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Corrige tp06 TECHNIQUES D ? ANALYSES BIOLOGIQUES Corrigé Année Examen de travaux Pratiques Nom Prénom Exercice n La méthode colorimétrique de Bradford Bradford M permet de déterminer la concentration en protéines totales d'une solution contenant des proté

TECHNIQUES D ? ANALYSES BIOLOGIQUES Corrigé Année Examen de travaux Pratiques Nom Prénom Exercice n La méthode colorimétrique de Bradford Bradford M permet de déterminer la concentration en protéines totales d'une solution contenant des protéines Cette méthode utilise le bleu de Coomassie le colorant et une protéine globulaire standard l'albumine de sérum bovin ou BSA Bovine Serum Albumin Cette droite étalon est obtenue de la manière suivante dans une série de tubes à essais on met di ?érents volumes d'une solution de BSA L au MAXIMUM complétés par une solution tampon on ajoute mL de colorant on mélange et après min à l'obscurité on mesure l'absorbance à nm a Sachant que l'on dispose d'une solution stock de BSA à mg mL calculez les volumes et éventuellement la dilution à e ?ectuer au préalable à prélever de la solution de BSA et de la solution tampon pour faire une gamme étalon et g de BSA Les valeurs d'absorbance à nm sont les suivantes Quantité de BSA g A b La détermination de la concentration de la solution de protéines à doser se fait EN PARALLÈLE de la manière suivante dans une autre série de tubes à essais on prélève des volumes di ?érents L au MAXIMUM de la solution de protéines à doser éventuellement diluée complétés par une solution tampon après avoir ajouté mL de colorant et mélangé on mesure l'absorbance à nm de ces solutions EN MÊME TEMPS que l'absorbance des solutions de la gamme étalon Les résultats sont les suivants Volume prélevé de solution à doser L Dilution préalable de la solution à doser A ? ? ? sérum Non diluée sérum A partir de la droite étalon et de ces valeurs calculez la concentration en protéines de la solution à doser en mg ml Réponse a complétez le tableau suivant De combien est diluée la BSA avant la préparation de la gamme d ? étalonnage Volume de BSA L à g l Volume de tampon L Quantité de BSA g Réactif bleu de Coomassie mL Réponse b sérum mg ml sérum mg ml dilution de la BSA ? Attention l'absorbance du tube SANS BSA n'est pas nulle A C'est parce que l'absorbance du colorant non complexé n'est pas nulle à nm Cette absorbance RESIDUELLE doit être retranchée aux valeurs obtenues avant de tracer la droite étalon Exercice n Quel est le pH d ? un mélange de ml d ? acétate de sodium et de ml d ? acide acétique mol l avant pH et après pH ajout de ml d ? HCl à mol l le pKa de l ? acide à c CRéponse pH pH Quelle conclusion tirez vous de la solution décrite ci-dessus Réponse très brève ? Solution tampon le pH a subi une variation de unités seulement Exercice n Le mode opératoire classique réalisé au laboratoire est une méthode de précipitation sélective par un hétéropolyacide A de concentration de mmol l PM en présence d ? un cation bivalent B à M Le tableau