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1ère STL Fiche technique n°26 LE MILIEU UREE-INDOLE 1. Intérêt Ce milieu permet

1ère STL Fiche technique n°26 LE MILIEU UREE-INDOLE 1. Intérêt Ce milieu permet de mettre en évidence les caractères suivants :  présence d’une uréase  présence d’une tryptophanase  présence d’une tryptophane désaminase (TDA) Ce milieu est utilisé pour l’identification des entérobactéries (bacille gram -, oxydase -). 2. Composition Milieu synthétique Composant Quantité (g/L) Rôle Urée 2 Lecture d’un caractère biochimique (substrat de l’uréase) L-tryptophane 0,3 Lecture d’un caractère biochimique (acide aminé, permet la recherche de l’indole et de la TDA) Chlorure de sodium 0,5 Source de sels minéraux Maintien de la pression osmotique Dihydrogénophosphate de potassium 0,1 Hydrogénophosphate de potassium 0,1 Rouge de phénol 0,0025 Indicateur de pH pH 7 3. Principe  recherche de l’uréase L’uréase dégrade l’urée selon la réaction suivante : Urée + H2O  2 NH4 + + CO3 2- Les ions CO3 2- vont entraîner une forte alcalinisation du milieu qui sera révélée par un virage de l’indicateur de pH (le rouge de phénol) à sa teinte basique (rouge).  recherche de la production d’indole (mise en évidence de la tryptophanase) La tryptophanase hydrolyse le tryptophane selon la réaction suivante : Tryptophane + H2O → indole + acide pyruvique + NH3 L’indole forme un complexe coloré en rouge en présence d’un réactif : le réactif de Kovacs.  recherche de la tryptophane désaminase La TDA dégrade le tryptophane selon la réaction suivante : Tryptophane + H2O → acide indole pyruvique + NH3 L’acide indole pyruvique forme un précipité marron foncé en présence d’un réactif : le chlorure de fer en solution acide. 4. Ensemencement  Ensemencer avec quelques gouttes de suspension bactérienne ou avec une colonie prélevée à l’anse sur un milieu solide.  Incubation 24 heures à 37°. 1ère STL Fiche technique n°26 5. Lecture Caractère recherché Observation Interprétation Conclusion Uréase (lecture après 24 heures d’incubation) Milieu rouge Alcalinisation du milieu due à la dégradation de l’urée La bactérie possède l’uréase Elle est dite uréase + Milieu orangé (inchangé) Pas d’alcalinisation du milieu La bactérie ne possède pas l’uréase Elle est dite uréase - Après avoir effectué la lecture, séparer le milieu urée indole en deux (prélever une partie du milieu et le transvaser dans un tube à hémolyse propre) puis réaliser les tests suivants : 1er tube : recherche de la production d’indole : Ajouter 3 gouttes du réactif de Kovacs et effectuer la lecture sans agiter le milieu Indole Apparition d’un anneau rouge Présence d’indole. Le tryptophane a donc été hydrolysé La bactérie a produit de l’indole Elle est dite indole + L’anneau reste orangé Absence d’indole La bactérie n’a pas produit d’indole Elle est dite indole - 2ème tube : recherche de la tryptophane désaminase (TDA) : Ajouter 3 gouttes du réactif (= chlorure de fer III en solution acide) et effectuer la lecture TDA Coloration marron foncé Présence d’acide indole pyruvique. Le tryptophane a été désaminé. La bactérie possède la tryptophane désaminase. Elle est dite TDA + Coloration inchangé Absence d’acide indole pyruvique La bactérie ne posssède pas la tryptophane désaminase. Elle est dite TDA - Milieu Urée-Indole 24h d’incubation Recherche de l'uréase Recherche de la TDA Recherche de la tryptophanase (production d’indole) Ajout de chlorure de fer III Ajout de réactif de Kovacs uploads/Geographie/ uree-indole1.pdf