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Ce document est la propriété de l’Anses et ne peut être reproduit ou communiqué en dehors de l’Agence sans son autorisation. Seule la version informatique consultable sur l’intranet fait foi. Page 1 sur 60 ANSES/PM2/A/01[version a] Document du SMQ Guide ANSES/PR3/7/01 version a code ennov : ANSES/PG/0069 Titre Guide de validation des méthodes d’analyses Objet Ce guide est destiné aux laboratoires de l’Anses dans le cadre des travaux sur les méthodes d’analyse quantitatives ou qualitatives qu’ils développent, adaptent ou optimisent dans l’exécution de leurs missions de laboratoires de référence nationaux ou de l’union européenne. Il est accompagné : 1) d’un glossaire des termes relatifs à la validation des méthodes ; 2) d’un modèle type pour la rédaction de méthodes d’analyses, accompagné d’un guide d’utilisation ; 3) d’un modèle de rapport de validation. Nom Fonction Date Signature Rédaction Groupe de travail « GT Val 2 » coordonné par Michel Laurentie Rédacteurs 15 octobre 2015 Vérification Pascale Parisot Directrice générale adjointe en charge des laboratoires Pilote du processus PR3 16 octobre 2015 Olivier Pierson Délégué à la qualité 27 octobre 2015 Approbation Marc Mortureux Directeur général 28 octobre 2015 Date d’application 28 octobre 2015 Nature de la modification Document initial Diffusion pour application Laboratoires Ce document est la propriété de l’Anses et ne peut être reproduit ou communiqué en dehors de l’Agence sans son autorisation. Seule la version informatique consultable sur l’intranet fait foi. ANSES/PR3/7/01 [version a] Page 2 sur 60 Sommaire Table des figures ...................................................................................................................... 4 Table des tableaux ................................................................................................................... 5 1. Avant-propos ................................................................................................................... 6 2 Contexte et objectifs du guide ....................................................................................... 6 3. Domaine d’application .................................................................................................... 7 3.1 Cycle de vie d’une méthode ............................................................................................. 7 3.2 Périmètre du guide ........................................................................................................... 8 4. Documents de référence ................................................................................................. 9 5. Glossaire ........................................................................................................................ 10 6. Démarche de validation ................................................................................................ 12 6.1 Expression du besoin (cahier des charges du client/prescripteur) .................................. 12 6.2 Caractérisation ............................................................................................................... 14 6.2.1 Caractérisation par approche modulaire ........................................................... 14 6.2.2 Approche globale versus approche par caractéristique par caractéristique ....... 15 6.2.3 Caractérisation absolue versus caractérisation relative .................................... 16 6.2.4 Caractérisation intra-laboratoire versus interlaboratoires .................................. 16 6.3 Validation .................................................................................................................... 17 7. Caractérisation des performances des méthodes ...................................................... 17 7.1 Prérequis statistiques ..................................................................................................... 17 7.1.1 Données qualitatives ........................................................................................ 17 7.1.1.1 Type de données ................................................................................... 17 7.1.1.2 Tableau de contingence ......................................................................... 18 7.1.2 Méthodes quantitatives ..................................................................................... 18 7.2 Les supports de caractérisation .................................................................................. 18 7.2.1 Types de supports de caractérisation ................................................................. 18 7.2.1.1 Qualité ................................................................................................... 18 7.2.1.2 Représentativité ..................................................................................... 19 7.2.2 Les supports de caractérisation « positifs » ...................................................... 20 7.2.3 Les supports de caractérisation « négatifs » ..................................................... 20 7.2.3.1 Les négatifs ou blancs ........................................................................... 20 7.2.3.2 Les analytes non cibles .......................................................................... 20 7.3 Caractéristiques de performance à déterminer selon le type de méthode ................... 21 7.4 Modalités pratiques de caractérisation ........................................................................ 22 7.4.1 Spécificité ......................................................................................................... 22 7.4.2 Sensibilité ......................................................................................................... 22 7.4.3 Fonction d’étalonnage/Efficacité (PCR) ............................................................ 23 7.4.4 Linéarité ............................................................................................................ 23 Ce document est la propriété de l’Anses et ne peut être reproduit ou communiqué en dehors de l’Agence sans son autorisation. Seule la version informatique consultable sur l’intranet fait foi. ANSES/PR3/7/01 [version a] Page 3 sur 60 7.4.5 Justesse ........................................................................................................... 23 7.4.6 Fidélité .............................................................................................................. 23 7.4.7 Répétabilité ....................................................................................................... 24 7.4.8 Fidélité intermédiaire ........................................................................................ 24 7.4.9 Reproductibilité ................................................................................................. 25 7.4.10 Exactitude ........................................................................................................ 25 7.4.11 Limites ............................................................................................................. 25 7.4.11.1 Limite de détection ............................................................................... 25 7.4.11.2 Limite de quantification ......................................................................... 26 7.4.12 Autres types de limites ..................................................................................... 26 7.5 Outils de calculs pour la validation .............................................................................. 26 8 Adéquation de la performance et validation ............................................................... 27 8.1 La démarche ............................................................................................................... 27 8.2 Modèle de méthode d’analyse .................................................................................... 27 8.3 Rapport de validation .................................................................................................. 27 9 Incertitude ...................................................................................................................... 28 10 Perspectives .................................................................................................................. 31 11 Références bibliographiques ....................................................................................... 31 Annexe « Membres du groupe GT Val 2 » ............................................................................ 32 Annexe « Bases statistiques pour les variables quantitatives».......................................... 33 Annexe « Spécificité » ............................................................................................................ 36 Annexe « Sensibilité » ............................................................................................................ 38 Annexe « Fonction d’étalonnage/Efficacité (PCR)» ............................................................. 39 Annexe « Justesse » .............................................................................................................. 41 Annexe « Fidélité » ................................................................................................................. 43 Répétabilité .......................................................................................................................... 43 Fidélité intermédiaire ............................................................................................................ 44 Reproductibilité .................................................................................................................... 44 Annexe « Exactitude » ........................................................................................................... 46 Exemple d’application : dosage de l’acrylamide dans le plasma de porc .............................. 48 Annexe « Limites » ................................................................................................................. 53 Limite de détection ............................................................................................................... 53 Limite de quantification ........................................................................................................ 56 Annexe « Incertitude » ........................................................................................................... 57 Utilisation de l’incertitude élargie dans la prise de décision .................................................. 57 Calcul d’incertitude .............................................................................................................. 58 Modélisation de l’incertitude ................................................................................................. 59 Ce document est la propriété de l’Anses et ne peut être reproduit ou communiqué en dehors de l’Agence sans son autorisation. Seule la version informatique consultable sur l’intranet fait foi. ANSES/PR3/7/01 [version a] Page 4 sur 60 Table des figures Figure 1 - Cycle de vie d’une méthode d’analyse 7 Figure 2 - Illustration des notions de séries, niveaux et répétitions 12 Figure 3 - Schéma de l’expression du besoin et de ses conséquences entre le client / laboratoire 13 Figure 4 - Illustration de la méthodologie de caractérisation des caractéristiques de performance étudiées séparément 15 Figure 5 - Illustration de la méthodologie de caractérisation des caractéristiques de performance basée sur un critère unique 16 Figure 6 - Composantes croissantes de la variabilité : répétabilité, fidélité intermédiaire et reproductibilité 24 Figure 7 - Processus d’évaluation de l’incertitude 28 Figure 8 - Principales sources d’incertitudes et chapitres correspondants dans la norme NF EN ISO/CEI 17025 29 Figure 9 - Exemple d’informations fournies par une représentation graphique « box plot » 33 Figure 10 - Exemple de variances non homogènes 34 Figure 11 - Choix du facteur de pondération (w) en fonction de la relation entre la variance et le niveau de concentration 34 Figure 12 - Hypothèses statistiques requises pour les variables quantitatives 35 Figure 13 - Exemple de distributions de résidus (valeurs trouvées - valeurs attendues) obtenues pour différents modèles d’étalonnage 40 Figure 14 - Exemple de droite de justesse et son intervalle de confiance 42 Figure 15 – Illustration d’un profil d’exactitude 47 Figure 16 – Dosage d’acrylamide dans le plasma de porc : données brutes observées 49 Figure 17 - Profil d’exactitude réalisé avec les données brutes 50 Figure 18 - Droite de régression entre les concentrations introduites et les concentrations en retour 50 Figure 19 - Profil d’exactitude réalisé avec les données corrigées 51 Figure 20 - Importance de l’incertitude dans la prise de décision 57 Figure 21 - Modélisations par une fonction puissance du profil d’incertitude 60 Ce document est la propriété de l’Anses et ne peut être reproduit ou communiqué en dehors de l’Agence sans son autorisation. Seule la version informatique consultable sur l’intranet fait foi. ANSES/PR3/7/01 [version a] Page 5 sur 60 Table des tableaux Tableau 1 - Synthèse des résultats obtenus sous forme de tableau de contingence 18 Tableau 2 - Caractéristiques de performance à déterminer pour les méthodes qualitatives et les méthodes quantitatives 21 Tableau 3 - Synthèse tabulaire des caractéristiques de performances, de leurs valeurs prédéterminées, de leurs valeurs obtenues et de la décision sur leur validité 27 Tableau 4 - Synthèse des résultats obtenus lors de l’étude de caractérisation des performances 36 Tableau 5 - Intervalle de confiance à 95% d’un pourcentage de Sp 37 Tableau 6 Synthèse des résultats obtenus lors de l’étude de caractérisation des performances 38 Tableau 7 - Modèles usuels de fonctions d’étalonnages, calcul du modèle inverse, nombre minimal de niveau nécessaires, de répétitions par niveaux et nombre minimal de séries pour établir ce modèle 39 Tableau 8 - Différentes expressions de la justesse 41 Tableau 9 - Résultats des calculs du profil d’exactitude après correction des données brutes 52 Tableau 10 - Nombre de répétitions positives par niveau 54 Tableau 11 - Ensemble des performances obtenues pour déterminer les teneurs d’acrylamide dans le plasma de porc 59 Ce document est la propriété de l’Anses et ne peut être reproduit ou communiqué en dehors de l’Agence sans son autorisation. Seule la version informatique consultable sur l’intranet fait foi. ANSES/PR3/7/01 [version a] Page 6 sur 60 1. Avant-propos Le présent guide a été rédigé par le groupe de travail « GT Val 2» constitué sur décision du directeur général n°2013/005. Les participants sont listés dans l’annexe « Membres du groupe GT Val 2 ». Dans le cadre de ce GT, une attention particulière a été donnée à la représentation de chacun des domaines d’activité de l’Agence. Ce guide est destiné à l’usage des laboratoires de l’Anses dans le cadre des travaux de développement, d’adaptation ou d’optimisation de méthodes d’analyse résultant de leurs missions de laboratoires de référence nationaux ou de l’Union européenne. Ce guide donne des lignes directrices générales sur le processus de validation d’une méthode, propose des modalités pratiques de caractérisation des performances, en présentant pour chaque caractéristique des exemples concrets. Ce guide ne se substitue pas aux référentiels réglementaires ou normatifs applicables aux différents domaines d’activité de l’Agence et utilisés dans les laboratoires. Pour l’élaboration de ce document et conformément à son mandat, le groupe de travail s’est attaché à prendre en compte les différents types de méthodes (qualitative et uploads/Management/ guide-de-validation.pdf