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Université Mouloud Mammeri de Tizi-Ouzou Faculté de Médecine Département de pha

Université Mouloud Mammeri de Tizi-Ouzou Faculté de Médecine Département de pharmacie Laboratoire d’hémobiologie TP N °5 épreuve direct de compatibilité au laboratoire(EDC) 1. Introduction : L’EDC au laboratoire des PSL est fondamentale pour la prévention des accidents Immuno- hématologiques de transfusion sanguine. C’est un examen complémentaire de la RAI qui n’est pas systématique. L’EDC est destinée pour : ●Un receveur possédant un ou plusieurs anticorps irréguliers surtout sils n’ont pas pu être détectés par la RAI ●Nouveau né possédant un TCD+ ou issu d’une maman allo immunisé ●Le fœtus ou patients ayants des phénotypes rares. 2. Principe : L’épreuve de compatibilité n’est qu’une RAI effectuée sur le sérum du malade qui va recevoir une transfusion, en présence de globules rouges des unités de sang à transfuser. Elle doit donc s’effectuer comme la recherche d’Ac, au laboratoire, et avec les mêmes garanties techniques. Le principe de la méthode est simple. A l’aide d’une gamme d’hématies tests détectrice (sang du donneur), dont la constitution est connue, on cherche à dépister puis à identifier un anticorps ou un mélange d’anticorps dans le sérum du patient. 3. Matériels et Réactifs ●Tubes à essai ●Microplaque ●Centrifugeuse ●Eau physiologique à 0,9% ●Enzyme (papaine) ●Antiglobuline ●Sérum du malade 4. Techniques : L’EDC doit être réalisé ou moins par les deux tests obligatoires de la RAI : TCI et test aux enzymes protéolytiques A. Test aux enzymes (exemple : papaïne): 1. Technique sur tube : ▪ laver le culot globulaire trois fois en solution physiologique ▪ ajouter à un volume du culot lavé, un même volume de papaine et incuber le mélange pendant 15min dans l’étuve. ▪ relaver trois fois les hématies traitées à l’eau physiologique puis préparer une suspension à 5%. ▪ Ajouter à un volume de la suspension, un volume de sérum à étudier. Laisser incuber 40min à 37°c. ▪ Lire le résultat de la réaction. 1 2. Technique sur microplaque : Ajouter à un volume d’hématies papainées, deux volumes du sérum du malade et procéder de la même manière que précédemment. B. Test de Coombs indirect 1. Technique sur tube : ▪Laver les hématies du culot à l’eau physiologique puis préparer une suspension à 5%. ▪ Mettre dans un tube un volume de la suspension globulaire avec un volume du sérum à tester. ▪ Laisser incuber 1h à 37°c et relaver les hématies sensibilisées trois fois à l’eau physiologique. ▪ Ajouter à une goutte d’hématies sensibilisées, une goutte d’antiglobuline, puis centrifuger à faible vitesse pendant 1min. ▪ Effectuer une lecture macro et microscopique. C. Test d’agglutination en milieu salin +4 +22°c : 1. Technique sur tube : ▪Laver trois fois le culot globulaire à l’eau physiologique, puis préparer avec les hématies lavées une suspension à 5%. ▪Mettre dans un tube une goutte de la suspension et deux gouttes du sérum à tester. ▪Incuber 1h30min a +4 + 22°c ▪Effectuer une lecture microscopique après étalement sur lame. 2. Technique sur microplaque : Mettre 20µl d’hématies en suspension à 5% avec 40µl du sérum à tester et procéder de la même manière que précédemment. 5. Résultats : En absence de toute réactivité, la poche est déclaré compatible. En cas de réaction positive l’unité est déclarée incompatible.il faut tester d’autres unités de sang. 2 uploads/Philosophie/ tp-n-05-epreuve-direct-de-compatibilite-au-laboratoire-edc.pdf