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Création du document : 02 Mars 2022 Nom Fonction Date et Signature Auteur(s) FO

Création du document : 02 Mars 2022 Nom Fonction Date et Signature Auteur(s) FOLLY Yao Anani Surveillant du laboratoire Vérificateur(s) Personne validant le document Evolution du document Versio n Date d’application Modification faite par Modifications opérées par rapport à version précédente HÔPITAL STE JOSEPHINE BAKHITA 13 B.P. 119 Agoé-Kové Route de Mission Tové Tel : 00228-70-47-06-62 PROCEDURE DE DOSAGE DE L’UREE Page Codification : Indice de révision : Date d’application. : Lieu : Distribution : Version : Annexe : Table des matières 1- Objectifs et portée.......................................................................................................................3 2- Abréviations et définitions..........................................................................................................3 3- Tâches, autorisations et responsabilités......................................................................................3 4- Principe......................................................................................................................................3 5- Sécurité et environnement..........................................................................................................3 6- Échantillon :...............................................................................................................................3 7- Équipements et fournitures.........................................................................................................4 8- Réactifs et produits chimiques....................................................................................................4 9- Contrôle de la qualité..................................................................................................................4 10- Mode opératoire......................................................................................................................4 11- Valeurs de référence :.............................................................................................................5 12- Interférences...........................................................................................................................5 13- Valeurs critiques.....................................................................................................................6 14- Formulaires connexes.............................................................................................................6 15- Références..............................................................................................................................6 16- Pièces jointes..........................................................................................................................6 HÔPITAL STE JOSEPHINE BAKHITA 13 B.P. 119 Agoé-Kové Route de Mission Tové Tel : 00228-70-47-06-62 PROCEDURE DE DOSAGE DE L’UREE Page Codification : Indice de révision : Date d’application. : Lieu : Distribution : Version : Annexe : 1- Objectifs et portée Cette procédure vise à décrire les différentes étapes du dosage de l’urée dans le plasma, le sérum et dans l’urine. 2- Abréviations et définitions CIQ : Contrôle Interne de Qualité SL : Surveillant du laboratoire RQ : Responsable Qualité UV : Ultraviolet 3- Tâches, autorisations et responsabilités Tâche Autorisé Responsable Démarrage du spectrophotomètre et maintenance quotidienne RQ, SL SL Mesure à blanc RQ, SL SL Préparation des réactifs RQ, SL SL Préparation des sérums de contrôle RQ, SL SL Passage des contrôles et validation des contrôles RQ, SL SL Passage des échantillons RQ, SL SL Validation analytique RQ, SL SL 4- Principe Méthode enzymatique UV basée sur la réaction décrite par Talke et Schubert et optimisée par Tifany et al. Le schéma de la réaction est la suivante: Urée + H2O + 2H + Urease 2NH3 + CO2 NH3 + Oxoglutarate + NADH + H+ GLDH Glutamate + NAD+ + H2O HÔPITAL STE JOSEPHINE BAKHITA 13 B.P. 119 Agoé-Kové Route de Mission Tové Tel : 00228-70-47-06-62 PROCEDURE DE DOSAGE DE L’UREE Page Codification : Indice de révision : Date d’application. : Lieu : Distribution : Version : Annexe : La diminution de l’absorbance due à la conversion du NADH en NAD+ mesurée pendant un temps donné à 340 nm est proportionnelle à la concentration en urée dans le spécimen 5- Sécurité et environnement - Utiliser les équipements de protection (Gant, blouse, lunettes) - Rincer abondamment à l’eau en cas de contact avec la peau ou les yeux. - Respect la procédure de tri et de gestion des déchets Par mesure de sécurité, tous échantillon doit être traité comme potentiellement infectieux 6- Échantillon : Matériel Quantité minimale Stabilité Sérum, Plasma (hépariné) 50 µl 5 jours 2 et 8° C ; 3 mois à – 20 °C Urine diluée (1/20) 50 µl 4 jours 2 et 8° C 7- Équipements et fournitures Consommable Embouts de pipette, 10-100 µl Embouts de pipette, 100-1000 µl Tube à hémolyse Matériel et équipement : Spectrophotomètre Micropipette 10-100 µl Micropipette 100-1000 µl 8- Réactifs et produits chimiques Désignation Réactif Conditions de stockage Lieu de stockage Flacon R1 Tampon Tris 2 à 8 ° C Réfrigérateur Flacon R2 Enzyme Coenzyme 2 à 8 ° C Réfrigérateur Flacon R3 (Etalon primaire) 0,40 g/l 2 à 8 ° C Réfrigérateur Sérum de contrôle normal Sérum -10 à 20 °C Réfrigérateur Sérum de contrôle pathologique Sérum -10 à 20 °C Réfrigérateur - Préparation de la solution de travail : Verser le contenu du flacon R2 dans le flacon R1, mélanger doucement jusqu’à dissolution complète (2 minutes environ). HÔPITAL STE JOSEPHINE BAKHITA 13 B.P. 119 Agoé-Kové Route de Mission Tové Tel : 00228-70-47-06-62 PROCEDURE DE DOSAGE DE L’UREE Page Codification : Indice de révision : Date d’application. : Lieu : Distribution : Version : Annexe : 9- Contrôle de la qualité Faire au moins un contrôle de qualité (Sérum de contrôle normal, sérum de control pathologique) dans chaque série ou au moins par 24 heures. Procédure de contrôle qualité 10- Mode opératoire o Enregistrement et étiquetage : Les échantillons sont enregistrés après avoir vérifié leurs conformités. o Centrifugation et décantation : Centrifuger à 4000 tours pendant 10 minutes puis décanter le sérum. o Préparation de la liste de travail : Faire la liste de travail o Ramener les réactifs à la température du Laboratoire et préparer les réactifs si nécessaire o Démarrage du spectrophotomètre et maintenance quotidienne : rinçage de la cuve avec l’eau distillée. Vérifier l’état de la cuve de lecture en faisant une mesure à blanc. Le blanc consiste mesurer la densité optique de l’eau distillée. o Dosage des échantillons : Le dosage des échantillons est fait comme l’indique le tableau ci-dessous Blanc Etalon Dosage Solution de travail 1ml 1ml 1ml Eau déminéralisée 10 µl Etalon 10 µl Spécimen 10 µl Bien mélanger. Après 30 secondes, enregistrer l’absorbance A1 à 340 nm contre l’eau distillée. Exactement 90 seco après la première lecture, lire l’absorbance A2 Il est impératif de valider les résultats des sérums de contrôle normal et pathologique avant d’analyser chaque série d’échantillon. o Calcul Résultat : |dosage|( A2−A1 )×Concentration étalon |Etalon|( A2−A1) HÔPITAL STE JOSEPHINE BAKHITA 13 B.P. 119 Agoé-Kové Route de Mission Tové Tel : 00228-70-47-06-62 PROCEDURE DE DOSAGE DE L’UREE Page Codification : Indice de révision : Date d’application. : Lieu : Distribution : Version : Annexe : o Validation technique : Elle consiste à vérifier le bon déroulement des différentes phases de réalisation des analyses et surtout de la validité des CIQ. o Intervalle de mesure : 0,11g/l – 3 g/l, diluer au 1/5 avec du sérum physiologique si la valeur est supérieur à 3 g/l. o Facteur de conversion g/lx 16, 67 = mmol/l 11- Valeurs de référence Urée : 0,15-0,45 g/l 12- Interférences Bilirubine : Pas d’interfèrent jusqu’à 300 mg/l 13- Valeurs critiques Urée > 2 g/l 14- Formulaires connexes - Fiche de paillasse - Fiche de gestion des CIQ : 15- Références - Normes ISO 15189 - Fiche technique du réactif du dosage de l’urée BIOLABO Ref : 99132,99032. 16- Pièces jointes Fiche technique de la notice de réactif en cours d’utilisation HÔPITAL STE JOSEPHINE BAKHITA 13 B.P. 119 Agoé-Kové Route de Mission Tové Tel : 00228-70-47-06-62 PROCEDURE DE DOSAGE DE L’UREE Page Codification : Indice de révision : Date d’application. : Lieu : Distribution : Version : Annexe : uploads/Management/ procedure-du-dosage-uree.pdf