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1 http://www.takween.com Techniques-Sommaire : http://www.takween.com/techniques/techniques-biochimie.html Electrophorèse : http://www.takween.com/techniques/05_Electrophorese.html Travaux dirigés (TD) : http://www.takween.com/techniques/15_TD.pdf Travaux dirigés (TP) : http://www.takween.com/techniques/14_TP.pdf Isoenzymes-mutations : http://www.takween.com/techniques/isoenzymes-mutations.pdf Isozymes. Principe de détection : http://www.takween.com/techniques/isoenzymes-detection.pdf Isozymes : loci, allèles : http://www.takween.com/techniques/isoenzymes-loci-alleles.pdf RFLP : http://www.takween.com/techniques/10_RFLP.pdf RAPD : http://www.takween.com/techniques/11_RAPD.pdf AFLP : http://www.takween.com/techniques/13_AFLP.pdf SSR (microsatellites) : http://www.takween.com/techniques/microsatellites-SSR-marqueurs.pdf TRAVAUX DIRIGES ELECTROPHORESE ET MARQUAGE DE LA DIVERSITE GENETIQUE DES PLANTES EXERCICE 1. Une population de jeunes plants issus d’un croisement entre le prunier (Prunus salicina) )روق ( et l’abricotier (Prunus armeniaca) شa été étudiée pour son polymorphisme enzymatique montré par le système ‘peroxydases cathodiques’ (POX). Pour cela, les feuilles prélevées de jeunes plants sont broyées séparément dans 60 µl d’un tampon d’extraction composé de 0,01 M Tris-HCl (pH 7,15), 3 mM DTE et 5% sucrose. Les extraits sont soumis à une électrophorèse sur gel d’amidon 11%. Le tampon du gel est constitué de 0,01 M d’Histidine (PM Histidine = 155,2). Le tampon d’électrodes contient 0,135 M Tris (préparé à partir d’une solution de Tris 0,5 M) et 0,043 M d’acide citrique (préparé à partir d’une solution d’acide citrique 0,1 M). Le pH des deux tampons est ajusté à 7,0 à l’aide d’une solution 1 M d’acide citrique. Après révélation, le Zymogramme des POX obtenu montre trois phénotypes électrophorétiques appelés arbitrairement A, B et C (voir figure). 2 - 1. Rappeler brièvement, le principe de l'analyse des isoenzymes par électrophorèse. 2. Quelle peut être la nature des isoenzymes codées par le gènes gouvernant les peroxydases cathodiques. Faire un inventaire des génotypes correspondant à tous les phénotypes. 3. Quel est l’intérêt du système enzymatique des ‘peroxydases cathodique’ dans cette étude. 4. Comparer brièvement les marqueurs isoenzymatiques et ceux basés sur la technique PCR comme la méthode RAPD. Le prunier et l’abricotier présentent respectivement les phénotypes B et C. Voir Réponses succinctes à la fin de ce Document uniquement après avoir terminé vos Exercices EXERCICE 2. Le palmier dattier (Phoenix dactylifera L.) est une monocotylédone pérenne adaptée aux climats arides. Au Maroc, on note des centaines de cultivars (variétés), distinguées essentiellement par la qualité des fruits (dattes) qu’ild produisent. Trois populations F1 de jeunes plants de palmier dattier, Phoenix dactylifera L., sont obtenues à partir de 3 lots de graines provenant des croisements dirigés suivants: Lot de graines Croisements Cultivar Mâle Nombre de plants F1 1 2 3 X ? Aguellid (AGL) Iklane (IKL) M-2 M-1 Y ? 128 164 60 3 L'analyse par électrophorèse du polymorphisme enzymatique des transaminases de type glutamate oxaloacétate transaminase (GOT) et des endopeptidases (ENP) a été réalisée à partir d'extraits enzymatiques de feuilles. Elle a permis d'obtenir 5 et 6 phénotypes électrophorétiques respectifs pour les deux enzymes. Deux loci GOT-2 et ENP sont ainsi mis en évidence. Les différents phénotypes obtenus (A-F) sont résumés dans les diagrammes ci contre. Les cultivars AGL et IKL (parents femelles) présentent, respectivement, des phénotypes E et D pour ENP et D et A pour GOT. Les parents mâles M-1 et M-2 ont comme phénotypes respectifs A et B pour ENP et E et A pour GOT. Les fréquences des phénotypes isoenzymatiques au niveau des trois populations de jeunes plants sont données dans le tableau ci-dessous. Phénotypes isoenzymatiques Populations F1 1 2 3 GOT A B C D E 0,45 - 0,24 0,02 0,29 1,00 - - - - 0,29 0,20 0,19 0,32 - ENP A B C D E F - 0,45 - 0,55 - - 0,25 - 0,20 0,21 0,34 - 0,25 - - 0,28 0,26 0,21 1. Quelle peut être la nature des isoenzymes codées au niveau des loci GOT-2 et ENP. 2. Sur la base des 2 loci, faire un inventaire des génotypes dans les 3 populations. 3. Sachant que les allèles mis en jeu sont transmis selon la loi de Mendel, quels peuvent être les génotypes du parent femelle X de la population 1 et du parent mâle Y de la population 3. Voir Réponses succinctes à la fin de ce Document uniquement après avoir terminé vos Exercices 4 REPONSES SUCCINCTES QUESTION 1. 1. Le principe de détection des isoenzymes est basé sur la révélation in situ sur gel des différentes formes d’une enzyme en apportants les substrats nécéssaires. Donner l’exemple d’une hydrolase, par exemple. 2. Nature monomérique ….. Phénotype A : génotype AB, Phénotype B : génotype AA, Phénotype C : génotype BB. 3. Détection précoce d’hybrides 4. Comparaison sur les étapes d’extraction, d’électrophorèse et de Révélation (voir cours) QUESTION 2 1. GOT-2 : nature dimère, ENP : nature nomomère 2. Population 1 (N= 128) Population 2 (N= 164) Population 3 (N= 60) GOT-2 AA AB BB 0,29 0,45 0,26 0,00 1,00 0,00 0,00 0,49 0,51 ENP AA AB BB AC BC CC 0,55 0,45 0,20 0,34 0,00 0,25 0,21 0,00 0,00 0,26 0,21 0,25 0,28 0,00 3. X ? Y ? GOT-2 AB BB ENP BC AB uploads/Geographie/ exercice-corrige-biochimie-02.pdf

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