : ADNnatif, Nucléosome, Histone, Sm, Sm/RNP, U1RNP, SSA Ro60, SSA Ro52, SSB, Jo1 , PL7, PL12, SRP, Protéines ribosomale P, PCNA, Mi2 , Ku, Scl 70, Pm/Scl 100, Centromère B /A, Sp100, gp 210, anti-mitochondrie type 2 native et recombinante. • Myositis (EUROIMMUN) : Mi2, Ku, Pm/Scl 100, Pm/Scl 75 , Jo1, SRP, PL12, PL7, EJ,OJ, Ro 25. • Auto-immune Inflammatory Myopathies (EUROIMMUN) : Mi2 alpha et béta, TIF1g, MDA5, NXP 2, SAE, Ku, Pm/Scl 100, Pm/Scl 75 , Jo1, SRP, PL12, PL7, EJ,OJ, Ro 25. ☞ Merci de prendre en considération les conditions pré-analytiques suivantes :  Echantillon : 1 mL de SERUM recueilli sur tube de prélèvement standard ou contenant un gel séparateur.  Conservation et Transport : la conservation et le transport de vos échantillons s’effectuent en milieu réfrigéré (+2°C à +8°C)  Stabilité de l’échantillon : 7 jours entre 2°C et 8°C, au-delà le prélèvement doit être congelé à -20°C (± 5 °C).  Technique : Immunofluorimétrie en flux multiplex  Unité : dsDNA : UI/ml standardisé OMS ; ENA : Index Une positivité suggère l’existence d’un terrain auto-immun : connectivite ou autre MAI spécifique d’organes (cirrhose biliaire primitive (CBP), HAI). Mais ils peuvent être retrouvés au cours d’une pathologie inflammatoire, infectieuse (virale), tumorale (leucémie lymphoïde chronique, lymphome). Ou être induits par des médicaments (bêta-bloquants, anti-TNF alpha…). Dans certains cas, ils peuvent être détectés chez le sujet sain (10 à 15%) et chez les femmes après 60 ans.  Valeurs attendues : IFI : Technique : WERFEN INOVA - immunofluorescence indirecte (IFI) sur cellules Hep2 Les résultats sont rendus en "inverse de dilution" Titre Interprétation < 80 Négatif 80 Seuil de positivité, titre non significatif 160 - 320 Titre peu élevé > 320 Titre élevé DsDNA : Titre Interprétation < 5 UI/mL (OMS) Négatif 5 - 9 UI/mL (OMS) Equivoque > 9 UI/mL (OMS) Positif ENA : Index Interprétation < 0,9 Négatif 0,9 - 1,2 Equivoque > 1,2 Positif  Jours de traitement : du dimanche au jeudi  Délai de résultats : 4 jours ouvrés (sont exclus week-end et jours fériés)  Prix :  1ere étape IFI, pas de fluorescence (négatif à l’IFI) : 1’400,00 DA  2ème étape, après une fluorescence à l’IFI, l’identification des cibles antigéniques sur BioPlex 2200 se lance automatiquement : rajouter 2'500,00 DA soit un total de 3'900,00 DA pour les deux étapes. Votre laboratoire sera contacté par notre secrétariat afin d’obtenir votre accord pour le lancement des cas particuliers (cas rares, environ 10% des IFI positifs) suivants :  2ème étape bis, après une fluorescence positive à l’IFI, l’identification des cibles antigéniques se fera par BlueDriver Quantrix ANA 24 Screen IgG (D-TEK) : rajouter 4'200,00 DA soit un total de 5'600,00 DA pour les deux étapes.  2ème étape ter, après une fluorescence positive à l’IFI, l’identification des cibles antigéniques se fera par Myositis (EUROIMMUN) ou Auto-immune Inflammatory Myopathies (EUROIMMUN) : rajouter 4'700,00 DA soit un total de 6'100,00 DA pour les deux étapes. Dr.Y.BEROUAL uploads/Sante/ anticorps-anti-nucleaires.pdf