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4 Université Oran 1, Faculté de Médecine, Département de Médecine. Service d’Hi

4 Université Oran 1, Faculté de Médecine, Département de Médecine. Service d’Histologie-Embryologie. Dr: N. Belarbi Amar ; Hamadouche. I- Les Méthodes d’étude de La Composition Biochimique des Cellules: L’étude de La Composition Biochimique des Cellules Passe Par Deux étapes qui Sont L’éclatement de La Cellule, Afin de Récupérer des Organites et Puis La Séparation Des Organites Pour étudier Un groupe des Organites. 1- L’éclatement de La Cellule:  Les Méthodes de Fractionnement Subcellulaire consistent à séparer Les Différents composants cellulaires par Destruction De La membrane Plasmique, puis par Désorganisation de La Cellule (L’Homogénat). Il Existe Plusieurs Techniques qui Permet d’éclater La Cellule: Physiques (Ultrasons ou Hautes pressions), Chimiques: (Choc Osmotique, Action de Détergents ou d’enzymes) Ou Mécaniques: (Pistons et Cylindres Comme Le Tube de Potter).  L’Homogénat est Conservé à 0° C pour La Préservation Maximale des structures et Les Fonctions des Différents constituants cellulaires et Des Enzymes.  Quel Est Le Contenu de l’Homogénat ? - Les Noyaux, Les Mitochondries, Les Lysosomes et Les Peroxysomes. - Des Fragments provenant des Ruptures Membranaires (La Membrane Plasmique, Le Réticulum Endoplasmique, L’Appareil de Golgi) Se Refermant Immédiatement pour Donner de Petites Vésicules Fermées Appelées «Les Microsomes». 2- La Séparation Des Organites: a- La Séparation Des Organites Par Ultracentrifugation Différentielle: - C’est Une Série de Centrifugations de plus en plus Longues Et Donnant Des Champs de Gravité de plus en plus élevés pour Fractionner L’Extrait Initial En Une Série De Culots Et Surnageant. - Une Technique Préparatoire Rapide, Simple et permettant de Manipuler Des Grandes Quantités de Matériel Sans Donner cependant de Fractions parfaitement pures. b- La Séparation Des Organites Par Ultracentrifugation:  La Séparation Des Organites Par Centrifugation Sur Gradient de Densité Préformé: Le Protocole: - Un Dépôt d’une Fine Couche de l’Homogénat à La Surface Du Gradient contenu dans le Tube à Centrifuger, Une Solution de Saccharose ou de glycérol dont La Concentration varie de Façon Régulière et décroissante Du bas vers Le Haut du Tube, variation Linéaire et continue ou Bien Discontinue et par paliers. - La Centrifugation à vitesse élevée Pendant quelques Heures. - La Migration Des particules dans Le Gradient jusqu’à une position d’équilibre qui correspond à sa densité - L’Obtention d’Anneaux le long du Tube (centrifugation zonale) qui peuvent être Récupérés séparément par Aspiration. La Technique: - Permettant D’obtenir une séparation des constituants cellulaires en une seule étape. - D’un grand degré de pureté. - Ne Permettant de Manipuler que de Petits volumes de Matériel Biologique.  La Séparation Des Organites Par Centrifugation Sur Gradient de Densité Auto Formé: - La Dilution de l’Homogénat dans une solution concentrée de Chlorure de Césium (CsCl). - La Centrifugation de cette préparation à plus de 200 000g pendant plusieurs Heures. - Cette Technique permet de Séparer Les Molécules Indépendamment De Leur Taille et Avec des Différences de Densité Très Faibles. Exemple: Faire La Différence Entre La Molécule D’ADN Standard et D’ADN Lourd (Artificiel). Les Travaux Dirigés Du Module De Cytologie (2018-2019). 4 Université Oran 1, Faculté de Médecine, Département de Médecine. Service d’Histologie-Embryologie. Dr: N. Belarbi Amar ; Hamadouche. II-La Culture Cellulaire: 1- Les Conditions à Respecter: - La Température Régulée La Plus Proche Possible de La Température Naturelle. - Un pH Neutre Maintenu grâce à l’emploi de solutions salines Tamponnées et une Atmosphère Enrichie en CO2. - La Présence de Nombreux éléments Nutritifs: Glucose, Sels Minéraux, Acides Aminés,... . - La Présence De Facteurs de Croissance: Vitamines et utilisation de Sérum de veau. - Le Respect d’une Asepsie stricte: L’Ajout éventuel d’Antibiotiques Aux Milieux de culture. - Le Support Adapté En Verre ou en plastique parfois Recouvert de composants de La Matrice Extracellulaire Comme Le Collagène. 2- L’Intérêts des Cultures Cellulaires: - L’Étude de l’influence de différents Facteurs sur les cellules: Les substrats, La Température, Des substances Chimiques, Des Médicaments,... . - La Suivi de précurseurs du Métabolisme Marqués pour étudier leur devenir dans la cellule (isotope). 3- Les Différents Types Cellulaires Utilisés:  Les Cellules issues de Tissus Normaux: - L’Obtention des cellules à partir d’organes ou de Tissus d’organismes Adultes ou Embryonnaires. - Le Nombre de passage : Limité Sauf pour Les Cellules Embryonnaires (2 ou 3) pour Les cellules épithéliales, un peu plus pour les Fibroblastes (Les Cellules du Tissu conjonctif). - Les Cellules gardant les caractéristiques des cellules du Tissu d’Origine.  Les Cellules de Lignées continues: Les Propriétés: La Croissance Rapide, La perte de L’Inhibition de Contact, La possibilité d’un Nombre Illimité de Passage.  Les Cellules Hybrides: Ils Sont Obtenues par Fusion Chimique ou Physique et possédant, dans un premier Temps, Deux Noyaux séparés Appelées Hétérocaryons, Donnant Après Mitose Des cellules Hybrides Dans Laquelle Tous les Chromosomes se Rassemblent pour Former un Unique Noyau. Exemple: Le jumelage de La Bactérie et de L’ADN Hybride va produire L’insuline. 4 Université Oran 1, Faculté de Médecine, Département de Médecine. Service d’Histologie-Embryologie. Dr: N. Belarbi Amar ; Hamadouche. III- La Synthèse Des Protéines: La Synthèse des protéines est Le processus par Lequel une cellule Assemble une Chaîne protéique en combinant des Acides Aminés isolés présents dans son cytoplasme, guidé par l’information contenue dans L’ADN. Elle se Déroule En Deux étapes: La Transcription Et La Traduction. I- La Transcription:  La Traduction Des Séquences de L’ADN en protéines, passe par une étape intermédiaire qui Transforme L’information portée par L’ADN en une copie sous Forme D’ARN Messager (ARNm). Cette étape s’appelle La Transcription.  La Transcription Nécessite L’intervention d’enzymes qui catalysent La synthèse des ARN, Appelées ARN polymérases. Trois types d’ARN polymérases (I, II, et III) interviennent pour La Transcription de Trois Types de gènes différents codant pour les ARNm (d’ARN polymérases II), Les ARNt et Les ARNr. 1) La Transcription Proprement Dit: La Transcription débute par L’ouverture de La Double Hélice d’ADN. L’ARN est synthétisé selon La séquence du Brin Matrice (Brin Non Codant 3’ 5’) pour Donner une copie Fidèle du Brin Non Matrice. L’ARN Formé débute dans Le sens 5’ 3’. Durant la Transcription, Le Brin Matrice est parcouru par L’ARN polymérase dans Le sens 3’ 5’. Les Nucléotides (Adénine, Uracile, Guanine et Cytosine) Sont Ajoutés dans L’ordre indiqué par Le Brin Matrice et S’attachent entre eux par des liaisons phosphodiester. Les signaux de Fin de synthèse des ARNm Ne sont pas clairement établis. En Fin de synthèse ARNm est libéré Dans Le Nucléoplasme, Et commence Sa Maturation. 2) La Maturation De L’ARNm:  Pour Devenir Fonctionnel L’ARNm Nécessite une Maturation. Celle ci correspond Aux étapes de: - La Méthylation pour établir Coiffe en 5’ Ainsi stabiliser La Molécule et lui permettre de sortir du noyau. - La polyadénylation de L’ARNm: Elle correspond à L’Addition d’une séquence poly A à L’extrémité 3’ de L’ARNm. La polyadénylation permet de stabiliser L’ARNm et de le protéger contre la dégradation prématurée. - L’épissage ou L’excision: L’excision des introns est une opération d’élimination des introns. Seuls les exons seront Traduits en polypeptide. L’épissage Fait intervenir des Facteurs protéiques qui Forment un complexe Appelé splicéosome. Il procède à L’excision des introns et à la ligation Bout à Bout des exons consécutifs. II- La Traduction:  La Traduction Est Le processus de synthèse des protéines par la cellule. Après Maturation, L’ARNm est Traduit en protéine par L’intermédiaire des ribosomes et de ARNt de Transfert. Ces Molécules vont lire les codons, Amener les Acides Aminés correspondants et Les Assembler en protéine.  La Reconnaissance des Codons: La séquence en Acides Aminés est synthétisée suivant L’information Codée sur L’ARNm. Chaque ARNt Fixe son Acide Aminé spécifique, et le porte vers L’ARNm.  La Traduction Proprement dite se déroule en Trois étapes: 1) L’étape D’Initiation: - Avant La Traduction Les Ribosomes sont libres dans le cytoplasme sous Forme de grande et de petite sous unités, séparées. L’initiation commence par la Fixation de la petite sous unité Ribosomale sur L’ARNm Au niveau du codon initiateur AUG, codant pour La Méthionine. Un ARNt portant L’Anticodon AUG, chargé d’une Méthionine, vient se Fixer ensuite sur L’ARNm. - L’initiation Nécessite de L’énergie (ATP) et des Facteurs d’initiation (IF). - L’ensemble ARNt,ARNm, Ribosome et IF, Constitue Le Complexe D’initiation. 2) L’étape D’élongation: Durant L’élongation, La grande sous unité du Ribosome vient se joindre Au Complexe d’initiation. Dès Lors le Ribosome complet possède deux sites de Fixation pour les ARNt, un site pour L’ARNt d’initiation Appelé site P et un site pour L’ARNt portant le deuxième Acide Aminé site A et Ainsi de suite on Aura Addition d’Acides Aminés à la chaîne polypeptidique. 3) L’étape de Terminaison: 4 Université Oran 1, Faculté de Médecine, Département de Médecine. Service d’Histologie-Embryologie. Dr: N. Belarbi Amar ; Hamadouche. La Traduction prend Fin Lorsque Le site A du Ribosome est occupé par un codon Stop. A la place des ARNt, Le site A est occupé par des Facteurs de Terminaison RF qui Libèrent Le polypeptide et dissocient le ribosome en Deux sous unités en présence de GTP. IV- La Système Endomembranaire: uploads/Sante/ les-tps-amp-les-tds-du-module-de-cytologie.pdf